中藥枳實的化學成分及分析方法研究進展

黃雪麗， 陳玉宇

(1 泰州醫(yī)藥高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)園區(qū)管委會，江蘇　泰州　225300；2 江蘇省食品藥品檢驗所泰州醫(yī)藥高新區(qū)分所，江蘇　泰州　225300)

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中藥枳實的化學成分及分析方法研究進展

黃雪麗1,2， 陳玉宇1

(1 泰州醫(yī)藥高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)園區(qū)管委會，江蘇泰州225300；2 江蘇省食品藥品檢驗所泰州醫(yī)藥高新區(qū)分所，江蘇泰州225300)

主要從枳實的以下幾個方面進行了歸納、總結(jié)：枳實藥材的來源、主要品種、化學成分、藥理作用、提取方法、含量測定等國內(nèi)外的研究進展，并對其進行了展望，以期為全面探究枳實活性成分提供了切實的依據(jù)；為以后枳實藥材活性化合物的定性定量關(guān)系研究及臨床應用提供基礎(chǔ)；并為該藥的進一步開發(fā)和利用提供重要參考依據(jù)和有力手段；為制定相應的GAP管理規(guī)范以及質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

枳實；化學成分；藥理作用；含量測定；指紋圖譜；研究進展

枳實始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為蕓香科植物酸橙(CitrusaurantiumL.)及其栽培變種或甜橙(CitrussinensisOsbeck.)的干燥幼果。

1　枳實的來源

據(jù)《本草衍義》記載：枳實、枳殼，一物也。小則其性酷而速，大則其性和而緩。故張仲景治傷寒倉卒之病，承氣湯中用枳實，此其意也；皆取其疏通、決泄、破結(jié)實之義。他方但導敗風壅之氣，可常服者，故用積殼，其意如此。據(jù)《用藥心法》記載：枳實，潔古用去脾經(jīng)積血，故能去心下痞，脾無積血，則心下不痞。

枳實主產(chǎn)于四川、江西、福建等地。枳實經(jīng)過不同的炮制方法，可以得到不同枳實的炮制品，比如：酒枳實、麩炒枳實、土炒枳實、蜜枳實、醋枳實、生枳實、砂炒枳實和炒炭枳實等。

商品藥材有6種：①甜橙枳實(云貴枳實)；②浙江枳實；③蘇枳實；④贛枳實；⑤湘枳實；⑥川枳實。

2　枳實化學成分

枳實中主要含有三大類化學成分：生物堿、黃酮類、揮發(fā)油類。枳實中的黃酮類成分含量較高，約占5%～28%?，F(xiàn)已從枳實中分離出來的黃酮類成分主要為橙皮苷、柚皮苷、橙皮素、柚皮素、新橙皮苷、柚皮蕓香苷、異櫻花素7-O-β-D-新橙皮糖苷、圣草次苷、野漆樹苷、花椒毒酚等。枳實中的生物堿成分有辛弗林、N-甲基酪胺、乙酰去甲辛弗林等，為其強心升壓的主要有效成分。揮發(fā)油成分主要包括α-蒎烯，β-蒎烯，月桂烯，檸檬烯，樟烯，γ-松油烯，對聚傘花素及丁香烯等。據(jù)文獻報道枳實[1-13]的化學成分見表1。

表1　枳實化學成分的總結(jié)Table 1　Summary of chemical constituents in Fructus Aurantii Immaturus

續(xù)表1

吖啶酮baiyumineAbaiyumineA51179-68-1C20H19NO43,4,7,8-四甲氧基黃酮3,4,7,8-Tetramethoxyflavone65548-55-2C19H18O6橙吖啶酮-ICitracridone-I81525-61-3C20H19NO5線性吡喃生物堿honyumine100595-86-6C20H19O5綠原酸Chlorogenicacid327-97-9C16H18O9文旦寧堿Buntanine119116-85-7C20H21NO5迷迭香素Rosmarinicacid537-15-5C18H16O8酸橙素auranetin522-16-7C20H20O7苦橙丁aurantin12619-61-3C20H20O7異橙黃酮isosinensetin17290-70-9C20H20O7桔皮晶tangeretin481-53-8C20H20O7吖啶酮baiyumineBbaiyumineB109030-95-7C22H25NO5單羥基五甲氧基黃酮Flavone5-O-Desmethylnobiletin2174-59-6C20H20O8川陳皮素Nobiletin478-01-3C21H22O8那可汀Narcotinum128-62-1C22H23NO73,4,3,5,6,7,8-七甲氧基黃酮3,3,4,5,6,7,8-Heptamethoxyflavone1178-24-1C22H24O9異櫻花苷Isosakuranin491-69-0C22H24O10槲皮素-3-O-鼠李糖苷quercetin-3-O-rhaMnopyranoside-C21H20O11檸檬苦素Limonin1180-71-8C26H30O8吖啶香豆素堿CAcrimarineC119206-24-5C30H27NO8吖啶香豆素堿EAcrimarineE129722-88-9C30H27NO8苦橙苷Aurantiamarin1398-15-8C22H31O15吖啶香豆素堿BAcrimarineB119152-48-6C31H29NO8野漆樹苷Rhoifolin17306-46-6C27H30O14柚皮苷Naringin10236-47-2C27H32O14異柚皮苷Naringenin7-O-rutinoside14259-46-2C27H32O14忍冬苷lonicerin25406-64-8C27H30O15忍冬苦苷loniceroside25694-72-8C27H30O15枸橘柑Poncirin14941-08-3C28H34O14異櫻花素-7-蕓香糖苷Isosakuranetin-7-rutinoside14259-47-3C28H34O14圣草次苷Eriocitrin13463-28-0C27H32O15新北美圣草苷Neoeriocitrin13241-32-2C27H32O15新橙皮苷neohesperidin13241-33-3C28H34O15橙皮苷hesperidin520-26-3C28H34O15

3　枳實藥理作用

3.1胃腸道

枳實中的黃酮甙對大鼠平滑肌的非生理性收縮呈抑制作用，并可對抗氯化鋇、乙酰膽堿、組織胺引起的痙攣性收縮，此外還有抗炎作用。這與枳實、枳殼臨床用于治療胃脹痛、胃及十二指腸潰瘍有關(guān)。

3.2抗氧化

枳實中的黃酮類成分圣草苷、新圣草苷、異柚皮苷、柚皮苷、橙皮素等均具有抗氧化作用。

3.3心血管系統(tǒng)

枳實提取物、枳實注射液及其有效成分對羥福林(辛福林)和N-甲基酪胺有強心、增加心輸出量、收縮血管、提高總外周阻力，而使左室壓力和動脈血壓上升的作用。

3.4中樞神經(jīng)

枳實提取物有明顯的鎮(zhèn)靜作用，能使小鼠安靜少動。無催眠作用，但與戊巴比妥催眠有協(xié)同作用。枳實提取物能使小鼠因醋酸引起的疼痛反應減輕。

3.5利尿作用

枳實和N-甲基酪胺給犬靜脈注射均有明顯增加尿量的作用，同時血壓與腎血管阻力明顯增高。該利尿作用可能是通過抑制腎小管重吸收等其他作用而產(chǎn)生，與腎血流量及腎濾過量的變化無關(guān)。亦有報告認為，枳實通過強心、收縮腎血管、增高濾過壓而發(fā)揮排鈉利尿作用。

3.6其他

枳實中的圣草苷具有抗炎作用，橙皮苷可減弱脂多糖引起的肝毒性，柚皮苷通過加快酒精和脂質(zhì)代謝、增強肝抗氧化防御系統(tǒng)來減輕酒精攝入的不良反應。

4　枳實的提取工藝總結(jié)

研究枳實中黃酮類物質(zhì)和生物堿類物質(zhì)的提取方法很多，而且研究最佳提取工藝的文獻巨多。一般采用正交實驗篩選出枳實中黃酮類物質(zhì)和生物堿物質(zhì)的最佳提取工藝。下面據(jù)文獻報道[14-19]的枳實提取工藝進行了總結(jié)，見表2。

表2　枳實提取工藝的總結(jié)Table 2　Summary of extraction process in Fructus Aurantii Immaturus

續(xù)表2

回流1甲醇10超聲30min1甲醇50超聲30min1甲醇6超聲30min25mg乙腈50超聲1甲醇50回流10kg75%乙醇8倍超聲0.4甲醇25

由表2可知，一般應用超聲和回流兩種醇提取方法。首先從簡便快捷方面來講，我們可以優(yōu)先超聲；其次，從回流和超聲兩種方法醇提取液中物質(zhì)成分沒有顯著性差異考慮，也優(yōu)選超聲。所以擬用超聲提取枳實藥材方法佳。

溶劑方面：一般醇提取液應用甲醇，乙醇，正丁醇等醇性試劑，從表2可知，提取藥材時，應用甲醇較多，且甲醇成本低廉，所以甲醇也作為首選提取溶劑。

從總結(jié)的表2，我們不難看出，藥材和溶提取劑的比例一般是1:50，所以枳實藥材:甲醇=1 g:50 mL進行超聲提取優(yōu)。

5　枳實化學成分的分析方法

表3列出了近幾年來枳實藥材中化學成分的分析方法，檢測指標及樣品處理方法，可以看出文獻[20-32]對于枳實藥材中存在成分的研究報道很多，且樣本制備以有機溶劑提取為主。

表3　枳實藥材化學成分的分析Table 3　Analysis of the chemical constituents in Fructus Aurantii Immaturus

6　枳實高效液相色譜條件

由表4可知，流動相中有機相一般選擇乙腈和甲醇，水相一般選擇甲酸、乙酸和磷酸，且考察了不同濃度水平的甲酸、乙酸和磷酸，但考慮進入質(zhì)譜，當優(yōu)選甲酸和乙酸；甲醇和乙腈，經(jīng)驗上來說，乙腈是比甲醇分離效果好，且從操作簡便，價格低廉方面考慮，實驗應優(yōu)選甲醇。

表4　測定枳實藥材化學成分時色譜條件的總結(jié)Table 4　summary of chromatographic conditions in the determination of the chemical constituents in Fructus Aurantii Immaturus

波長的選擇：生物堿和黃酮類物質(zhì)共同測定[25-26]時，選擇了270 nm或258 nm；測定黃酮類波長一般選擇283 nm或280 nm；測定生物堿類物質(zhì)[27-28]一般選擇225 nm、220 nm或275 nm；檸檬苦素[28]是在215 nm處；在測定甜橙素，橘皮素，還有5-去甲基陳皮素等物質(zhì)[33]時選擇波長為333 nm。

綜合波長的考慮，我們在設定DAD檢測通道的時候，可設定多個通道，如設275 nm，333 nm，283 nm，225 nm四個檢測通道。

7　結(jié)　語

枳實，作為一種常用的中藥，含有豐富的生物活性成分，應用非常廣泛。它們的藥理藥效作用是多種成分綜合起作用的結(jié)果。因此，對于枳實的研究需要系統(tǒng)化、全面化。枳實的化學成分主要為生物堿和黃酮類兩類物質(zhì)。已報道的枳實中成分分析方法包括：高效液相色譜和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等。由于中藥對照品難于獲得，所以在無對照品的情況下實現(xiàn)定性顯得必要。我們可以采用HPLC-DAD/ESI-TOF-MS技術(shù)對枳實中的生物堿類和黃酮類成分進行快速分析，根據(jù)高分辨質(zhì)譜獲得的母離子信息，結(jié)合對照品以及相關(guān)文獻，對枳實中多種活性物質(zhì)進行鑒定，為該藥材的質(zhì)量控制提供參考。

目前，對于枳實藥材的研究，雖然除了對于主要化學成分的含量測定以外，也包含大量的HPLC圖譜研究和其他指紋圖譜，但是主要存在以下兩方面的不足：一方面是特征峰比較少，指紋圖譜信息不豐富；另一方面是圖譜中各組分之間的分辨率不高，不能真實展現(xiàn)組分的特征。我們可以采用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用和高效液相色譜法建立分辨率更高，峰容量更大的枳實藥材綜合指紋圖譜，且建立枳實藥材指紋譜庫，為該藥的進一步開發(fā)和利用提供重要參考依據(jù)和有力手段；為制定相應的GAP管理規(guī)范以及質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)；也為全面探究枳實活性成分提供了切實的依據(jù)。

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Study on the Contents of Effective Components in Fructus Aurantii Immaturus and Its Processed Products by HPLC

HUANGXue-li1,2,CHENYu-yu1

(1 Taizhou Medical Hi-tech Industrial Park Administrative Committee, Jiangsu Taizhou 225300;2 Jiangsu Food and Drug Control, Jiangsu Taizhou 225300, China)

The research background about Fructus Aurantii Immaturu was introduced, the following aspects were mainly summarized: source, chemical composition, pharmacological effects, extraction methods, fingerprints, the content of determination from domestic and foreign research progress, etc. The strategy of this study was proposed on the basis of the application background of Fructus Aurantii Immaturu. To further development of the drug and provide important reference, laid the foundation for the development of quality control and GAP, the basis for future qualitative and quantitative study of the relationship between Fructus Aurantii Immaturu active compounds and clinical application was provided.

Fructus Aurantii Immaturus; chemical composition; pharmacological effects; the content of determination; fingerprints; research progress

黃雪麗(1987 -)，女，主要從事藥物質(zhì)量研究與評價。

R284

A

1001-9677(2016)017-0022-05