自動(dòng)免疫組化染色與人工染色對(duì)CerbB—2的影響

陳國(guó)艷+盧翔宇+陳瑩瑩+劉遠(yuǎn)歡

【摘要】目的：觀察在全自動(dòng)免疫組化染色和人工操作中對(duì)CerbB-2的影響。方法：選取34例乳腺癌免疫化組病例標(biāo)本為研究對(duì)象，采用CerbB-2一抗，使用全自動(dòng)免疫組化染色和人工操作兩種方面進(jìn)行免疫組化染色，對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果，以此分析和探討兩種方法的優(yōu)勢(shì)和不足。結(jié)果：CerbB-2應(yīng)用于全自動(dòng)免疫組化染色和人工染色過(guò)程中，手工免疫組化染色結(jié)果背景淺、較強(qiáng)特異性、有邊緣效應(yīng)、著色不均、陽(yáng)性定位不佳，而全自動(dòng)免疫組化染色背景清晰、特異性較強(qiáng)、無(wú)邊緣效應(yīng)、著色均勻，且陽(yáng)性定位準(zhǔn)確，與手工免疫組化染色相比較，優(yōu)勢(shì)明顯。結(jié)論：CerbB-2在全自動(dòng)免疫組化染色和人工操作中應(yīng)用，全自動(dòng)免疫組化染色總體優(yōu)勢(shì)較多，標(biāo)準(zhǔn)化程度優(yōu)良，提示全自動(dòng)免疫組化染色可廣泛應(yīng)用于臨床病理診斷。

【關(guān)鍵詞】 CerbB-2；全自動(dòng)免疫組化染色；人工操作；病理診斷

【中圖分類號(hào)】R446.62 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）16-0090-03

Abstract： Objective To investigate the effect CerbB-2 application in automated immunohistochemical staining and manual operation. Methods 34 cases of breast cancer patients immunized samples for the study， using CerbB-2 antibody， immunohistochemical staining， comparative test results using automated immunohistochemical staining and manual two kinds of aspects， in order to analyze and explore the advantages and disadvantages of the two methods. Results CerbB-2 used in automatic and manual immunohistochemistry staining process， manual immunohistochemical staining background light， strong specificity， there are edge effects， uneven coloring， poor positive positioning and automatic immunity staining clear background， strong specificity， no edge effects， color uniformity， and the positive positioning accuracy compared with manual immunohistochemical staining， have obvious advantages. Conclusion CerbB-2 immunohistochemical staining in automatic and manual applications， automated immunohistochemistry overall benefit more excellent degree of standardization， prompt automatic immunohistochemical staining can be widely used in clinical pathology.

Keywords：CerbB-2； Automatic Immunohistochemistry； Manual Operation； Pathological Diagnosis

免疫組化技術(shù)是廣泛應(yīng)用于臨床病理鑒別診斷的一種現(xiàn)代化科學(xué)手段，在評(píng)估腫瘤預(yù)后及耐藥監(jiān)測(cè)等諸多方面發(fā)揮著重要作用。但是在實(shí)際人工操作過(guò)程中，操作者個(gè)體手法、天氣、環(huán)境、方法及時(shí)間等不可控制因素均會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，從而難以取得穩(wěn)定的結(jié)果。全自動(dòng)免疫組化染色儀的應(yīng)用彌補(bǔ)了人工操作的不足，利于測(cè)定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化，近些年來(lái)一些醫(yī)院病理科也逐步將這項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于臨床[1]?；诖搜芯勘尘埃敬窝芯糠謩e采用全自動(dòng)免疫組化染色和人工操作對(duì)檢測(cè)標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果，以此分析和探討兩種方法的優(yōu)勢(shì)和不足?，F(xiàn)將本次研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月至2016年1月期間我院病理科收集的乳腺癌免疫化組病例標(biāo)本（包括手術(shù)切除標(biāo)本和活檢小標(biāo)本）共34例，均由Fish確定為++以上的病例，標(biāo)本均為4μm的石蠟切片。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器與設(shè)備 Benchmark GX全自動(dòng)免疫組化染色儀、CerbB-2均由邁新公司提供，全自動(dòng)免疫組化染色其余試劑均由羅氏公司提供，人工操作試劑全由邁新公司提供。

1.2.2 檢測(cè)方法 每份標(biāo)本切2張，厚3μm，分A、B組，65℃烤片1h。A組用BenchMark GX進(jìn)行染色，一次20張玻片。具體操作如下：①打開電腦和機(jī)器，雙擊“ventana”，點(diǎn)擊“PROTOCOLS”，選好染色方案，錄入病理號(hào)，打印標(biāo)簽，將玻片貼好標(biāo)簽，放入機(jī)器的玻片操控臺(tái)；②裝上DAB試劑盒（由北京諾博萊科技有限公司供應(yīng)）、蘇木素（由上海寶曼生物科技有限公司供應(yīng)）、靛藍(lán)試劑瓶（由徐州誠(chéng)裕玻璃制品有限公司供應(yīng)）；③檢查1號(hào)液（脫蠟清洗緩沖液）、2號(hào)液（封蓋清洗緩沖LCS）、3號(hào)液（氯化鈉檸檬酸鈉清洗緩沖液）、4號(hào)液（清洗緩沖液）、5號(hào)液（細(xì)胞前處理清洗緩沖液）試劑量是否足夠，廢液瓶低水位。上述5種溶液均購(gòu)于美國(guó)Fisher；④點(diǎn)擊“Run”，填好玻片數(shù)，確定即可開始運(yùn)行；⑤程序結(jié)束后，收齊玻片，用含少量洗潔精的自來(lái)水清洗玻片，再用自來(lái)水洗干凈，常規(guī)脫水、透明封片。B組用人工操作進(jìn)行免疫組化染色，常規(guī)脫蠟，檸檬酸鹽微波熱修復(fù)，Envision二步法，復(fù)染，鏡下觀察。

2 結(jié)果

切片染色結(jié)果顯示：與手工免疫組化染色相比較，全自動(dòng)免疫組化染色背景清晰，無(wú)邊緣效應(yīng)，著色均勻，且陽(yáng)性定位準(zhǔn)確，優(yōu)勢(shì)明顯。對(duì)比情況詳見表1及圖1。

3 討論

近些年來(lái)，免疫組化技術(shù)因其在良惡性腫瘤的診斷和鑒別中具有較高特異性、敏感性而受到重視，其深入研究和推廣運(yùn)用為臨床疾病的診斷和治療提供了強(qiáng)有力依據(jù)。但是隨著免疫組化技術(shù)應(yīng)用范圍的拓延，及其它診斷技術(shù)的開發(fā)和運(yùn)用，免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題難以解決成為了阻礙其臨床應(yīng)用和發(fā)展的主要因素[2-3]。既往多數(shù)研究資料表明，免疫組化技術(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果極易受操作者個(gè)體手法、溫度、天氣、環(huán)境、方法及時(shí)間等外界因素的干擾、影響，從而出現(xiàn)試驗(yàn)誤差，質(zhì)量控制難以保證，且手工操作工作效率低，劣勢(shì)明顯[4-5]。

本次研究以常用診斷用抗體CerbB-2為一抗，分別采用使用全自動(dòng)免疫組化染色和人工操作兩種方面進(jìn)行免疫組化染色。結(jié)果顯示：手工免疫組化染色具有背景淺、較強(qiáng)特異性、有邊緣效應(yīng)、著色不均、陽(yáng)性定位不準(zhǔn)確的特點(diǎn)，而全自動(dòng)免疫組化染色背景清晰、特異性較強(qiáng)、無(wú)邊緣效應(yīng)、著色均勻，且陽(yáng)性定位準(zhǔn)確，兩者結(jié)果比較，全自動(dòng)免疫組化染色優(yōu)勢(shì)明顯，與肖剛等學(xué)者研究結(jié)果一致[6]。提示全自動(dòng)免疫組化染色優(yōu)勢(shì)顯著，標(biāo)準(zhǔn)化程度優(yōu)良，可廣泛應(yīng)用于病理診斷臨床。

筆者結(jié)合本次研究結(jié)果及多年臨床工作經(jīng)驗(yàn)，將全自動(dòng)免疫組化染色儀的優(yōu)勢(shì)予以歸納總結(jié)。①Benchmark GX全自動(dòng)免疫組化染色儀可由一臺(tái)微主機(jī)附帶多臺(tái)子機(jī)[7-8]，設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)化的染色流程，全自動(dòng)運(yùn)行，并可過(guò)夜處理，節(jié)省人力成本，提高工作效率，具有良好的重復(fù)性；②Benchmark GX全自動(dòng)免疫組化機(jī)采用了獨(dú)立溫控技術(shù)，使每一個(gè)項(xiàng)目均可實(shí)現(xiàn)個(gè)性化的染色方案（同一輪染色可采用不同的抗原修復(fù)/一抗時(shí)間/溫度等）；③Benchmark GX全自動(dòng)免疫組化染色儀采用噴射式清洗技術(shù)，使每次清洗非常徹底，減少了非特異性著色。并且使用了液體封蓋膜技術(shù)及空氣渦流混勻技術(shù)，使試劑均勻的分布到整張玻片上，又因油膜的覆蓋防止了試劑蒸發(fā)而干片的可能，從而減少了背景著色，提升了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性；④它使用了環(huán)保型脫蠟液和LCS，不使用二甲苯等有毒試劑，極大減少對(duì)人體的傷害；⑤Benchmark GX全自動(dòng)免疫組化染色儀除可進(jìn)行全自動(dòng)免疫組化染色，還可進(jìn)行多種實(shí)驗(yàn)方案，如：ISH、DISH、FITC。由此可見，全自動(dòng)免疫組化染色和人工染色相比較，前者運(yùn)用優(yōu)勢(shì)更為顯著；⑥全自動(dòng)免疫組化染色儀切片染色結(jié)果無(wú)邊緣效果、著色均勻。

近些年來(lái)，隨著病理檢測(cè)要求的提升，臨床病理學(xué)對(duì)于病理檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制也提出了更高要求。2000年，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織已經(jīng)明確雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）免疫組織化學(xué)染色的質(zhì)量體系，明確了臨床病理診斷和疾病鑒別中的免疫組化技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化要求。提升免疫組化技術(shù)的準(zhǔn)確性和標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)于CerbB-2在全自動(dòng)免疫組化染色和人工操作中應(yīng)用具有指導(dǎo)意義。

綜上所述，與手工免疫組化染色相比較，CerbB-2在全自動(dòng)免疫組化染色中的運(yùn)用，染色背景清晰，無(wú)邊緣效應(yīng)，著色均勻，陽(yáng)性定位準(zhǔn)確，且較之于人工操作，具有省時(shí)省力及操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，優(yōu)勢(shì)明顯。在病理學(xué)界倡導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)化及質(zhì)量控制的社會(huì)環(huán)境下，全自動(dòng)免疫組化染色技術(shù)可作為臨床病理診斷方法得以廣泛運(yùn)用。

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（編輯：程鵬飛）