延安地區(qū)成年男性ALDH2基因多態(tài)性與酒精性肝病關(guān)系探討

李倩楠　戴光榮　劉發(fā)學(xué)　曹少華　馬杈

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·臨床與基礎(chǔ)研究·

延安地區(qū)成年男性ALDH2基因多態(tài)性與酒精性肝病關(guān)系探討

李倩楠戴光榮劉發(fā)學(xué)曹少華馬杈

目的探討乙醛脫氫酶(ALDH)2基因多態(tài)性與延安地區(qū)成年男性酒精性肝病(ALD)的關(guān)系。方法應(yīng)用基因芯片方法測定健康對照組(76例)、ALD組(36例)和非酒精性脂肪肝病組(NAFLD)(73例)ALDH2基因型及等位基因頻率，進(jìn)行比較。結(jié)果兩種等位基因ALDH2 504Glu和ALDH2 504Lys在3組之間的分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。ALDH2的3種基因型在健康對照組、ALD組和NAFLD組之間的分布均存在一定差異(P均<0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論ALDH2基因多態(tài)性和本地區(qū)ALD的發(fā)生密切相關(guān)，ALDH2 504Lys等位基因可能是ALD的保護(hù)因子。

酒精性肝??；乙醛脫氫酶；基因多態(tài)性；基因芯片

酒精性肝病(ALD)病因明確，但發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，危險(xiǎn)因素眾多。雖然ALD發(fā)病與飲酒量、飲酒時(shí)間及酒精飲料的品種有相關(guān)性，但肝損害的程度與乙醇的消耗量并無顯著相關(guān)。據(jù)報(bào)道，同卵雙生子同患ALD的幾率比異卵雙生子高2倍，表明遺傳差異可能是飲酒者對ALD易感性的基礎(chǔ)[1]。本文就延安地區(qū)成年男性ALD與ALDH2的易感性做相關(guān)研究。

資料和方法

一、研究對象

所選對象均為延安地區(qū)漢族男性居民，且在本地居住5年以上，年齡在18～69歲，所有研究均征得研究對象同意。(1)健康對照組76例：選自本院體檢中心，無肝病史，無飲酒史或偶飲少量低度酒。(2)NAFLD組73例：來自本院住院患者，均符合NAFLD診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。(3)ALD組36例：選自本院住院患者，依據(jù)ALD診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

二、實(shí)驗(yàn)室檢測

空腹抽取外周靜脈血2 mL，EDTA抗凝，用DNA純化試劑盒(上海百傲科技股份有限公司)提取全基因組DNA。DNA濃度為10～60 ng/μL，A260/A280比值在1.5～2.0。將已純化的DNA作為擴(kuò)增模板，加入ALDH2擴(kuò)增液放入PCR儀中。PCR反應(yīng)條件為：50℃ 5 min; 94℃ 5 min;94℃ 25 s,60℃ 25 s,72℃ 30 s,35循環(huán);72℃ 5 min;產(chǎn)物2～8℃保存。取出基因芯片，放入Baio全自動雜交儀(Array Doctor 2.0)中，獲得的芯片雜交結(jié)果圖像，用Baio基因芯片圖像分析軟件，輸出檢測結(jié)果。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件。不同組基因型頻率比較采用卡方檢驗(yàn),α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

結(jié)　　果

ALDH2基因型及等位基因頻率分布情況見表1。

表1　ALDH2基因型及等位基因頻率[n(%)]

注：G504G代表ALDH2 Glu504Glu基因型，G504L代表 ALDH2 Glu504Lys基因型，L504L代表ALDH2 Lys504Lys基因型

表1顯示，ALDH2 504Glu等位基因頻率在健康對照組、NAFLD組和ALD組分別為57.25%、53.4%和87.5%；ALDH2 504Lys等位基因頻率在以上3組中分別是42.75%、46.6%、12.5%。2種基因在3組之間的分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。ALDH2的3種基因型在3組之間的分布均存在一定差異(P<0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

討　　論

余靜等[4]指出，遺傳基因多態(tài)性在ALD的發(fā)生和發(fā)展中扮演著越來越重要的角色。ALDH2是乙醇代謝途徑中關(guān)鍵酶之一，ALDH2 504Glu為野生型隱性等位基因，具有ALDH2酶的活性，ALDH2 504Lys為突變型顯性等位基因，不具有酶的活性。在亞洲黃種人群中，ALDH2 504Lys突變型普遍存在。研究顯示[5]，ALDH2 504Lys能在一定程度上抑制其攜帶者對酒精的依賴，并與過量飲酒相關(guān)的酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌等疾病之間存在密切聯(lián)系。

文獻(xiàn)報(bào)道[6,7]，ALDH2 504Lys在各族人群中的分布是不同的，在歐美人群中攜帶率極低，但在亞洲人種中發(fā)生頻率較高。本研究資料中，純合子ALDH2 504Lys在ALD患者中的檢出率為0，ALDH2 504Lys等位基因的頻率在ALD組(12.5%)明顯低于健康對照組(42.75%)，ALDH2 504Lys基因型者酒精依賴和ALD發(fā)病率明顯低于健康人群。與多數(shù)學(xué)者[8,9]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致，ALDH2基因多態(tài)性存在種族和地域差異，攜帶ALDH2 504Lys者飲酒后，乙醇氧化后的產(chǎn)物乙醛由于未被及時(shí)清除，在體內(nèi)蓄積，致使個(gè)體出現(xiàn)臉紅、心悸、出汗、頭痛、嘔吐、蕁麻疹等不適，在一定程度上促使該基因攜帶者停止繼續(xù)飲酒，改變飲酒行為，表明ALDH2 504Lys等位基因可能是酒精中毒和ALD的負(fù)性相關(guān)因子，ALDH2 504Lys基因型者多不善飲，可防止ALD的發(fā)生，而雜合子ALDH2 Glu504Lys可能更易導(dǎo)致ALD的發(fā)生。ALDH2基因多態(tài)性與延安地區(qū)成年男性ALD的發(fā)生密切相關(guān)，ALDH2 504Lys等位基因可能是ALD的保護(hù)因子。

現(xiàn)已公認(rèn)，ALD是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率的主要原因，而當(dāng)前系統(tǒng)、有效的治療方法相對缺乏。遺傳因素對ALD影響的作用機(jī)制繁雜，很難被完全揭露和證實(shí)。本研究僅僅探討了ALDH2基因與ALD的關(guān)系，僅占遺傳因素的一小部分，乙醇脫氫酶及細(xì)胞色素P450 2E1的基因多態(tài)性也與ALD息息相關(guān)。王洪巖等[10]指出，TNF-α基因啟動子、CD14內(nèi)毒素受體基因及DNA修復(fù)基因，及變異基因(PNPLA3)也是近年研究的熱點(diǎn)。

總之，延安地區(qū)成年男性的ALDH2的基因多態(tài)性與ALD的發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)，由于影響ALD的危險(xiǎn)因素在不同種族、不同個(gè)體之間存在差異，因此，將不同基因多態(tài)性和遺傳因素深入研究，聯(lián)合作用，將為ALD基礎(chǔ)研究和臨床防治提供重要意義。

[1]Stickel F，Hampe J．Genetic determinants of alcoholic liver disease. Gut，2012，61:150-159.

[2]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組.非酒精性脂肪性肝病診療指南(2010年修訂版).胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2010，19:483-488.

[3]中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組.酒精性肝病診療指南(2010年修訂版).中華肝臟病雜志，2010，18:163-166.

[4]余靜，易斌，馮佳，等.酒精性肝病危險(xiǎn)因素研究進(jìn)展.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2016，25:112-114.

[5]裘麗珍，鐘文濤，龔興國.人乙醛脫氫酶2基因*1/*2多態(tài)性與酒精性疾病.醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志，2007，4:164-167.

[6]王瑢，何震宇，陳亮明.酒精代謝關(guān)鍵酶乙醛脫氫酶2基因分型方法研究進(jìn)展.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，29:682-685.

[7]楊春曉，張玉，師少軍.SNP基因分型檢測技術(shù)及應(yīng)用進(jìn)展.中國藥師，2013，16，811-816.

[8]Tseng YM， Tsai SM， Chen SY， et al． Roles of the genetic polymorphisms of alcohol-metabolizing enzymes on the immunology in high risk drinkers．Toxicol Sci，2009，111:267-276.

[9]Liu Y， Zhou LY，Meng XW．Genetic polymorphism of two enzymes with alcoholic liver disease in Northeast China．Hepatogastroenterology， 2012，59:204-207.

[10]王洪巖，李鑫，徐有青.酒精性肝病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展.實(shí)用肝臟病雜志，2014，17:5-8.

(本文編輯：易玲)

陜西省延安市科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號：2015HM-13)

716000陜西延安大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科(李倩楠，戴光榮，馬杈)；體檢科(劉發(fā)學(xué))；藥劑科(曹少華)

戴光榮，Email:daiguangrong6810@sina.cn

2016-03-24)