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    青花菜花球及葉片中硫代葡萄糖苷組分及含量分析

    2016-10-20 15:28:01馬越丁云花劉光敏
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年7期
    關(guān)鍵詞:青花菜花球葉片

    馬越 丁云花 劉光敏

    摘要:對12個青花菜(Brassica oleracea L. var. botryti L.)品種的花球及葉片中的硫苷含量及組成進(jìn)行了分析測定,結(jié)果表明,青花菜中含有9種硫代葡萄糖苷,分別為3-甲基硫氧烯丙基硫苷(IBE)、2-羥基-3-丁烯基硫苷(PRO)、2-丙烯基硫苷(SIN)、4-甲硫基-3-丁烯基硫苷(RAA)、3-丁烯基硫苷(NAP)、4-羥基吲哚基-3-甲基硫苷(4OH)、3-甲基吲哚基硫苷(GBC)、4-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷(4ME)、1-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷(NEO)。青花菜花球中的硫苷含量是葉片中的1~5倍不等,不同品種之間存在差異性。RAA是青花菜中含量最多的硫苷組分。

    關(guān)鍵詞:青花菜;花球;葉片;硫代葡萄糖苷

    中圖分類號: S635.301 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號:1002-1302(2016)07-0300-04

    青花菜(Brassica oleracea L. var. botryti L.)屬于十字花科蕓薹屬甘藍(lán)種的變種,為一、二年生草本植物。硫代葡萄糖苷(glucosinolates,GLS,簡稱硫苷)是一類含硫化合物,是十字花科蔬菜中重要的次生代謝產(chǎn)物。所有的十字花科植物都能夠合成硫代葡萄糖苷,硫代葡萄糖苷存在于這些植物的根、莖、葉、種子中[1]。由于側(cè)鏈R 基團的不同,可把硫苷分為脂肪類、芳香類、吲哚類硫苷3類。硫代葡萄糖苷及其降解產(chǎn)物具有多種生物活性、化學(xué)活性,硫代葡萄糖苷已被證實與十字花科蔬菜的風(fēng)味及營養(yǎng)成分、植物自我保護機制以及人類的身體健康有著密切關(guān)系。蔬菜在被食用或機械破碎時,其中所含的硫苷被內(nèi)源芥子酶水解成多種具有生理活性的降解產(chǎn)物,產(chǎn)物之一的異硫氰酸酯能夠有效預(yù)防癌癥,尤其是膀胱癌、結(jié)腸癌和肺癌[2-4]。青花菜富含3-甲基硫氧烯丙基硫苷(glucoiberin)、4-甲基硫氧丁基硫苷(glucoraphanin)、3-甲基吲哚基硫苷(glucobrassicin)以及1-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷(neoglucobrassicin)[5]。英國科學(xué)家已選育出高硫苷含量的青花菜新品種,該品種的抗癌能力是普通青花菜的80 倍[4,6]。不同蔬菜種類或同一蔬菜種類的不同品種、不同生長環(huán)境以及同一植株的不同生長階段、同一植株的不同部位硫苷的含量及組分都存在差別[7-10]。本研究對我國市場上常見的12個青花菜品種的花球、葉片的硫苷含量及組成進(jìn)行了測定,結(jié)合青花菜栽培性狀及產(chǎn)量等進(jìn)行分析,旨在對青花菜育種及副產(chǎn)物綜合利用提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    供試的12個青花菜品種來自北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心(表1)。2013年2月1日播種,3月25日定植于北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心通州農(nóng)場,采用露地直播方式,株距50 cm,行距 50 cm,重復(fù)3 次。7月24日取新鮮的花球及葉片測定硫苷含量。

    1.2 方法

    1.2.1 硫苷的提取[11] 取新鮮青花菜花球及葉片,分割成小球或小片,在真空冷凍干燥機內(nèi)干燥。稱量粉碎好的樣品0.2 g,放入15 mL塑料管中。加入內(nèi)標(biāo)TRO(苯甲基硫苷)0.25 mL,迅速加入100%預(yù)熱的甲醇,80 ℃下水浴20 min,每隔4~5 min渦旋振蕩1次,3 000 r/min離心10 min,取上清液倒入15 mL塑料管中,放在冰盆中。沉淀物繼續(xù)用70%甲醇提取2次,同上述處理方法,合并上清液,即為樣品液。取一次性注射器,加入玻璃棉,塞緊,放在試管上。加入DEAE膠溶液2 mL,用2 mL雙蒸水洗滌,加入樣品液2 mL。待樣品液不再滴下,加入0.02 mol/L NaAc溶液。待不再有液體滴下,將注射器轉(zhuǎn)移到另一試管上,加入75 μL硫酸酯酶溶液,封口過夜。將過夜的注射器用雙蒸水洗滌3次,每次 0.5 mL。用注射頭擠壓注射器,使液體盡可能轉(zhuǎn)移到試管中。將試管中液體通過0.45 μm濾膜轉(zhuǎn)移到小玻璃瓶中,冷凍保存,待用。

    1.2.2 硫苷的分析 HPLC分析條件:Nova-Pak C18色譜柱:3.9 mm×150 mm,50 μm,檢測波長229 nm,流速 1.0 mL/min,常溫,進(jìn)樣量20 μL,梯度洗脫如表2所示。A液:1 g四甲基氯化銨(TMACl)溶于2 L雙蒸水中,混勻,抽濾。B液:1 g四甲基氯化銨(TMACl)溶于1.6 L雙蒸水中,加入400 mL色譜純乙腈,混勻抽濾。

    采用苯甲基硫苷作為內(nèi)標(biāo),根據(jù)保留時間和峰面積測定硫苷組分。利用內(nèi)標(biāo)和響應(yīng)因子計算硫苷含量,硫苷含量計算公式如下:

    硫苷含量=脫硫硫苷峰面積×內(nèi)標(biāo)量×脫硫硫苷相對響應(yīng)因子內(nèi)標(biāo)峰面積×試樣質(zhì)量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 青花菜中硫苷組分

    根據(jù)不同保留時間以及特征峰形,可以鑒定得到:3-甲基硫氧烯丙基硫苷(glucoiberin,IBE)、2-羥基-3-丁烯基硫苷(progoitrin,PRO)、2-丙烯基硫苷(sinigrin,SIN)、4-甲基硫氧丁基硫苷(glucoraphanin,RAA)、3-丁烯基硫苷(gluconapin,NAP)、4-羥基吲哚基-3-甲基硫苷(4-hydroxyglucobrassicin,4OH)、苯甲基硫苷(glucotropaeolin,TRO,內(nèi)標(biāo))、3-甲基吲哚基硫苷(glucobrassicin,GBC)、4-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷(4-methoxyglucobrassicin,4ME)、1-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷(neoglucobrassicin,NEO)(圖1)。

    2.2 不同青花菜品種中總硫苷含量

    由圖2可以看出,不同青花菜品種間花球及葉片中總硫苷含量差異較大。青花菜花球中,中綠1號的硫苷含量最高,為23.53 μmol/g DW;其次是貢獻(xiàn)者,含量為 23.03 μmol/g DW;含量最低的是大帝,為9.19 μmol/g DW。青花菜葉片中,中綠9號總硫苷含量最高,為 10.11 μmol/g DW;其次為中綠5號,為9.86 μmol/g DW;含量最低的是南秀366號,僅為1.93 μmol/g DW??傮w而言,青花菜花球中的硫苷含量是葉片的1~5倍不等,不同品種之間存在差異性。

    2.3 不同青花菜品種中硫苷組分的分析

    目前已從自然界中分離鑒定出120多種硫苷,不同十字花科作物中的硫苷組分不同,其中在蕓薹屬蔬菜中發(fā)現(xiàn)了 15~20種硫苷[12],青花菜中已報道的則有16種[5]。本試驗對12 個青花菜品種的花球和葉片中的硫苷組分進(jìn)行了測定,共檢測出9種硫苷組分(表3、表4)。這9 種硫苷分屬于脂肪類、吲哚類,沒有檢測出芳香類硫苷。

    由表3可以看出,9種硫苷組分中,RAA在青花菜花球中含量最多,占硫苷總含量的20.14%~69.42%。南秀366號總硫苷含量為13.31 μmol/g,但RAA含量為9.24 μmol/g,在所有品種中占比最高。野綠總硫苷含量為21.55 μmol/g,但其中RAA僅為4.34 μmol/g,僅占總含量的20.14%。結(jié)果表明,不同青花菜栽培種對RAA硫苷在總硫苷含量中所占的比例有影響,這與Schonhof等的檢測結(jié)果[13]一致。Abercrombie等研究發(fā)現(xiàn),連續(xù)2年青花菜雙單倍體(自交種)親本形成的雙列雜交群體中,RAA含量呈現(xiàn)顯著的常規(guī)遺傳結(jié)合力,但沒有發(fā)現(xiàn)顯著的特殊遺傳結(jié)合力,常規(guī)遺傳結(jié)合力均方約為特殊遺傳結(jié)合力均方的14倍,表明常規(guī)結(jié)合力在預(yù)測雜交產(chǎn)生的RAA含量方面比特殊結(jié)合力更重要,因此一個給定的自交種與其他自交種結(jié)合將產(chǎn)生相對可預(yù)測RAA含量的雜交種[14]。青花菜花球是主要的可食部位,因此,青花菜潛在的保健作用主要取決于所選擇的栽培品種。

    由表4可以看出,RAA在青花菜葉片硫苷組分中占比最高,占總含量的9.33%~56.57%,其中中綠6號總硫苷含量9.25 μmol/g DW,RAA含量為4.76 μmol/g DW;南秀366號總硫苷含量為所有品種中最低,僅為1.93 μmol/g DW,其中RAA占比也最低。葉片的用途與花球不同,葉片是青花菜的副產(chǎn)物,可以作為飼料進(jìn)行再利用。研究表明,含有β-OH的硫代葡萄糖苷能降解生成2種能導(dǎo)致甲狀腺腫大的產(chǎn)物:異硫氰酸鹽和唑烷-2-硫,它們通過不同的方式作用于動物或人體的甲狀腺造成危害[3-4]。PRO是對營養(yǎng)價值不利的主要硫苷組分[15]。從表4可以看出,PRO占總硫苷含量從1189%~42.83%不等,其中幸運品種PRO含量為0.88 μmol/g DW,硫苷總含量為7.4 μmol/g DW,幸運品種的葉片最適宜進(jìn)行飼料加工。

    青花菜是十字花科蔬菜中4-甲硫基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷(glucoraphanin,RAA)含量最豐富的蔬菜之一[16]。RAA是蘿卜硫素前體,蘿卜硫素已被證實是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強烈的phaseⅡ酶誘導(dǎo)劑,能降低食道癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等多種癌癥的發(fā)病率[2-5,17-19]。其他硫苷的同源異硫氰酸鹽的抗癌功效也有報道,如 3-甲基吲哚基硫苷(glucobrassicin,GBC)的水解產(chǎn)物吲哚-3-甲醇能夠調(diào)節(jié)生物轉(zhuǎn)化酶的活性,從而抑制乳腺癌、前列腺癌細(xì)胞的活性[20-21]。

    不同蔬菜和品種中硫苷含量的差異可以歸結(jié)為基因型不同[22],同時受環(huán)境因素的影響。Farnham等對生長在3個不同環(huán)境下的9種不同基因型的青花菜硫苷含量進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)環(huán)境對硫苷含量影響顯著,RAA是唯一顯著受基因型影響的硫苷,對RAA含量的影響因素中,基因型效應(yīng)占528%,基因型和環(huán)境互作效應(yīng)小于基因型[10]。本試驗中所有青花菜品種均生長在同一環(huán)境中,栽培條件基本相同,因此硫苷含量差異主要取決于品種本身基因差異。

    3 結(jié)論

    本研究結(jié)果表明,青花菜中檢測到9種硫代葡萄糖苷,分別為3-甲基硫氧烯丙基硫苷(IBE)、2-羥基-3-丁烯基硫苷(PRO)、2-丙烯基硫苷(SIN)、4-甲硫基-3-丁烯基硫苷(RAA)、3-丁烯基硫苷(NAP)、4-羥基吲哚基-3-甲基硫苷(4OH)、3-甲基吲哚基硫苷(GBC)、4-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷(4ME)、1-甲氧基吲哚基-3-甲基硫苷(NEO)。這9種硫苷分屬于吲哚類與脂肪類,沒有檢測到芳香類硫苷。其中4-甲硫基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷是青花菜中的主要硫苷。南秀366號花球中RAA含量占比最高,葉片中RAA含量占比最低,具有潛在的應(yīng)用前景。

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