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    蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒的體內(nèi)抗腫瘤活性研究

    2016-10-17 10:14:16陳嬌婷葉民珠
    中國民族民間醫(yī)藥 2016年17期
    關(guān)鍵詞:抑瘤率蛇床子荷瘤

    陳嬌婷 葉民珠

    贛南醫(yī)學(xué)院,江西 贛州 341000

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    蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒的體內(nèi)抗腫瘤活性研究

    陳嬌婷葉民珠

    贛南醫(yī)學(xué)院,江西贛州341000

    目的:制備蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒(ost-SLN),并考察ost-SLN體內(nèi)的抗腫瘤活性。方法:采用熔融-勻化法制備蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒,評價Ost-SLN對小鼠H22肝癌實體瘤的抑瘤作用,觀察對脾、胸腺等器官的損傷情況,比較不同濃度下對機體帶來的影響。結(jié)果:ost-SLN可不同程度地抑制H22荷瘤小鼠的腫瘤生長,而且隨著給藥濃度增加,ost-SLN的抑瘤率均上升,分別為34.2%、50.9%、68.5%。結(jié)論:ost-SLN在體內(nèi)均有明顯的抗腫瘤活性,且未出現(xiàn)毒性反應(yīng),有望開發(fā)成一種高效、低毒的蛇床子素制劑。

    蛇床子素;ost-SLN;抗腫瘤

    蛇床子素(osthol,ost)是從傘形科植物蛇床的果實中提取分離得到的一種香豆素類化合物,其核心結(jié)構(gòu)由苯環(huán)和吡喃酮環(huán)組成。藥理研究表明[1-3],蛇床子素對心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等有重要活性,且在抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松癥及抗變態(tài)反應(yīng)等方面也均有較強的效果。但由于蛇床子素在水中難溶,口服吸收差,生物利用度低,個體差異大,限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。研究采用熔融-勻化法制備蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒,建立小鼠H22肝癌實體瘤模型,評價蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒對小鼠H22肝癌實體瘤的抑瘤作用[4],觀察對脾、胸腺等器官的損傷情況,比較其不同濃度下對機體帶來的影響和可能產(chǎn)生的毒副作用,為蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒的進(jìn)一步臨床研究奠定基礎(chǔ)。

    1 儀器與材料

    1.1儀器Sartorius ALC4100電子天平(廣州市上博電子科技有限公司);85-2型數(shù)顯恒溫磁力攪拌器(鞏義市科瑞儀器有限公司);NIROSOAVI高壓乳勻機(美國儀器集團(tuán));高效液相色譜儀(日本島津);高分辨透射電鏡(81W/AIS2100,西化儀器有限公司)。

    1.2試藥蛇床子素(批號:110822-200406,南京替斯艾么中藥研究所);單硬脂酸甘油酯(批號:054K5303,上海凌峰化學(xué)試劑有限公司);大豆卵磷脂(批號:2075523,上海愛康精細(xì)化工有限公司);泊洛沙姆188(批號:WPWA544C,南京威爾化工有限公司);無水乙醇(批號:20110528,上?;瘜W(xué)試劑有限公司);甲醇(色譜純,山東浩中化工科技有限公司),其余試劑均為分析純。

    1.3動物與瘤株昆明種小鼠,體重 18~22g,雌雄各半,清潔級,動物合格證號:JXA2005318,由贛南醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。肝癌細(xì)胞 H22由贛南醫(yī)學(xué)院藥理實驗室提供。

    2 方法

    2.1蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒的制備采用熔融-勻化法制備,稱取處方量的單硬脂酸甘油酯在(75±2) ℃加熱熔融后,蛇床子素用適量無水乙醇溶解后,兩者均勻混合作為油相。取處方量的大豆卵磷脂、泊洛沙姆188、水在超聲中溶解,并加熱至(75±2) ℃成為水相。在攪拌下將水相緩慢滴加到油相中,制成O/W型初乳。用高壓乳均機在100 MPa壓強下,于 (75±2) ℃下反復(fù)乳勻5次后,迅速冷卻形成蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒混懸液。

    2.2納米粒的質(zhì)量評價

    2.2.1ost-SLN的形態(tài)學(xué)觀察及粒徑分布形態(tài)學(xué)觀察按照最佳方案制備的ost-SLN,采用電子顯微鏡觀察。將ost-SLN樣品,用水稀釋至適當(dāng)濃度,用激光散射粒度測定儀測定其粒徑。

    2.2.2包封率的測定采用超速離心法,精密量取蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒1mL,置離心管,于10000r/min離心30min。取上清液用甲醇定容于10mL量瓶,經(jīng)孔徑0.45μm微孔濾膜濾過,備用。在此色譜條件(色譜柱:C18柱;檢測波長:322nm;流動相:甲醇-水(75∶25);柱溫:室溫;流速1mL/min)測定游離藥物濃度。

    精密量取蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒1mL,置10mL量瓶,用甲醇定容,超聲處理,靜置,經(jīng)孔徑0.45μm微孔濾膜濾過,備用。采用上述色譜條件測定蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒中總藥量,并根據(jù)公式計算包封率。包封率(%)=[(總藥量-游離藥物量)/總藥量]×100%。

    2.3體內(nèi)抗腫瘤活性研究

    2.3.1小鼠肝癌細(xì)胞H22荷瘤小鼠模型制備H22瘤株經(jīng)小鼠腹腔7d傳代1次,取第3代用于實驗,腹水瘤小鼠脫頸椎處死,無菌條件下用一次性無菌注射器抽取乳白色腹水,置于已滅菌的離心管中,細(xì)胞計數(shù)器計數(shù),用無菌生理鹽水稀釋成1×107個/mL的腫瘤細(xì)胞懸液,接種于小鼠右前肢腋部皮下,每只0.2mL。

    2.3.2H22肝癌小鼠分組及給藥接種次日隨機分組,每組10只,雌雄各半。分組后立即腹腔注射給藥,藥量經(jīng)預(yù)實驗確定,每天用藥1次,連續(xù)8d。分組及給藥量分別為:模型組為生理鹽水,對照組環(huán)磷酰胺組(20mg/Kg),分別用Ost、Ost-SLN的低、中、高劑量組為用藥組。藥物3個劑量組為1.0、2.0、4.0mg/Kg,每只給藥0.2mL/d。

    2.3.3檢測指標(biāo)末次給藥后24h(禁食不禁水),后頸椎脫臼處死各組小鼠,完整剝離腫瘤并稱重,計算抑瘤率。剖取胸腺和脾臟,計算臟器指數(shù)。

    抑瘤率 =(模型組平均瘤質(zhì)量-用藥組平均瘤重)/模型組平均瘤質(zhì)量×100%。

    脾臟或胸腺指數(shù)/mg/g=脾臟或胸腺重量/體重。

    3 結(jié)果

    3.1納米粒的質(zhì)量評價在電子顯微鏡照片中顯示,ost-SLN大都呈規(guī)則、完整的圓形或卵圓形,粒子分散狀態(tài)良好,無粘連。形態(tài)學(xué)圖見圖1。平均粒徑分布范圍為100~200nm,分布比較均勻。粒徑分布圖見圖2。測得其包封率為59.78%。

    3.2體內(nèi)抗腫瘤活性研究

    3.2.1小鼠瘤重的影響ost-SLN用藥組對H22荷瘤小鼠的腫瘤抑制率達(dá)到了34.2%,與模型組比較抑瘤效果有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。隨著給藥濃度增加,藥物的抑瘤率均上升,分別為34.2%、50.9%、68.5%。ost-SLN可以增強ost 對小鼠腫瘤的抑制作用,反映了其在體內(nèi)良好的靶向分布和抗腫瘤活性。見表1。

    組別劑量/mg/Kg給藥前體重/g給藥后體重/g瘤重量/g抑瘤率/%模型組-23.1±1.136.1±1.31.08±0.3-用藥組123.2±3.134.5±1.80.71±0.234.2*224.3±1.433.9±1.60.53±0.750.9*422.9±1.533.4±1.90.34±0.968.5*對照組2021.4±2.425.3±3.10.51±0.852.7

    注:與模型組比較,*P<0.05。

    3.2.2胸腺指數(shù)和脾指數(shù)比較各組小鼠處死時體重變化與對照組比較,發(fā)現(xiàn)用藥組中不同劑量可見ost-SLN組對小鼠體重的抑制作用較小,這應(yīng)當(dāng)與其在體內(nèi)的靶向性分布,減少藥物在其它組織和細(xì)胞中的分布有關(guān)。用藥組中荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)都比模型組的免疫指數(shù)略大一些。見表2。

    組別劑量/mg/Kg給藥前體重/g給藥后體重/g胸腺指數(shù)/mg/g脾指數(shù)/mg/g模型組-23.1±1.136.1±1.310.79±0.241.01±0.37用藥組123.2±3.134.5±1.811.81±0.281.29±0.25224.3±1.433.9±1.611.33±0.161.57±0.12422.9±1.533.4±1.911.46±0.191.39±0.38對照組2021.4±2.425.3±3.112.01±0.111.43±0.21

    4 討論

    實驗中采用熔融-勻化法制備ost-SLN樣品,將載藥類脂熔融物分散于熱的乳化劑水溶液中形成初乳,初乳經(jīng)高壓乳均機勻質(zhì)形成納米乳,室溫下冷卻固化形成SLN。該法得到的SLN粒徑小且分布窄,但高溫會增加藥物和載體的降解速度。為進(jìn)一步考察蛇床子素的抑瘤活性,實驗進(jìn)行了蛇床子素對荷瘤小鼠抑瘤活性的研究和對脾、胸腺等器官損傷情況的考察,觀察其給藥劑量下對機體帶來的影響和可能產(chǎn)生的毒副作用,以揭示其在臨床腫瘤治療中潛在的應(yīng)用前景。

    實驗結(jié)果顯示,環(huán)磷酰胺和ost-SLN可不同程度地抑制H22荷瘤小鼠的腫瘤生長,其中隨著給藥濃度增加,ost-SLN的抑瘤率均上升,分別為34.2%、50.9%、68.5%。表明其在體內(nèi)良好的靶向分布和抗腫瘤活性;且高濃度的ost-SLN的抑瘤率比環(huán)磷酰胺更好;胸腺指數(shù)和脾指數(shù)結(jié)果表明,用藥組中荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)都比模型組的免疫指數(shù)略大一些,可能是接種腫瘤后刺激了免疫系統(tǒng),也可能是吞噬作用或病理性增大。

    [1]朱艷杰,周洪智.蛇床子的藥理作用研究進(jìn)展[J].黑龍江醫(yī)藥,2010,23(4):618-619.

    [2]沈麗霞,金樂群,薛貴平,等.蛇床子素對AICl3致急性衰老模型小鼠記憶障礙的保護(hù)作用[J].藥學(xué)學(xué)報,2002,37(3):178-180.

    [3]魏顯招,祁敏,郭惠,等.蛇床子有效成分防治骨質(zhì)疏松癥的研究進(jìn)展[J].上海中醫(yī)藥雜志,2010,44(2):72-75.

    [4]沈秀,周則衛(wèi),劉培勛,等.蛇床子素對荷瘤小鼠的抗腫瘤作用[J].中華醫(yī)學(xué)實踐雜志,2006,5(3):241-243.

    (編輯:程鵬飛)

    Study on the Anti-tumor Activities of Osthol Solid Lipid Nanoparticles

    CHEN JiaotingYE Minzhuo

    Gannan Medical University,Ganzhou 341000,China

    Objective To prepare osthol Solid lipid nanoparticles(ost-SLN)and study on its antitumor activities in vivo. Methods Ost-SLNwere prepared with melt-homogenization, In vivo, The mice liver cancer(H22 )were selected and implanted in Kun Ming mice,Tumor inhibitory percentage, thymus gland and spleen indexes were measured. Results Ost-SLNS inhibited the H22 hepatoma-bearing mice in different degrees, and the inhibitory rate of ost-SLN were 34.2%,50.9% and 68.5%, respectively, demonstrating a drug-dose dependent effect.Conclusion Ost-SLN had obvious anti-tumor activities in vivo, and did not reveal any toxic effects in experimental animals with the administered doses. It’s a potential carriermaterial in developing a high performance ost nanometer system with low toxicity.

    Osthol;Ost-SLN;Anti-tumor

    2016-06-17

    陳嬌婷(1980-),女,講師,碩士,主要從事藥物新劑型與新技術(shù)研究。E-mail:chenjiaoting80119@126.com

    R285.5

    A

    1007-8517(2016)17-0022-03

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