遲濤 錢東 王銳 郭亞飛 袁中旭
端粒結(jié)合蛋白PinX1在大腸癌中的表達(dá)及其臨床意義
遲濤1錢東2王銳1郭亞飛1袁中旭1
目的:研究端粒結(jié)合蛋白PinX1在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法:收集共86例接受根治性手術(shù)的大腸癌病人術(shù)后標(biāo)本,運(yùn)用免疫組化的方法(IHC)檢測(cè)標(biāo)本中PinX1的表達(dá)并分析PinX1的表達(dá)與病人臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:與正常結(jié)腸上皮相比,PinX1在大腸癌組織中呈低表達(dá)。生存分析發(fā)現(xiàn)PinX1的低表達(dá)預(yù)示著病人的不良預(yù)后,多因素分析揭示PinX1的表達(dá)是預(yù)測(cè)病人預(yù)后的獨(dú)立因素。結(jié)論:研究揭示PinX1是大腸癌病人預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子,其可作為臨床大腸癌患者預(yù)后分析判斷依據(jù)之一。
大腸癌PinX1臨床預(yù)后
大腸癌的發(fā)病率占據(jù)歐美國(guó)家癌癥發(fā)病率的第2位,全世界每年大約有100萬(wàn)新增病例,同時(shí)至少50萬(wàn)人死亡[1~2]。在中國(guó),大腸癌的發(fā)病率逐年上升,排在惡性腫瘤第4~6位。大腸癌從遺傳學(xué)上實(shí)質(zhì)是基因相關(guān)病,癌基因的激活和(或)抑癌基因的失活與其發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。尋找更多更有效的可以預(yù)測(cè)病人預(yù)后及治療的基因靶標(biāo)對(duì)于優(yōu)化病人的治療方案及改善臨床治療效果十分必要。
1.1一般資料從天津市腫瘤醫(yī)院收集2005~2010年86例大腸癌病人及25例正常大腸組織石蠟標(biāo)本(標(biāo)本來(lái)源于結(jié)直腸良性腫瘤患者)。所有組織均為術(shù)后標(biāo)本并經(jīng)過(guò)病理學(xué)確診。所有納入研究的病人均具有完整的隨訪資料。病人的臨床病理特征見(jiàn)表1。
1.2方法
1.2.1免疫組化染色常規(guī)石蠟包埋組織,4μm厚連續(xù)切片后脫蠟,梯度酒精水化后進(jìn)行抗原修復(fù),自然冷卻至室溫。加3%雙氧水(H2O2)室溫孵育5~10min,PBS沖洗。滴加正常山羊血清封閉非特異性抗原后,加一抗,4℃孵育過(guò)夜,PBS沖洗。滴加二抗37℃反應(yīng)15min,PBS沖洗。DAB顯色。蘇木素輕度復(fù)染,脫水、透明、封片。免疫組織化學(xué)陽(yáng)性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):免疫組化結(jié)果以陽(yáng)性染色腫瘤細(xì)胞占所有腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比進(jìn)行打分,將PinX1陽(yáng)性染色細(xì)胞比率>50%定為高表達(dá)組,而<50%定為低表達(dá)組。病理結(jié)果由兩位病理醫(yī)生在不知病例資料的情況下,獨(dú)立進(jìn)行閱片并評(píng)分,當(dāng)出現(xiàn)分歧時(shí),由兩位專家將不同的判斷結(jié)果進(jìn)行重新評(píng)估,直到兩位專家得到一致的意見(jiàn)。
1.2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用Kaplan-Meier法計(jì)算不同分組病人的生存率,Log-rank法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),Cox回歸模型進(jìn)行單變量及多變量預(yù)后分析,相關(guān)計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析,數(shù)據(jù)以±s表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
表1 PinX1的表達(dá)和病人臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系
2.1PinX1蛋白在大腸癌組織中呈低表達(dá)通過(guò)免疫組化檢測(cè),我們發(fā)現(xiàn),PinX1在細(xì)胞核中表達(dá)(圖1A-D)。根據(jù)我們的評(píng)分原則(見(jiàn)材料與方法),總共86例病人腫瘤組織中,PinX1低表達(dá)的為52例(60%),而在25例正常大腸黏膜組織中,PinX1低表達(dá)的僅為6例(24%),兩者之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.012)。此外,PinX1的表達(dá)水平和腫瘤的分化程度呈正相關(guān)(P=0.037;圖1)。未發(fā)現(xiàn)PinX1的表達(dá)與病人其它臨床病理因素之間的相關(guān)性(P>0.05;圖1)。
圖1 PinX1在正常結(jié)腸腺體及大腸癌組織中的表達(dá)(免疫組化染色)
2.2腫瘤組織中PinX1低表達(dá)預(yù)示病人不良預(yù)后根據(jù)我們的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)將病人分別分為兩個(gè)亞組:PinX1高表達(dá)組和PinX1低表達(dá)組。我們發(fā)現(xiàn),無(wú)論是比較總生存率(圖2A,P=0.016)還是無(wú)病生存率(圖2B,P=0.042),PinX1高表達(dá)組病人的預(yù)后均明顯好于PinX1低表達(dá)組,比較數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。多因素分析顯示,和病人TNM分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等指標(biāo)一樣,PinX1的表達(dá)可以作為預(yù)測(cè)病人生存的獨(dú)立指標(biāo)(P=0.015;見(jiàn)表2)。
圖2 Kaplan-Meier分析PinX1的表達(dá)和入組的大腸癌病人的生存預(yù)后關(guān)系
表2 多因素Cox回歸分析結(jié)直腸癌總生存期
從分子水平尋找預(yù)測(cè)腫瘤病人預(yù)后生物標(biāo)志物的研究越來(lái)越廣泛,而相關(guān)研究成果也越來(lái)越多地應(yīng)用于腫瘤的診斷、治療及預(yù)后判斷。PinX1是在進(jìn)化上高度保守并與端粒/端粒酶相互作用的核蛋白。因?yàn)槠渑c端粒酶結(jié)合并且其蛋白炭端有較強(qiáng)的抑制端粒酶活性的功能,PinX1被認(rèn)為是一種端粒酶抑制因子和潛在的抑癌基因[3]。有研究報(bào)道PinX1在肝癌中低表達(dá),而錢東等[4~5]研究提示其在食管鱗癌組織中呈高表達(dá)并與病人放化療抵抗相關(guān)。這提示PinX1在腫瘤中的表達(dá)及作用具有腫瘤特異性。本研究旨在研究PinX1在大腸癌組織中的表達(dá)情況及其對(duì)病人生存預(yù)后的影響。
我們的研究發(fā)現(xiàn):與正常的結(jié)腸組織相比,PinX1在大腸癌病人組織中普遍呈現(xiàn)低表達(dá)。我們知道,比較正常組織與腫瘤組織遺傳學(xué)及表觀遺傳學(xué)的差異是現(xiàn)代腫瘤分子生物學(xué)的基石,也是發(fā)現(xiàn)腫瘤相關(guān)基因(包括癌基因和抑癌基因)的有效途徑[6~7]。PinX1的這種差異表達(dá)提示我們其可能在大腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著一定的功能。進(jìn)一步,我們根據(jù)PinX1在大腸癌中的表達(dá)強(qiáng)度不同,將病人分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。生存分析的結(jié)果清晰的顯示,PinX1高表達(dá)組病人的預(yù)后明顯好于PinX1低表達(dá)組,PinX1的表達(dá)可以作為預(yù)測(cè)病人預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。這些結(jié)果和之前在腸癌及肝癌中的相關(guān)研究結(jié)果一致[4~7]。但是,也有研究提示PinX1在食管鱗癌中呈高表達(dá),PinX1高表達(dá)是接受根治性放化療食管鱗癌病人預(yù)后不良因素[5]。這提示PinX1在腫瘤中的表達(dá)、狀態(tài)及功能并非一成不變,而是具有腫瘤特異性。腺癌和鱗癌中PinX1參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)功能可能不同。
綜上所述,我們的研究發(fā)現(xiàn),PinX1在大腸癌中呈低表達(dá),而大腸癌中表達(dá)PinX1較高的患者總體預(yù)后較PinX1較低的患者好,PinX1可以作為預(yù)測(cè)大腸癌患者預(yù)后判斷分子生物學(xué)標(biāo)志之一。
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/(編審:劉文斌施仲賦)
Expression and Clinical significance of PinX1 in Colorectal Carcinoma
1.Anhui No.2 People's Hospital,Hefei 230041,Anhui
2.Tianjin Medical University,Tianjin 300060,China
CHI Tao1,QIAN Dong2,WANG Rui1,et al
Objective:To investigate the expression and clinical significance of PinX1 in Colorectal Carcinoma (CRC).Methods:The expression dynamics of PinX1 was detected byimmunohistochemistry(IHC)in one cohort of CRC patients;The prognostic significance of PinX1 in CRC patients was analysis by Kaplan-Meier;Results:the expression of PinX1 in CRC tissues was lower than that in normal non-cancerous tissues.Low expression of PinX1 was an independent predictor for short overall survival(OS)and disease-specific survival(DFS)of CRC patients.Conclusion:our data suggested that PinX1 was a novel prognostic biomarker for CRC patients survival,and it can be used as one analysis judgment of the clinical prognosis of patients with colorectal cancer.
Colorectal Carcinoma;PinX1;clinical prognosis
R735.34【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A
1671-8054(2016)01-0030-03
1.安徽省第二人民醫(yī)院普外科合肥230041 2.天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院放射治療科天津300060
許榕生,男,主任醫(yī)師
2015-11-10收稿,2016-01-12修回