高效液相法測定顛茄磺芐啶片中硫酸阿托品含量

劉益慶（連云港市藥品檢驗(yàn)所　連云港　222006）

高效液相法測定顛茄磺芐啶片中硫酸阿托品含量

劉益慶（連云港市藥品檢驗(yàn)所連云港222006）

目的：建立測定顛茄磺芐啶片中硫酸阿托品含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.8%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.9）-乙腈（85∶15）為流動(dòng)相，檢測波長為210nm，柱溫為室溫。結(jié)果：硫酸阿托品在12.56～200.96μg/ mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；r=0.9998；平均回收率為96.79%（n=6），RSD為1.4%。結(jié)論：該方法簡便、快速、準(zhǔn)確并且專屬性強(qiáng)。

顛茄磺芐啶片 硫酸阿托品 高效液相

顛茄磺芐啶片（Belladonna Sulfamethoxazole and Trimerhoprim Tablets）為復(fù)方制劑，其組分為：磺胺甲噁唑、甲氧芐啶、顛茄流浸膏?；前芳讎f唑作用于二氫葉酸合成酶，干擾合成葉酸的第一步，甲氧芐啶作用于葉酸合成代謝的第二步，選擇性抑制二氫葉酸還原酶的作用，二者合用可使細(xì)菌的葉酸代謝受到雙重阻斷。顛茄為M膽堿受體阻斷藥，能抑制乙酰膽堿的毒蕈堿作用，主要抑制節(jié)后膽堿能神經(jīng)支配的自主性效應(yīng)器部位乙酰膽堿的活動(dòng)，受乙酰膽堿支配的平滑肌的活動(dòng)也被抑制。抑制平滑肌、心肌、竇房結(jié)和房室結(jié)，以及外分泌腺等的興奮。較大量的顛茄也能減少胃腸的蠕動(dòng)和分泌，降低輸尿管和膀胱的張力，對(duì)膽總管和膽囊僅略為松弛。目前，還沒有特定的方法對(duì)顛茄磺芐啶片中的顛茄流浸膏的成分進(jìn)行定量，故建立此方法極為重要。

1　儀器與試藥

Aglient 1260型高效液相色譜儀；梅特勒AB265S電子分析天平；硫酸阿托品對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為100040-201312）；顛茄磺芐啶片（哈藥集團(tuán)制藥六廠，批號(hào)為：20120416，20130522，20140517）；陰性對(duì)照品（自制）；乙腈為色譜純，水為超純水，三乙胺、磷酸均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱：菲羅門C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.8%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.9）-乙腈（85∶15）；檢測波長：210nm；柱溫：室溫。

2.2溶液制備：對(duì)照品溶液的制備：精密稱取硫酸阿托品對(duì)照品0.02512g，置25ml量瓶，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。

供試品溶液的制備：取本品10片，研磨成細(xì)粉，置分液漏斗中，加氨試液15ml，振搖使溶解，迅速用氯仿振搖提取6次，每次10ml，劇烈振搖，合并所有的氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状际蛊淙芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

陰性對(duì)照品溶液制備：按處方比例稱取磺胺甲噁唑、甲氧芐啶及輔料適量，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.3方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：精密量取硫酸阿托品對(duì)照品溶液，分別制成濃度為12.56、25.12、50.24、100.48、200.96μg/mL的溶液，依次進(jìn)樣10μL進(jìn)行測定，以峰面積（Y）對(duì)濃度（x）作線性方程，得到Y(jié)=11.047x+17.917，r=0.9998（n=5）。結(jié)果表明，硫酸阿托品對(duì)照品濃度在12.56～200.96μg/mL范圍內(nèi)峰面積與其濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取同一濃度的硫酸阿托品對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μL，結(jié)果其峰面積的RSD為0.92%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取同一批（20140517）供試品溶液，分別于2、4、6、8、12、24h時(shí)進(jìn)樣，按上述色譜條件測定。結(jié)果峰面積的RSD為1.21%（n=6），表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：取同一批（20140517）樣品5份，按照供試品溶液制備方法處理并依次測定。結(jié)果RSD為1.8%（n=5），表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已知含量的樣品1g三份，1.25g三份，1.5g三份，置9個(gè)25ml量瓶中，分別精密稱取硫酸阿托品對(duì)照品約25mg三份，30mg三份，40mg三份，依次置9個(gè)25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1　加樣回收試驗(yàn)

樣品含量測定：取3批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定含量，分別進(jìn)樣10μl，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見表2、圖1。

表2　樣品含量測定結(jié)果

3　討論

顛茄磺芐啶片所含的顛茄流浸膏成分很少，容易受到磺胺甲惡唑的干擾，筆者嘗試很多提取方法，諸如乙酸乙酯、氯仿，最后通過加入氨試液，氯仿振搖萃取，提取到量比較多的硫酸阿托品成分。

關(guān)于流動(dòng)相的選擇，筆者嘗試了水—乙腈、緩沖鹽—甲醇、水—緩沖鹽—乙腈，通過不斷摸索、調(diào)節(jié)幾相的比例，最終確定了本次實(shí)驗(yàn)的色譜條件為：0.8%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.9）-乙腈（85∶15），檢測波長為210nm。該條件能使樣品中的各組分得到有效分離，精確定量硫酸阿托品的含量，并無干擾，見圖1。

關(guān)于進(jìn)樣量的選擇，筆者嘗試了 5μL、10μL、15μL和20μL，由于該藥中含有磺胺甲噁唑和甲氧芐啶，組分高，出峰很多，10μL效果最好。

顛茄磺芐啶片主藥成為為磺胺甲噁唑和甲氧芐啶，筆者曾根據(jù)溶解性試圖將此兩組成分去除，只留下顛茄流浸膏，但效果不明顯，今后可以考慮利用柱切系統(tǒng)將這兩種主藥成分去除！參考文獻(xiàn)

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：1335-1336.

［2］陳浩，張文婷，陳勇，郭增喜，程巧鴛.RP-HPLC法測定顛茄片中硫酸阿托品的含量［S］.西北藥學(xué)雜志，2010，25（5）：328-329.

［3］韓忠剛，馮華，羅秀瓊.HPLC法測定顛茄浸膏片中硫酸阿托品的含量［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，14（9）：47.

Determination of Atropine in BelladonnaSulfamethoxazoleandTrimerhoprim Tablets by HPLC

Liu Yiqing（Lianyungang Institute for Drug Control，Lianyungang 222006）

Objective：To establish a HPLC methodfor determination of Atropine in Belladonna Sulfamethoxazole andTrimerhoprim Tablets.Methods：The HPLC System consistedof Gemini Phenomenex C18column，0.8%triethylamine solution（adjust pH value to 2.9 with phosphoric acid）-acetonitrile（85∶15）as mobile phase，with detection wavelength 210nm.Results：The linear range of atropine was 12.56～200.96μg/mL.The mean recovery was 96.79%（n=6）.conclusion：The method is proved to be simple，rapid，accurate and exclusive.

Belladonna Sulfamethoxazole and Trimerhoprim Tablets Atropine HPLC

R927.2

A

1672-8351（2016）02-0013-02