山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的毒性研究

馬浩偉，董存柱，趙 灝

（海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，海南 海口 570228）

山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的毒性研究

馬浩偉，董存柱，趙 灝

（海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院，海南 海口 570228）

為了豐富防治斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的植物源農(nóng)藥，研究了山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾4種蟲(chóng)態(tài)和香蕉花薊馬2種蟲(chóng)態(tài)的殺蟲(chóng)活性。結(jié)果表明：山蒟提取物和魚(yú)藤酮對(duì)斜紋夜蛾卵的LC50值分別為1.87、1.82 mg/mL，對(duì)3齡幼蟲(chóng)的LC50值分別為0.48、0.96 mg/mL，對(duì)成蟲(chóng)的LC50值分別為0.44、0.43 mg/mL。山蒟提取物和魚(yú)藤酮對(duì)香蕉花薊馬若蟲(chóng)的LC50值分別為1.34、0.88 mg/mL，對(duì)成蟲(chóng)的LC50值分別為0.42、0.41 mg/mL，而對(duì)斜紋夜蛾蛹沒(méi)有明顯的作用。由此可知，山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾卵、3齡幼蟲(chóng)、成蟲(chóng)及香蕉花薊馬若蟲(chóng)、成蟲(chóng)的毒殺作用比較顯著，具備開(kāi)發(fā)為植物源農(nóng)藥的潛在價(jià)值。

山蒟；斜紋夜蛾；香蕉花薊馬；毒性

斜紋夜蛾［Spodoptera litura（Fabricus）］屬鱗翅目（Lepidoptera）夜蛾科（Noctuidae），是一種暴食性、雜食性、世界性分布的害蟲(chóng)，可為害多種作物［1］，對(duì)十字花科蔬菜、水生蔬菜及甘薯、棉花、大豆、煙草等作物的危害尤為嚴(yán)重［2］。

香蕉花薊馬［Thrips hawaiiensis（Morgan）］屬纓翅目鋸尾亞目薊馬科［3］，是香蕉的主要害蟲(chóng)之一［4］，在中國(guó)海南、廣東、廣西、云南、臺(tái)灣、福建等?。▍^(qū)）均有發(fā)生，且近年來(lái)在海南省香蕉產(chǎn)區(qū)暴發(fā)嚴(yán)重［5］。

山蒟（Piper hancei Maxim）為胡椒科胡椒屬植物，有祛風(fēng)除濕、活血消腫、止咳等功效［6］。2011年，董存柱等［7］研究發(fā)現(xiàn)山蒟甲醇提取物對(duì)椰心葉甲［Brontispa longissima （Gestro）］的卵和幼蟲(chóng)有較好的毒殺作用。2012年，董存柱等［8］研究發(fā)現(xiàn)山蒟甲醇提取物對(duì)家蠅（Musca domestica Linaeus）、白蚊伊蚊（Aedes albopictus Skuse）和致倦庫(kù)蚊（Culex quinquefasciatus）具有強(qiáng)烈的殺蟲(chóng)活性。鑒于山蒟在活性篩選中的殺蟲(chóng)活性較好，而且殺蟲(chóng)成分含量高，整株可作為植物源生物農(nóng)藥開(kāi)發(fā)利用，研究就山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾、薊馬的毒殺作用進(jìn)行了研究，并以傳統(tǒng)植物源殺蟲(chóng)劑魚(yú)藤酮作為對(duì)照藥劑，希望發(fā)現(xiàn)對(duì)斜紋夜蛾和薊馬有較好防治效果的植物源農(nóng)藥。以期為斜紋夜蛾及香蕉花薊馬防治提供新的方法。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試?yán)ハx(chóng)斜紋夜蛾由海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院化保實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)提供，試驗(yàn)時(shí)選取一日齡健康完整的蟲(chóng)卵，大小一致，健康活潑的3齡幼蟲(chóng)，同一批健康的蛹和羽化不久的健康的成蟲(chóng)。香蕉花薊馬在海南大學(xué)儋州校區(qū)農(nóng)學(xué)院基地香蕉種植地采集，試驗(yàn)時(shí)取健康活潑的若蟲(chóng)和成蟲(chóng)。

1.1.2試驗(yàn)藥品準(zhǔn)確稱取用甲醇浸泡、抽濾、濃縮得到山蒟提取物200 mg，丙酮定容至20 mg/mL，置于0℃冰箱保存。對(duì)照藥劑魚(yú)藤酮（純度＞98%，Aladdin試劑公司），準(zhǔn)確稱取200 mg，用丙酮定容至20 mg/mL，置于0℃冰箱保存。這兩種藥劑均在實(shí)驗(yàn)時(shí)梯度稀釋到所需濃度。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1對(duì)斜紋夜蛾卵的毒殺作用采用浸卵法［9］，取定容好的山蒟提取物20 mL，梯度稀釋到10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL；用細(xì)毛筆將1日齡卵挑出，并用0.5%聚乙烯醇將卵粘到準(zhǔn)備好的木薯葉上，每個(gè)葉片不少于150粒；待聚乙烯醇干燥后將葉片放入5個(gè)不同濃度的溶液中浸5 s，取出置濾紙上，待丙酮揮發(fā)后放入墊有濕濾紙的培養(yǎng)皿中，放入培養(yǎng)箱讓其自然發(fā)育；相同方法以5個(gè)同等濃度的魚(yú)藤酮為藥物對(duì)照，以丙酮為空白對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次；每天清除掉已孵化的幼蟲(chóng)，待不再有幼蟲(chóng)出現(xiàn)，檢查未出卵粒數(shù)。

1.2.2對(duì)斜紋夜蛾3齡幼蟲(chóng)的毒殺作用采用浸漬法［10］，取定容好的山蒟提取物20 mL，梯度稀釋到10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL備用；將供試3齡幼蟲(chóng)分別浸漬在5個(gè)不同的濃度藥液中，10 s后取出，自然晾干，放入培養(yǎng)皿，將新鮮木薯葉剪成小片放入培養(yǎng)皿；每皿移入30頭浸過(guò)藥的斜紋夜蛾幼蟲(chóng)；用相同方法以5個(gè)同等濃度的魚(yú)藤酮為藥效對(duì)照，以丙酮為空白對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次，皿上加蓋；將培養(yǎng)皿置于避光處飼養(yǎng)12 、24 、36 h后記錄死亡個(gè)數(shù)。

1.2.3對(duì)斜紋夜蛾蛹的毒殺作用采用浸漬法［11］，取定容好的山蒟提取物20 mL，梯度稀釋到10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL備用，將同一批斜紋夜蛾蛹放入5個(gè)不同濃度藥液中浸泡10 s后取出，自然晾干；后將浸過(guò)同濃度藥的蛹30個(gè)放入塑料盒中，塑料盒底部有濾紙片保濕；相同方法以5個(gè)同等濃度的魚(yú)藤酮為藥物對(duì)照，以丙酮為空白對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次，每天清除掉已羽化的成蟲(chóng)，待不再有成蟲(chóng)出現(xiàn)后，檢查未羽化個(gè)數(shù)。

1.2.4對(duì)斜紋夜蛾成蟲(chóng)的毒殺作用采用點(diǎn)滴法［12］，取定容好山蒟提取物20 mL，梯度稀釋到10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL備用；成蟲(chóng)經(jīng)適量的乙醚麻醉后，用1.0 μL微量進(jìn)樣器在成蟲(chóng)胸部背板上點(diǎn)1.0 μL不同濃度藥液，然后將30頭點(diǎn)過(guò)藥的成蟲(chóng)放入養(yǎng)蟲(chóng)塑料盒內(nèi)，養(yǎng)蟲(chóng)盒底部有干燥濾紙片，再放入有蜂蜜水的棉團(tuán)供成蟲(chóng)吸食，自然培養(yǎng)；用相同方法以5個(gè)同等濃度的魚(yú)藤酮為藥物對(duì)照，以丙酮為空白對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次，分別在12、24和36 h后記錄成蟲(chóng)死亡數(shù)。

1.2.5對(duì)香蕉花薊馬若蟲(chóng)和成蟲(chóng)的毒殺作用采用濾紙藥膜法［13］，取定容好山蒟提取物20 mL；梯度稀釋到2.5、2.0、1.5、1.0、0.5 mg/mL備用；在直徑6 cm的玻璃培養(yǎng)皿底部，鋪一張同樣直徑的濾紙，用移液槍吸取l mL藥液均勻滴于濾紙上，待丙酮揮發(fā)后，用毛筆將香蕉花薊馬若蟲(chóng)、成蟲(chóng)（適量乙醚麻醉）各30頭移入培養(yǎng)皿中，待蟲(chóng)身沾滿藥液后放入長(zhǎng)3 cm的香蕉花苞片（香蕉花薊馬飼料）上，然后用封口膜將培養(yǎng)皿封口，置于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)；24 h后檢查各處理香蕉花薊馬若蟲(chóng)、成蟲(chóng)的死亡數(shù)和存活數(shù)（以毛筆尖觸動(dòng)蟲(chóng)體，不動(dòng)者為死亡）；每處理重復(fù)5次，以丙酮為空白對(duì)照，以魚(yú)藤酮為藥物對(duì)照。

1.3數(shù)據(jù)處理

死亡率（%）=（死亡蟲(chóng)數(shù)/總蟲(chóng)數(shù)）×100 （ 1）

校正死亡率（%）= ［（處理死亡率-對(duì)照死亡率） /（1-對(duì)照死亡率）］ ×100 （ 2）

利用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)算死亡率［14］，求出毒力方程、相關(guān)系數(shù)、LC50和置信區(qū)間。

2 結(jié)果與分析

2.1對(duì)斜紋夜蛾卵的毒殺作用

由表1可知，山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾卵的毒殺活性與魚(yú)藤酮的比較接近，LC50分別為1.87、1.82 mg/ mL，魚(yú)藤酮的活性稍好于山蒟。這表明山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾卵有較好的毒殺作用。

表1　試驗(yàn)藥劑對(duì)斜紋夜蛾卵的毒殺作用

2.2對(duì)斜紋夜蛾3齡幼蟲(chóng)的毒殺作用

2.3對(duì)斜紋夜蛾蛹的毒殺作用

試驗(yàn)結(jié)果表明，山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾蛹基本沒(méi)有毒殺活性。在最高濃度10 mg/mL時(shí)，校正未羽化率為1.11%；當(dāng)供試濃度為2.5 mg/mL及以下時(shí)，校正未羽化率為0%。山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾蛹的毒殺效果與空白對(duì)照差異不明顯。對(duì)比魚(yú)藤酮對(duì)斜紋夜蛾蛹的毒殺作用，10、5、2.5、1.25、0.625 mg/mL處理的校正未羽化率依次為12.22%、8.89%、8.89 %、5.56%、由表2可知，山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾3齡幼蟲(chóng)的 毒殺作用與魚(yú)藤酮接近。作用12、24 h后，山蒟提取物的毒殺效果略好于魚(yú)藤酮；但是作用36 h后，魚(yú)藤酮的毒殺效果略好于山蒟提取物；山蒟提取物的LC50為0.45～0.66 mg/mL，而魚(yú)藤酮的LC50為0.44～0.69mg/mL。這說(shuō)明山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾3齡幼蟲(chóng)有非常好毒殺活性并且活性接近傳統(tǒng)植物源農(nóng)藥魚(yú)藤酮。2.22%，和空白對(duì)照的差異也不明顯。這說(shuō)明山蒟提取物和魚(yú)藤酮對(duì)斜紋夜蛾蛹的毒殺活性都很弱，但魚(yú)藤酮對(duì)斜紋夜蛾蛹的毒殺活性要比山蒟提取物略好。

表2　試驗(yàn)藥劑對(duì)斜紋夜蛾3齡幼蟲(chóng)的毒殺作用

2.4對(duì)斜紋夜蛾成蟲(chóng)的毒殺作用

由表3可知，山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾成蟲(chóng)有非常好的毒殺活性，并且活性接近傳統(tǒng)植物源農(nóng)藥魚(yú)藤酮，山蒟提取物的LC50為0.96～1.19 mg/mL，而魚(yú)藤酮的LC50為0.43～0.57 mg/mL?？傮w來(lái)看，魚(yú)藤酮的殺成蟲(chóng)活性要比山蒟提取物的稍好。

2.5對(duì)薊馬若蟲(chóng)和成蟲(chóng)的毒殺作用

由表4可知，山蒟提取物對(duì)薊馬若蟲(chóng)和成蟲(chóng)均有一定的毒殺作用，且其活性與魚(yú)藤酮的差別不大；其中，山蒟提取物對(duì)薊馬成蟲(chóng)的LC50為0.88 mg/mL，對(duì)薊馬若蟲(chóng)的LC50為1.34 mg/mL，表明山蒟提取物對(duì)薊馬成蟲(chóng)的毒殺活性大于對(duì)薊馬若蟲(chóng)的活性；這一點(diǎn)與魚(yú)藤酮的表現(xiàn)也一致。

表3　試驗(yàn)藥劑對(duì)斜紋夜蛾成蟲(chóng)的毒殺作用

表4　試驗(yàn)藥劑對(duì)薊馬若蟲(chóng)和成蟲(chóng)的毒殺作用

3 結(jié)論與討論

山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾卵、幼蟲(chóng)、成蟲(chóng)及香蕉花薊馬的若蟲(chóng)、成蟲(chóng)都有較好的毒殺作用，其LC50值均小于2 mg/mL，而對(duì)斜紋夜蛾蛹則沒(méi)有明顯的效果；其毒殺作用與對(duì)照藥劑魚(yú)藤酮接近，有的甚至優(yōu)于魚(yú)藤酮的效果，如魚(yú)藤酮對(duì)斜紋夜蛾幼蟲(chóng)的LC50值為0.96 mg/mL，而山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾幼蟲(chóng)的LC50值則達(dá)到了0.48 mg/mL，效果明顯好于魚(yú)藤酮?？紤]到山蒟是粗提取，魚(yú)藤酮是純凈物，說(shuō)明山蒟中含有的某種或幾種化學(xué)物質(zhì)對(duì)斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的毒殺作用優(yōu)于魚(yú)藤酮，山蒟的生物活性應(yīng)該高于魚(yú)藤酮，具有開(kāi)發(fā)為新型高效、低毒植物源農(nóng)藥的潛在價(jià)值。

試驗(yàn)中，山蒟提取物對(duì)斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的生物活性測(cè)定尚屬初探，為今后防治斜紋夜蛾和香蕉花薊馬的植物源殺蟲(chóng)劑的研制提供了一定的指導(dǎo)。而對(duì)于山蒟中活性成分的分離、純化、結(jié)構(gòu)鑒定及作用機(jī)理等方面的研究還有待進(jìn)一步深入。

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（責(zé)任編輯：成 平）

Toxicity of Piper hancei Extract on Spodoptera litura and Thrips hawaiiensis

MA Hao-wei，DONG Cun-zhu，ZHAO Hao
（College of Environment and Plant Protection， Hainan University， Haikou 570228， PRC）

In order to enrich the plant pesticides of controlling Spodoptera litura and thrips hawaiiensis， the insecticidal activity of piper hancei extract on four insect states of Spodoptera litura and two insect states of thrips hawaiiensis was studied. The results showed that the LC50values of extract from piper hancei and rotenone on eggs of Spodoptera litura were 1.87， 1.82 mg/mL， the LC50values of third instar larva were 0.48， 0.96 mg/mL， the adult LC50values were 0.44， 0.43 mg/mL. The LC50values of extract from Piper hancei and rotenone on nymph of Thrips hawaiiensis were 1.34， 0.88 mg/mL， the LC50values of the adults were 0.42 and 0.41 mg/mL， respectively. There was no significant effect on pupa of Spodoptera litura. From this we can know， the Piper hancei extract has significant toxic effect on eggs， third instar larva and adult of Spodoptera litura， nymph and adult of Thrips hawaiiensis， it has the potential value of the development for the plant pesticides.

Piper hancei； Spodoptera litura； Thrips hawaiiensis； toxicity

S482.3+9

A

1006-060X（2016）08-0072-03

10.16498/j.cnki.hnnykx.2016.08.021

2016-05-24

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31360447）；2015年海南大學(xué)研究生實(shí)踐創(chuàng)新項(xiàng)目

馬浩偉（1990-），男，河南開(kāi)封市人，碩士研究生，研究方向?yàn)樘烊辉崔r(nóng)藥。

董存柱