基于數(shù)據(jù)挖掘及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討中醫(yī)藥治療阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征的臨床用藥規(guī)律與作用機(jī)制

謝燕小，周謹(jǐn)希，孟星汝，蔣紫云，連樂燊

1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)研究生院，廣東 廣州 510006；2. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)東莞醫(yī)院，廣東 東莞 523000

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（OSAHS）是以睡眠打鼾、呼吸及睡眠節(jié)律紊亂、反復(fù)出現(xiàn)呼吸暫停及覺醒、夜間發(fā)生低氧血癥等為主要表現(xiàn)的常見呼吸系統(tǒng)疾病，長(zhǎng)期患病可致高血壓、精神情志異常、心律失常、冠心病等多種病變，甚則危及患者生命安全[1]。因此，及早診斷并采取正確且有效治療對(duì)OSAHS 患者來說具有重要意義。目前西醫(yī)治療OSAHS 主要以吸氧、佩戴矯治器等對(duì)癥處理，尚缺乏療效確切的藥物，而通過手術(shù)治療不僅存在一定風(fēng)險(xiǎn)，且需嚴(yán)格掌握手術(shù)適應(yīng)證，無法針對(duì)所有患者，因此整體療效并不十分理想[2]。

OSAHS 在中醫(yī)上可歸屬于鼾證范疇[3]，《鼾癥中醫(yī)診療專家共識(shí)意見》指出該疾病多屬本虛標(biāo)實(shí)之證，標(biāo)實(shí)以痰濕、瘀血等為主，本虛以肺脾腎虛衰為主[4]。近年來，大量臨床研究如采用溫陽化痰法[5]、化痰祛瘀法[6]等中藥方劑治療OSAHS 均表明具有確切療效，但有關(guān)方劑的用藥規(guī)律及分子機(jī)制尚未完全闡明，一定程度上限制了中醫(yī)藥發(fā)揮防治OSAHS 的優(yōu)勢(shì)。故本研究將基于數(shù)據(jù)挖掘，系統(tǒng)性總結(jié)分析中醫(yī)藥治療OSAHS 組方用藥規(guī)律，并運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)新方藥物組合潛在作用機(jī)制，以期為進(jìn)一步臨床和科學(xué)研究提供參考。

1 資料與方法

1.1 資料來源設(shè)定“中醫(yī)”或“中藥”或“草藥”或“方劑”或“復(fù)方”或“湯劑”和“阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征”或“OSAHS”為檢索詞，計(jì)算機(jī)檢索中國(guó)生物醫(yī)學(xué)、中國(guó)知網(wǎng)、萬方、維普等文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫建庫至2022 年10 月所收錄的有關(guān)中醫(yī)藥治療OSAHS 的臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（RCT）文獻(xiàn)，包括學(xué)位論文、期刊論文。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)研究對(duì)象符合OSAHS 的臨床診斷；中醫(yī)或中西醫(yī)結(jié)合治療OSAHS、樣本量在20 例以上的臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，給藥方式為內(nèi)服并研究證明治療有效的文獻(xiàn)；方劑須有明確藥物組成，且均只錄入基本方。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)合并其他疾病如冠心病、慢性阻塞性肺疾?。–OPD）、抑郁癥等，或聯(lián)合其他中醫(yī)療法如針灸、耳穴、拔罐等，或給藥方式為中藥注射、霧化吸入等；同方異名、重復(fù)發(fā)表、僅采用單味藥治療的文獻(xiàn)。

1.4 數(shù)據(jù)規(guī)范化處理參照2020 年版《中華人民共和國(guó)藥典》[7]對(duì)文獻(xiàn)中涉及的中藥進(jìn)行名稱規(guī)范化，如“法半夏”“姜半夏”“清半夏”統(tǒng)一為“半夏”，“瓜蔞皮”“栝樓”統(tǒng)一為“瓜蔞”，“生石膏”“熟石膏”統(tǒng)一為“石膏”。

1.5 數(shù)據(jù)錄入及分析由2 名研究者共同將數(shù)據(jù)錄入中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)（V2.5）軟件中，并進(jìn)行數(shù)據(jù)核對(duì)及規(guī)范化處理，對(duì)已經(jīng)核實(shí)確認(rèn)好的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.6 藥物活性成分及潛在作用靶點(diǎn)篩選以同時(shí)滿足口服生物利用度（OB）≥30%、類藥性（DL）≥0.18 為篩選條件[8]，將用藥規(guī)律分析中得到的新方組合“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”錄入中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)（TCMSP）（https://old.tcmsp-e.com/index.php）以獲得其活性成分和對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)，利用Unipot 數(shù)據(jù)庫（限定條件：Homo Sapiens、Reviewed）統(tǒng)一校正靶點(diǎn)名稱以獲得潛在作用靶點(diǎn)。

1.7 OSAHS 疾病靶點(diǎn)獲取及整合以“Obstructive Sleep Apnea Hypopnea Syndrome”為檢索條件，通過DisGeNET（https://www.disgenet.org/）、GeneCadrs（http://www.genescards.org/）、 OMIM（https://omim.org/）、DrugBank（https://go.drugbank.com/）數(shù)據(jù)庫檢索OSAHS 靶點(diǎn)，去除重復(fù)值并統(tǒng)一靶點(diǎn)名稱，最終得到OSAHS 的疾病靶點(diǎn)。

1.8 PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選利用微生信平臺(tái)（http://www.bioinformatics.com.cn/）成比例面積文氏圖工具篩選出“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”與OSAHS 的藥物-疾病有效靶點(diǎn)，繪制Venn 圖，并整理出相應(yīng)的有效活性成分，錄入Cytoscape 3.8 軟件中對(duì)有效活性成分、有效靶點(diǎn)進(jìn)行拓?fù)浞治龅玫紻egree 值，根據(jù)Degree 值構(gòu)建“中藥-活性成分-有效靶點(diǎn)”的可視化網(wǎng)絡(luò)圖。同時(shí)通過String 數(shù)據(jù)庫（https://www.string-db.org/），選擇置信度＞0.4， 限定條件（Multiple Protein、 Homo sapiens），忽略游離節(jié)點(diǎn)，構(gòu)建有效靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)，最后再通過Cytoscape 3.8 內(nèi)置的Mcode 插件篩選出核心靶點(diǎn)并構(gòu)建核心靶點(diǎn)圖。

1.9 KEGG 及GO 富集分析采用Metascape 數(shù)據(jù)庫（http://metascape.org/gp/index.html），設(shè)定物種“H.sapiens”，P＜0.01，對(duì)篩選出的核心靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG及GO 富集分析，其中GO 分析包括細(xì)胞組分（CC）、分子功能（MF）、生物過程（BP），將KEGG、GO CC、GO MF、GO BP 分析數(shù)據(jù)結(jié)果整理后錄入微生信網(wǎng)站（http://www.bioinformatics.com.cn/）進(jìn)行可視化處理并繪制高級(jí)氣泡圖。

1.10 分子對(duì)接在TCMSP 下載關(guān)鍵活性成分“mol2”格式小分子結(jié)構(gòu)圖，分別在Autodock Tools 1.5.7 中打開，進(jìn)行加全氫、設(shè)置為配體、自動(dòng)分配電荷、設(shè)置扭轉(zhuǎn)鍵等操作，最后導(dǎo)出為“pdbqt”格式文件。在Uniprot、RCSB PDB 中篩選并下載核心靶點(diǎn)的“pdb”格式蛋白結(jié)構(gòu)圖，分別在Autodock Tools 1.5.7 中打開，進(jìn)行去水及溶劑分子、加全氫、設(shè)置為受體等操作，最后導(dǎo)出為“pdbqt”格式文件。將處理好的受體及配體在Autodock Tools 1.5.7 中打開，分別運(yùn)行autogrid4、autodock4 進(jìn)行半柔性對(duì)接，通過小分子與蛋白質(zhì)的結(jié)合能大小判斷其結(jié)合的穩(wěn)定性，最后將結(jié)果導(dǎo)出為“pdbqt”文件，運(yùn)行Pymol 進(jìn)行可視化分析。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)數(shù)據(jù)挖掘

2.1.1 藥物頻次見表1。根據(jù)納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，共錄入中醫(yī)藥治療OSAHS 處方78 首，涉及141 味中藥，總頻次873 次，單味藥物應(yīng)用頻數(shù)最高62 次，最低1 次。其中應(yīng)用頻次大于10 次的中藥有24 味。

表1 78 首中醫(yī)治療OSAHS 處方高頻藥物（＞10 次）

2.1.2 藥物性味、歸經(jīng)統(tǒng)計(jì)見表2、表3。納入的78 首方劑中，溫性藥物使用頻率最高，達(dá)44.10%，接近一半占比，寒、平性藥物使用頻率次之，涼、熱性藥物使用較少；藥味以辛、苦、甘為主，3 味藥的使用占所有藥味的絕大部分；排名前3 的歸經(jīng)為肺、脾、胃經(jīng)，總頻率占所有歸經(jīng)頻率一半以上。

表2 78 首中醫(yī)治療OSAHS 處方藥物四氣、五味分布

表3 78 首中醫(yī)治療OSAHS 處方藥物歸經(jīng)分布

2.1.3 關(guān)聯(lián)規(guī)則分析見表4、表5、圖1。設(shè)最低支持度為0.3（即支持度個(gè)數(shù)24），置信度≥0.80，得出支持度個(gè)數(shù)≥24 次的藥對(duì)27 對(duì)，藥物關(guān)聯(lián)組合有28 對(duì)。

圖1 藥物關(guān)聯(lián)可視化網(wǎng)絡(luò)圖

表4 78 首中醫(yī)治療OSAHS 處方用藥模式

表5 78 首中醫(yī)治療OSAHA 處方藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則

2.1.4 新方分析見表6、表7、圖2。根據(jù)實(shí)際情況，設(shè)置相關(guān)度為7，懲罰度為3，可得到“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”“茯苓-生姜-白術(shù)-郁金”2 首新方。

圖2 新方組合可視化網(wǎng)絡(luò)圖

表6 中藥治療OSAHS 的內(nèi)在核心組合

表7 中藥治療OSAHS 的新方組合

2.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果根據(jù)數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果顯示，由內(nèi)在核心組合聚合而成的新方有2 首，分別為“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”、“茯苓-生姜-白術(shù)-郁金”，其中第一首新方為血府逐瘀湯加減方，梁新元[9]的臨床研究結(jié)果表明血府逐瘀湯加減對(duì)出現(xiàn)氣虛血瘀證的OSAHS 患者有效，由此推測(cè)第一首新方對(duì)OSAHS 患者可能具有同等療效，因此通過對(duì)新方組合“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，進(jìn)一步預(yù)測(cè)其潛在作用機(jī)制，為其可適用于OSAHS 患者提供臨床理論依據(jù)及科學(xué)研究方向。

2.2.1 新方組合活性成分與潛在作用靶點(diǎn)篩選在TCMSP 數(shù)據(jù)庫分別篩選川芎、石菖蒲、郁金、當(dāng)歸、桔梗、柴胡、赤芍、紅花的活性成分，剔除未明確靶點(diǎn)的成分并去重后得到47 個(gè)藥物活性成分。進(jìn)一步搜索其相關(guān)靶點(diǎn)并通過Unipot 數(shù)據(jù)庫（限定條件：Homo Sapiens、Reviewed）統(tǒng)一校正靶點(diǎn)名稱，去重后獲得潛在作用靶點(diǎn)共255 個(gè)。

2.2.2 OSAHS 疾病靶點(diǎn)獲取及整合以“Obstructive Sleep Apnea Hypopnea Syndrome” 為關(guān)鍵詞在OMIM、GeneCadrs、DrugBank、DisGeNET 數(shù)據(jù)庫檢索OSAHS 靶點(diǎn)，將4 個(gè)數(shù)據(jù)庫的靶點(diǎn)合并，去除重復(fù)值并統(tǒng)一靶點(diǎn)名稱后共得到887 個(gè)OSAHS 疾病靶點(diǎn)。

2.2.3 中藥-活性成分-有效靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)見圖3、圖4。在微生信平臺(tái)成比例面積文氏圖工具分別錄入255 個(gè)新方組合“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”潛在作用靶點(diǎn)及887 個(gè)OSAHS 疾病靶點(diǎn)，得到藥物-疾病共同靶點(diǎn)共45 個(gè)，繪制Venn圖，運(yùn)用Cytoscape3.8 軟件構(gòu)建中藥-活性成分-有效靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，根據(jù)Degree 值調(diào)節(jié)顏色深淺，推測(cè)度值明顯高于其他成分的山奈酚（MOL000422）、槲皮素（MOL000098）、豆甾醇（MOL000449）、β-谷甾醇（MOL000358）等為新方藥物組合治療OSAHS 的關(guān)鍵活性成分，其中山奈酚、槲皮素、豆甾醇在紅花、柴胡均有分布，山奈酚在石菖蒲中也有分布，豆甾醇在當(dāng)歸、赤芍中也有分布，β-谷甾醇主要集中在郁金、紅花、赤芍、當(dāng)歸中。

圖3 藥物-疾病共同靶點(diǎn)（有效靶點(diǎn)）

圖4 中藥-活性成分-有效靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)圖

2.2.4 有效靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)及核心靶點(diǎn)見圖5、圖6。將45 個(gè)有效靶點(diǎn)上傳至String 數(shù)據(jù)庫中構(gòu)建有效靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)，其中越核心的靶點(diǎn)，連接該靶點(diǎn)的線條越多。通過Cytoscape 3.8 軟件內(nèi)置的Mcode插件共篩選出核心靶點(diǎn)23 個(gè)，根據(jù)Degree 值調(diào)節(jié)顏色深淺，度值較高的靶點(diǎn)有白細(xì)胞介素-6（IL-6）、趨化因子配體2（CCL2）、IL-1β、腫瘤壞死因子（TNF）、內(nèi)皮型一氧化氮合酶（NOS3）、人CXC 趨化因子配體8（CXCL8）、IL-10 等。

圖5 有效靶點(diǎn)（PPI）網(wǎng)絡(luò)

圖6 新方組合治療OSAHS 核心靶點(diǎn)圖

2.2.5 KEGG 及GO 富集分析見圖7、圖8。通過對(duì)23 個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 分析，共篩選得到73 條KEGG 通路，應(yīng)用微生信網(wǎng)站選取其中顯著性最強(qiáng)20 條通路繪圖，結(jié)果顯示，新方組合治療OSAHS 的核心靶點(diǎn)參與調(diào)控多種信號(hào)通路，主要涉及炎癥、癌癥、凋亡等方面，如AGE-RAGE、TNF、cancer、Malaria、IL-17、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）、Toll 樣受體、缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）等通路。取GO富集結(jié)果前10 位繪圖，結(jié)果顯示，核心靶點(diǎn)主要發(fā)揮作用的生物過程有細(xì)菌反應(yīng)、細(xì)菌分子起源反應(yīng)、對(duì)脂多糖的反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的反應(yīng)等，包含細(xì)胞外基質(zhì)、外部封裝結(jié)構(gòu)等細(xì)胞組分，具有信號(hào)受體調(diào)節(jié)活性、信號(hào)受體激活活性、受體配體活性等分子功能。

圖7 GO 分析富集氣泡圖

圖8 KEGG 通路分析氣泡圖

2.3 分子對(duì)接見表8、圖9。選擇上文確定的關(guān)鍵活性成分（山奈酚、槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇）與核心靶點(diǎn)（IL-6、CCL2、IL-1β、TNF、NOS3、CXCL8、IL-10）進(jìn)行分子對(duì)接，根據(jù)結(jié)合能大小判斷關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)結(jié)合的穩(wěn)定性，結(jié)合能≤-5 kJ/mol（1 kcal=4.184 kJ，即結(jié)合能≤-1.2 kcal/mol）說明分子間對(duì)接結(jié)果良好，結(jié)合能越低，分子間結(jié)合越穩(wěn)定。結(jié)果顯示，4 種關(guān)鍵活性成分均可與7 個(gè)核心靶點(diǎn)穩(wěn)定結(jié)合，且結(jié)合能均小于-1.2 kcal/mol，一定程度上驗(yàn)證了中藥有效成分與核心靶點(diǎn)間的結(jié)合性，為網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果提供數(shù)據(jù)支撐。其中豆甾醇與NOS3 對(duì)接結(jié)合能最低，結(jié)合性能最好，為-7.91 kcal/mol；其次是β-谷甾醇與CCL2，為-7.13 kcal/mol；豆甾醇與IL-6，為-6.91 kcal/mol。選擇結(jié)合最穩(wěn)定的前3 個(gè)分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化分析。

圖9 分子對(duì)接結(jié)果可視化結(jié)構(gòu)圖

表8 關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)分子對(duì)接結(jié)合能kcal/mol

3 討論

通過數(shù)據(jù)挖掘發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)藥治療OSAHS 使用頻次較高的中藥分類屬利水滲濕藥、祛痰藥、補(bǔ)虛藥、理氣藥、活血化瘀藥，與鼾證中醫(yī)診療專家共識(shí)中認(rèn)為鼾證分為痰濕內(nèi)阻、痰瘀互結(jié)、痰熱內(nèi)蘊(yùn)、氣虛痰瘀等證型特點(diǎn)相符[4]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為OSAHS多屬本虛標(biāo)實(shí)，標(biāo)實(shí)以痰濕和瘀血為主，故高頻藥物中以茯苓利水滲濕，半夏、陳皮、石菖蒲等化痰，枳實(shí)、川芎行氣，丹參、郁金、桃仁等活血化瘀治療標(biāo)實(shí)之證，以甘草、白術(shù)等補(bǔ)氣藥扶正補(bǔ)虛。藥性以溫、寒、平為主，溫性藥物既可溫化痰邪，亦可通過發(fā)越陽氣，開腠理，協(xié)助調(diào)節(jié)水液正常代謝，以杜生痰之源；痰濕內(nèi)蘊(yùn)，壅遏日久易化熱，形成痰熱內(nèi)蘊(yùn)證，故以寒性藥清化熱痰；平性藥不顯寒熱，能和能補(bǔ)，可調(diào)和藥性、補(bǔ)益本虛。藥味以辛、苦、甘為主，辛味藥發(fā)散、行氣，可芳香化濕、開竅醒神，苦主泄降、主燥濕，兼能制約辛味藥過度發(fā)散，辛苦并用，一升一降，可疏理氣機(jī)，行散痰濕之邪，甘能補(bǔ)能緩，可補(bǔ)中益氣、扶正補(bǔ)虛。用藥主要?dú)w肺、脾、胃經(jīng)，表明中醫(yī)藥治療OSAHS 可從肺、脾、胃入手。肺通調(diào)水道，脾運(yùn)化水液，二者協(xié)同合作使水液正常輸布及代謝，若肺脾功能受損，水液運(yùn)化輸布失常，停而為濕，聚而為飲，凝而為痰。而脾與胃相互影響，相互制約，脾為胃行其津液，胃主收納腐熟水谷，脾主運(yùn)化，二者共同完成食物的消化、吸收及精微的輸布。因此通過調(diào)節(jié)肺脾胃可使人體水液正常代謝，杜絕痰濕之邪生成，且通過補(bǔ)益脾胃可使氣血生化有源，扶助本虛。關(guān)聯(lián)規(guī)則分析得到中醫(yī)藥治療OSAHS 常用藥對(duì)有“半夏+茯苓”“甘草+茯苓”“半夏+甘草”等，結(jié)合置信度較高的組合如“半夏+白術(shù)+茯苓”“陳皮+石菖蒲+半夏”等，可見用藥多以祛痰藥+利水滲濕藥或祛痰藥+補(bǔ)虛藥相配伍使用，說明在治療OSAHS 的中醫(yī)用藥配伍方面仍以祛除痰濕之邪為首要目標(biāo)，兼扶正固本。

經(jīng)數(shù)據(jù)挖掘最終提取出新方兩首，第一首新方“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”由血府逐瘀湯去桃仁、生地黃、甘草、枳殼、牛膝，加石菖蒲、郁金組成，方中紅花、赤芍活血化瘀，當(dāng)歸活血養(yǎng)血，柴胡疏肝解郁、升達(dá)清陽，與桔梗同用，尤善理氣行滯，再入川芎、郁金等行氣活血藥，使氣行則血行，桔梗并可宣肺化痰、載藥上行，石菖蒲開竅豁痰，諸藥合用，共奏化痰順氣、祛瘀開竅之功，適用于OSAHS 痰瘀互結(jié)之證。第二首新方“茯苓-生姜-白術(shù)-郁金”以健脾、利濕、行氣為主要功效，方中茯苓利水滲濕、健脾寧心，生姜辛溫以助氣血通行，白術(shù)益氣健脾，郁金活血行氣、疏肝解郁，四藥合用健脾祛濕之力強(qiáng)但化痰活血之力相對(duì)較弱，適用于OSAHS 患者脾虛濕滯以致氣血運(yùn)行不暢之證。因痰、瘀之邪是促成OSAHS 發(fā)病的重要因素，在治法上無論虛實(shí)之證，皆要兼顧祛痰化瘀。相較第二首新方，第一首新方為血府逐瘀湯化裁方，以理氣藥、活血化瘀藥、祛痰藥等組成，行氣祛痰、活血化瘀之力更強(qiáng)，理論上更符合OSAHS 的病機(jī)特點(diǎn)，在臨床上可能發(fā)揮更好的療效。且第一首新方的臨床研究證據(jù)更充分，如蔣紫云等[10]的臨床研究表明行氣化痰法中藥湯劑聯(lián)合西醫(yī)常規(guī)治療OSAHS 比西醫(yī)常規(guī)治療更有效，王娟[11]應(yīng)用血府逐瘀湯合溫膽湯加減治療痰瘀互結(jié)證OSAHS 患者有效，蘇丹等[12]對(duì)血府逐瘀湯現(xiàn)代藥理學(xué)研究進(jìn)行總結(jié)后發(fā)現(xiàn)血府逐瘀湯具有保護(hù)心肌細(xì)胞、防止血管重構(gòu)、改善微循環(huán)、舒張血管等多種藥理作用。因此，選擇第一首新方“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”進(jìn)一步行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析以預(yù)測(cè)其潛在藥理機(jī)制。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果顯示新方組合“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”治療OSAHS 的有效成分包括山奈酚（MOL000422）、 槲皮素（MOL000098）、豆甾醇（MOL000449）、β-谷甾醇（MOL000358）等。山奈酚在本研究中的藥物來源有石菖蒲、柴胡、紅花，研究發(fā)現(xiàn)，其主要具有抗氧化、抗炎、心臟保護(hù)、神經(jīng)保護(hù)、抗焦慮、鎮(zhèn)痛和抗過敏活性等藥理活性，可通過抑制NF-κB 表達(dá)促炎性細(xì)胞因子、趨化因子來發(fā)揮抗炎作用[13]。槲皮素主要來源于柴胡、紅花，是一種生物類黃酮，具有抗炎、抗氧化等多種生物活性，研究表明，槲皮素可抑制NF-κB 表達(dá)，并降低炎癥細(xì)胞因子如TNF-α、IL-1 和IL-6 的水平，通過抑制NOX2 的產(chǎn)生來降低ROS 誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，是與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)相關(guān)的肺部疾病的潛在治療成分[14]。此外，有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，槲皮素可通過增強(qiáng)非REM 睡眠并減少REM 睡眠來改善睡眠-覺醒周期，對(duì)睡眠節(jié)律紊亂具有潛在治療作用[15]。豆甾醇和β-谷甾醇是天然植物甾，均來源于赤芍、紅花、當(dāng)歸，豆甾醇在郁金中、β-谷甾醇在柴胡中也有存在。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明豆甾醇可以使雌激素或NMDA 受體激活，從而增強(qiáng)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)傳遞信息能力，進(jìn)一步改善認(rèn)知功能[16]，低劑量給藥β-谷甾醇在小鼠中引起抗焦慮樣作用，而不會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生明顯的抑制作用[17]。豆甾醇和β-谷甾醇對(duì)神經(jīng)元具有多種作用，可以通過加速神經(jīng)元發(fā)芽來改變神經(jīng)元的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而改善精神癥狀和大腦功能[18]。綜上，新方藥組或可通過多種具有協(xié)同作用的活性成分發(fā)揮抗炎、抗氧化、抗焦慮、改善大腦及神經(jīng)功能等效應(yīng)達(dá)到治療OSAHS 的目的。

經(jīng)PPI 網(wǎng)絡(luò)分析得到新方藥物組合治療OSAHS的核心靶點(diǎn)有IL-6、CCL2、IL-1β、TNF、NOS3、CXCL8、IL-10 等。其中IL-6、IL-1β、CXCL8、IL-10 屬于促進(jìn)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)的細(xì)胞因子[19]，炎癥早期階段，IL-6 由Toll 樣受體刺激單核和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，參與各種生物學(xué)過程包括免疫性疾病和癌癥等，阻斷IL-6 可減少炎癥、貧血并具有抗血管生成作用[20]。CXCL8 由不同類型的細(xì)胞分泌，包括血液?jiǎn)魏思?xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞等，與多種免疫性疾病、炎性反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)[21]。TNF 也是一種促炎細(xì)胞因子，在炎癥、細(xì)胞增殖、分化和凋亡過程中起重要作用，研究報(bào)道，由促炎細(xì)胞因子和抗炎介質(zhì)的產(chǎn)生之間的不平衡引起的全身性炎癥是OSAHS 發(fā)病機(jī)理的關(guān)鍵，而多種炎癥因子如IL-1β、IL-6、CXCL8、TNF-α 的血清水平也已被證明在OSAHS 患者中有所改變[22]。趨化因子CCL2 在細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、凋亡、分布過程及炎癥反應(yīng)、創(chuàng)傷修復(fù)等過程均發(fā)揮重要作用，且實(shí)驗(yàn)研究顯示，CCL2 也參與血管形成過程，對(duì)CMEC 血管形成起促進(jìn)作用[23]。NOS3 主要在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，由血管舒緩激肽等激動(dòng)劑催化產(chǎn)生NO以參與內(nèi)皮祖細(xì)胞的活化、調(diào)節(jié)血流、抑制血小板聚集和黏附、舒張血管等，參與高血壓病、冠心病等多種心血管疾病的調(diào)控[24]。綜上，新方藥組可能通過激活核心靶點(diǎn)的表達(dá)或調(diào)節(jié)其表達(dá)水平來調(diào)控炎癥反應(yīng)、免疫修復(fù)、細(xì)胞增殖與分化、血管形成與舒張等過程，從而進(jìn)一步發(fā)揮治療OSAHS 的作用。

本研究的通路富集分析顯示，新方組合“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”治療OSAHS 主要涉及多種炎癥相關(guān)通路、癌癥通路、凋亡通路，如AGE-RAGE、TNF、cancer、Malaria、IL-17、NF-κB、Toll 樣受體、HIF-1 等通路。研究表明，IL-17 是將OSAHS 與全身性炎癥聯(lián)系起來的重要因素，其中IL-17A 代表著OSAHS 炎癥反應(yīng)中的關(guān)鍵IL，與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，其主要在各種組織中誘導(dǎo)趨化因子產(chǎn)生，并與TNF-α 和IL-1 協(xié)同作用，將單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞募集到炎癥部位[25]。NF-κB 家族是轉(zhuǎn)錄因子家族，NF-κB 信號(hào)通路在機(jī)體炎癥和免疫反應(yīng)中有重要調(diào)節(jié)作用，炎癥主要激活NF-κB，而缺氧與HIF-1 信號(hào)通路密切相關(guān)[26]，HIF-1 是參與缺氧應(yīng)答的主要轉(zhuǎn)錄因子，在血管壁疾病和內(nèi)在免疫和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)中發(fā)揮作用，在低氧條件下，HIF-1 和NF-κB 之間存在緊密的聯(lián)系[27]。Toll 樣受體信號(hào)通路在OSAHS 發(fā)病機(jī)制中同樣發(fā)揮重要作用，其主要通過Myd88/NIK 及Myd88/MAPK 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通道誘導(dǎo)產(chǎn)生大量促炎因子，從而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，并可調(diào)控TNF-α、IL-6、leptin、CRP 等炎性因子來影響疾病的發(fā)生、發(fā)展[28]。此外，新方組合“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”還可通過參與AGE-RAGE信號(hào)通路、癌癥通路、Kaposi 肉瘤皰疹病毒感染通路、Malaria 通路等達(dá)到治療OSAHS 的目的，而新方藥組能否通過這些信號(hào)通路起作用，并能否闡明其與癌癥、病毒感染等的復(fù)雜關(guān)系，有待今后進(jìn)一步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。

綜上所述，本研究基于數(shù)據(jù)挖掘歸納并總結(jié)了中醫(yī)藥治療OSAHS 的用藥規(guī)律，其中用藥以祛痰藥、利水滲濕藥、補(bǔ)虛藥、理氣藥、活血化瘀藥居多，藥性以溫、寒、平為主，藥味以辛、苦、甘為主，主要?dú)w肺、脾、胃經(jīng)，多以祛痰藥+利水滲濕藥或祛痰藥+補(bǔ)虛藥相配伍使用，體現(xiàn)OSAHS 主要治法以化痰、利濕、祛瘀、補(bǔ)氣為主。新方組合“川芎-石菖蒲-郁金-當(dāng)歸-桔梗-柴胡-赤芍-紅花”有化痰順氣、祛瘀開竅功效，適用于OSAHS 痰瘀互結(jié)之證，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)其治療OSAHS 的潛在有效成分有山奈酚、槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇等，潛在核心靶點(diǎn)有IL-6、CCL2、IL-1β、TNF、NOS3、CXCL8、IL-10 等，并可能通過TNF、IL-17、NF-κB、Toll 樣受體、HIF-1 通路等多條途徑發(fā)揮作用，分子對(duì)接結(jié)果也在一定程度上驗(yàn)證了組方的中藥有效成分與核心靶點(diǎn)間的結(jié)合性良好。該結(jié)論預(yù)測(cè)了新方組合的潛在作用機(jī)制，為新方組合治療OSAHS 的進(jìn)一步臨床應(yīng)用和科學(xué)研究提供依據(jù)及參考。