2型糖尿病伴干眼癥患者淚液和血清白細胞介素6的變化

張潔，王偉超，王虹，劉素波，李雅婷

（1.石家莊市第三醫(yī)院 眼科，河北 石家莊 050011；2.石家莊市第一醫(yī)院 內(nèi)分泌科，河北，石家莊050011；3.石家莊市第一醫(yī)院 干部老年病科，河北 石家莊 050011；4.石家莊市第七醫(yī)院健康檢查科，河北 石家莊 050031）

論著

2型糖尿病伴干眼癥患者淚液和血清白細胞介素6的變化

張潔1，王偉超2，王虹3，劉素波2，李雅婷4

（1.石家莊市第三醫(yī)院 眼科，河北 石家莊 050011；2.石家莊市第一醫(yī)院 內(nèi)分泌科，河北，石家莊050011；3.石家莊市第一醫(yī)院 干部老年病科，河北 石家莊 050011；4.石家莊市第七醫(yī)院健康檢查科，河北 石家莊 050031）

目的探討2型糖尿病伴干眼癥患者淚液、血清中白細胞介素6（IL-6）濃度的變化。方法納入人群分為3組：A組為2型糖尿病不伴干眼癥患者組，B組為2型糖尿病伴干眼癥患者組，C組為正常對照組。用ELISA法分別檢測3組人群淚液、血清中IL-6的含量。采用單因素方差分析進行數(shù)據(jù)之間比較。并對淚液、血清IL-6進行相關(guān)性分析。結(jié)果A、B和C組淚液IL-6含量分別為：（12.90±8.30）pg/m l、（22.43±12.97）pg/m l和（4.69±3.29）pg/m l，血清IL-6含量分別為（144.85±57.52）pg/m l、（256.26±117.96）pg/m l和（97.01±51.60）pg/m l。其中A組與B組血清及淚液IL-6含量均較C組高，B組血清及淚液IL-6含量較A組高（P＜0.01）；淚液IL-6與血清IL-6水平呈正相關(guān)（r=0.73，P＜0.01）。結(jié)論2型糖尿病不伴干眼癥患者淚液、血清IL-6含量均較正常健康人群增高，2型糖尿病伴干眼癥患者淚液、血清IL-6水平進一步升高，提示淚液、血清IL-6水平與2型糖尿病伴干眼癥的發(fā)生有關(guān)。淚液IL-6與血清IL-6水平呈直線正相關(guān)，提示淚液IL-6水平監(jiān)測對于糖尿病并發(fā)干眼癥患者的病情監(jiān)測有一定的臨床價值。

糖尿?。桓裳郯Y；淚液；血清；白細胞介素6

糖尿病現(xiàn)已成為僅次于心腦血管疾病和腫瘤之后的第3位危害人類健康的疾病，糖尿病可導致全身多種器官的并發(fā)癥，而以眼部為首發(fā)癥狀就診于眼科的糖尿病患者愈來愈引起臨床醫(yī)師的關(guān)注［1］。既往對糖尿病視網(wǎng)膜病變的關(guān)注和研究較多，近年來研究認為，糖尿病眼表病變也成為導致糖尿病患者生活質(zhì)量降低的重要原因［2］。干眼癥是2型糖尿病患者中高發(fā)的一類眼表疾病，據(jù)統(tǒng)計我國2型糖尿病患者中一半以上合并此癥。近年來，糖尿病發(fā)病炎癥學說受到廣泛關(guān)注和普遍認可，該學說認為糖尿病及其血管并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展是有多種炎癥因子參與的［3-4］。其發(fā)生、發(fā)展過程中介導炎癥反應(yīng)的重要細胞因子之一為白細胞介素6（IL-6）［5］。而目前細胞因子與干眼的關(guān)系是干眼癥研究的熱點之一，研究顯示干燥性角結(jié)膜炎患者結(jié)膜和淚液中炎癥因子的表達明顯增高，其中白細胞介素IL-1α、IL-6、IL-8和腫瘤壞死因子TNF-α、TNF-β的表達水平在正常人與干眼癥患者之間有明顯差異。本研究通過收集2型糖尿病伴干眼癥患者的血清及淚液，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗對其細胞因子IL-6濃度進行檢測，旨在探討2型糖尿病并發(fā)干眼癥患者是否與糖尿病患者自身介導炎癥反應(yīng)的細胞因子IL-6相關(guān)。

1　資料與方法

1.1材料與試劑

人IL-6 ELISA試劑盒（美國TBE公司），敏感性＞0.7 pg/m l。

1.2儀器與設(shè)備

超低溫冰箱、酶標儀（法國Jouan公司）；LXJ-Ⅱ型離心機（上海醫(yī)用儀器廠）。

1.3試驗方法

1.3.1病例選擇將納入人群分為3組：2型糖尿病無干眼癥組（A組）50例。其中，男性24例，女性26例；平均年齡55.6歲。2型糖尿病伴干眼癥組（B組）50例，其中，男性25例，女性25例；平均年齡57.4歲。正常對照組（C組）50例。其中，男性27例，女性23例；平均年齡54.3歲。以上3組人群的年齡和性別比例均相匹配。

2型糖尿病患者按1999年WHO《2型糖尿病的診斷標準》進行確診，患者起病年齡均＞30歲，患者口服降糖藥物有效果，除外降糖藥物繼發(fā)性失效，糖尿病自身免疫相關(guān)抗體檢測陰性，非酮癥狀態(tài)，除外嚴重心、肺、腦疾患，除外嚴重肝、腎疾病以及明確應(yīng)激狀態(tài)。

干眼癥參照2003年全國眼表疾病研討會所提出的干眼癥診斷標準進行確診，患者無眼部外傷及手術(shù)史、無角膜接觸鏡佩戴史；3個月內(nèi)眼部未曾發(fā)生活動性炎癥，局部無滴眼液使用史；除2型糖尿病外無其他影響淚腺分泌淚液疾病。

以健康志愿者為正常對照組。3個月內(nèi)眼部無不適感，無用眼疲勞。

實際上，這次收購行動早在2013年就出現(xiàn)了苗頭。2013年順豐推出重貨業(yè)務(wù)之初，就有人預(yù)判，順豐要做中國的聯(lián)邦快遞，快運是必走之路。順豐的競爭對手是占市場份額相對較大的老牌快運企業(yè)，如果順豐要沖擊德邦、安能、百世的三強地位，未來一定會另起新網(wǎng)運行，否則多少會損傷順豐對商業(yè)件客戶的強品牌強粘性。時隔5年，時機終于到來。

1.3.2標本收集所有受試者禁食、停藥8～10 h，然后分別同時采集3組人群的血液和淚液，檢查者輕拉被檢者下瞼結(jié)膜并微后壓，以毛細玻璃管輕置于穹窿結(jié)膜與球結(jié)膜交界處，使淚液引流入毛細玻璃管，分別收集左、右眼淚液，轉(zhuǎn)移至同一微量離心管。標本收集成功，淚液標本置于-20℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?；血液標本離心分離血清，與淚液標本同條件超低溫保存以備集中檢測。

標本采集注意事項：以毛細玻璃管法收集淚液，由經(jīng)培訓合格的研究人員依據(jù)標準操作流程完成，檢查者動作需輕柔。

1.3.3檢測方法采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）檢測。遵照美國TBE公司的人IL-6 ELISA試劑盒說明進行操作。OD450值采用酶標儀進行測定。標準曲線繪制，橫坐標為標準品濃度，縱坐標為OD值。最后通過標本的OD值在標準曲線上查出其濃度。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（）來表示，分別對淚液、血清中IL-6的濃度進行單因素方差分析，若組間不同或不完全相同，再進一步做SNK-q檢驗從而再比較各組間的差別。最后對淚液、血清中IL-6濃度水平作相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.13組人群淚液IL-6的含量

A組為（12.90±8.30）pg/m l，B組為（22.43± 12.97）pg/m l，C組為（4.69±3.29）pg/ml。對3組數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，F(xiàn)值為42.98，提示A組、B組和C組各組間不同或不完全相同，進一步做SNK-q檢驗比較各組間差別。研究結(jié)果表明，A組和B組淚液IL-6含量均高于C組，B組淚液IL-6含量高于A組，q值分別為4.29、9.26和-4.98，P＜0.01。見附表。

A組為（144.85±57.52）pg/ml，B組為（256.26± 117.96）pg/m l，C組為（97.01±51.60）pg/m l。對A組、B組和C組的3組數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，其F值為50.365，表明A組、B組和C組各組間不同或不完全相同，進一步做SNK-q檢驗再比較各組間差別，研究結(jié)果表明，A組和B組血清IL-6含量均較C組高，B組血清IL-6含量較A組高，q值分別為2.94、9.78和-6.84，P＜0.01，見附表。

附表　淚液及血清中IL-6的含量 （n=50）

2.3淚液IL-6與血清IL-6濃度的相關(guān)分析

將本研究所有受試人群每個受試者的淚液IL-6濃度和血液IL-6濃度作為變量，判斷兩者的相關(guān)關(guān)系。淚液IL-6濃度分布與血清IL-6濃度分布呈直線正相關(guān)，其中r值為0.73，P＜0.01，95%CI：（0.27，0.92）。

3　討論

糖尿病為當今世界危害人類健康的3大疾病之一，近年來，糖尿病的發(fā)病率已呈現(xiàn)出逐年升高趨勢［6］。隨著2型糖尿病患者數(shù)量的增加，糖尿病引起的眼表并發(fā)癥越來越受到臨床重視。研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病患者的干眼癥發(fā)生率明顯高于正常人。干眼是指任何原因引起的淚液質(zhì)或量異常，或動力學異常導致的淚膜穩(wěn)定性下降，并伴有眼部不適，和（或）眼表組織損害為特征的多種疾病的總稱［7］，是目前臨床上常見的眼表疾病之一。干眼的發(fā)病因素復(fù)雜，表現(xiàn)為眼部的干澀、燒灼感、異物感、癢感、畏光、眼紅及視疲勞等癥狀。有研究證實，糖尿病患者的血糖長期處于較高水平會影響其機體正常的生理代謝、免疫反應(yīng)和細胞凋亡，從而導致眼表結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，誘使干眼癥的發(fā)生。干眼分為淚液生成不足型和蒸發(fā)過強型兩種。淚液生成不足型干眼在臨床上以干燥性角結(jié)膜炎和SJ?GREN綜合征最為多見，蒸發(fā)過強型干眼則包括瞼板腺功能障礙、暴露及角膜接觸鏡等因素所致的干眼癥。

眼表面的炎癥反應(yīng)是影響干眼病病情的重要因素。多數(shù)學者認為，這種炎癥是一種非感染性且基于免疫反應(yīng)的炎癥。盡管干眼癥患者的病因很多，但其共有的一個病因就是炎癥因子的參與［8］。很多研究顯示，細胞因子 IL-1α、IL-6、IL-8、TNF-α 和TNF-β的表達水平在正常人與干眼癥患者之間有明顯差異。在嚴重干眼癥患者淚液和結(jié)膜上皮細胞中，上述的細胞因子含量明顯增加，并且與干眼癥的嚴重程度相關(guān)［9-10］。免疫病理結(jié)果表明干燥性角結(jié)膜炎和SJ?GREN綜合征患者結(jié)膜上皮有多種炎性因子增高，而IL-6是最有價值的［11］。2型糖尿病的炎癥學說已得到眾多學者的認可，炎癥因子在2型糖尿病發(fā)病機制中的作用也備受關(guān)注。IL-6是重要的炎癥因子之一，其在2型糖尿病發(fā)生發(fā)展過程中的作用不容忽視。因此本研究首先考慮對淚液IL-6水平與2型糖尿病伴干眼癥的關(guān)系進行探討。同時，不可否認淚液其他炎癥因子與2型糖尿病伴干眼癥的關(guān)系，可在后續(xù)的研究中進一步觀察。

B細胞、T細胞和單核細胞等是產(chǎn)生IL-6的主體，IL-6在損傷修復(fù)及免疫、炎癥反應(yīng)中起到了關(guān)鍵性調(diào)節(jié)作用［12］，IL-6水平檢測在糖尿病并發(fā)癥防控中的作用應(yīng)受到重視，本研究以淚液、血液為檢查手段，探討IL-6在糖尿病并發(fā)干眼癥患者淚液及血液中的表達。IL-6的主要生物學作用是促進B細胞增殖分化和分泌抗體；在IL-2和IL-6共同作用下，T細胞分化為細胞毒性T淋巴細胞；促使肝臟合成急性期蛋白；并對神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等產(chǎn)生廣泛效應(yīng)。IL-6為一種內(nèi)源性致熱原，可參與炎癥反應(yīng)；另外，IL-6作為急性反應(yīng)的始發(fā)因子，可參與很多疾病的發(fā)病過程，并起到重要的作用。SHENG等［13］研究發(fā)現(xiàn)，IL-6與胰島素相互作用，從而可以影響2型糖尿病的發(fā)生，有證據(jù)表明IL-6參與2型糖尿病的免疫過程，低濃度IL-6水平的生物學效應(yīng)主要表現(xiàn)為免疫調(diào)節(jié)作用，高濃度IL-6則主要表現(xiàn)為病理性損傷作用。胰島素抵抗在2型糖尿病發(fā)病中起重要作用，并貫穿于2型糖尿病全過程，IL-6也是一種可以引起胰島素抵抗的重要細胞因子［14］。正常人外周血IL-6水平顯著低于2型糖尿病患者外周血IL-6水平。有研究顯示［15］，血清IL-6水平與糖尿病的嚴重程度有顯著的關(guān)聯(lián)。國內(nèi)有研究表明，血清IL-6水平與2型糖尿病患者的病程呈正相關(guān)，可做為其嚴重程度的獨立危險因素，因此可成為糖尿病患者視網(wǎng)膜病變病情的監(jiān)測指標［16］。國內(nèi)學者對比視網(wǎng)膜病變光凝治療前后的房水及玻璃體內(nèi)VEGF和IL-6含量，發(fā)現(xiàn)治療后VEGF和IL-6含量顯著降低，提示了房水中VEGF和IL-6濃度的變化和視網(wǎng)膜病變的發(fā)生有密切的關(guān)系。FUNATSN等［17］通過檢測糖尿病患者房水、玻璃體和血漿中的IL-6濃度，并研究其相互的關(guān)系，結(jié)果表明隨著糖尿病病程的延長，眼底視網(wǎng)膜病變的加重，患者房水、玻璃體和血漿中的IL-6濃度也隨之增高，由此提示IL-6與糖尿病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系。

綜合以上研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病、糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清中的IL-6水平明顯升高，糖尿病患者眼玻璃體和房水中IL-6的濃度也有顯著增高。本研究以2型糖尿病伴干眼癥患者為研究對象，檢測2型糖尿病伴干眼癥患者淚液及血清的IL-6濃度，在國內(nèi)外尚屬首創(chuàng)。淚液的收集檢查過程是無創(chuàng)，易于被患者接受。本研究通過檢測糖尿病患者淚液、血清中IL-6的濃度，進一步明確糖尿病患者淚液IL-6的水平與2型糖尿病并發(fā)干眼癥的關(guān)系，對糖尿病并發(fā)干眼癥患者的臨床病情監(jiān)測起到一定的作用。

本研究通過對A、B和C 3組人群血清IL-6的濃度進行測定，發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者較健康人血清IL-6濃度顯著升高，糖尿病并發(fā)干眼癥患者比糖尿病無干眼癥患者的血清IL-6濃度顯著升高。本研究通過對A、B和C 3組人群淚液IL-6進行測定，結(jié)果表明2型糖尿病患者較健康人的淚液IL-6濃度高，糖尿病并發(fā)干眼癥患者比糖尿病無干眼癥患者的淚液IL-6濃度高。由此可以推測：淚液、血清IL-6水平與2型糖尿病伴干眼癥的發(fā)生有關(guān)系。進一步研究淚液IL-6與血清IL-6的相關(guān)性表明，A、B和C 3組人群血清IL-6與淚液IL-6水平呈直線正相關(guān)，變化趨勢一致，即用淚液IL-6變化趨勢推測血液IL-6變化趨勢是可能和可行，因此對淚液IL-6濃度進行測定的方法，有望成為糖尿病并發(fā)干眼癥患者病情監(jiān)測及評估的可能方法。

［1］王淑莉，陳瑞合，黃寶玲，等.首診于眼科的2型糖尿病88例分析［J］.中華實用診斷與治療雜志，2011，25（5）:518-519.

［2］SCARDINA GA，RUGGIERI A，MESSINA P.Periodontal disease and sjogren syndrome:a possible correlation［J］.Angiology，2010，61（3）:289-293.

［3］BARZILAY JI，ABRAHAXN L，HECKBERT SR，et al.The relation of markers of inflammation to the development of glucose disorders in the elderly:the cardiovascular health study［J］.Diabetes，2001，50（16）:2384-2389.

［4］ANTONETTIDA，KLEIN K，GARDNER TW.Diabetic retinopathy［J］. N Engl JMed，2012，366（13）:1227-1239.

［5］MANNING P J，SUTHERLAND W H，WALKER R J，et al.The effect of glucose ingestion on inflammation and oxidative stress in obese individuals［J］.Metabolism，2008，57（10）:1345-1349.

［6］NAJAFI L，MALEK M，VALOJERDI A E，et al.Dry eye and its correlation to diabetes microvascular complications in peoplewith 2 diabetes mellitus［J］.J Diabetes Complications，2013，27（5）: 459-462.

［7］趙堪興，楊培增.眼科學［M］.第8版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2013:92.

［8］叢晨陽，畢宏生，溫瑩.干眼癥發(fā)病機制和治療方法的研究進展［J］.國際眼科雜志，2012，12（3）:464-467.

［9］YOON K C，JEONG IY，PARK Y G，et al.Interleukin-6 and tumor necrosis factor-alpha levels in tears of patients with dry eye syndrome［J］.Cornea，2007，26（4）:431-437.

［10］LAM H.Tear cytokine profiles in dysfunctional tear syndrome［J］. American Journal of Ophthalmology，2009，147（2）:198-205.

［11］PFLUGFELDER SC.Antiinflammatory therapy for dry eye［J］. Am J Ophthalmol，2004，137（2）:337-342.

［12］YAH Z，ZHAO N，WANG Z，et al.A mutated human tumor necrosis factor-alpha improves the therapeutic index in vitro and in vivo［J］.Cytotherapy，2006，8（4）:415-423.

［13］SHENG WH，CHIANG BL，CHANG SC，et al.Clinical manifeststions and inflammatory cytokine responses in patients with severe acute respiratory syndrome［J］.J Formos Med Assoc，2005，104（10）:715-723.

［14］RODRIGUEZ-RODRIGUEZ E，PEREA JM，LOPEZ-SOBALER A M，et al.Obesity，insulin resistance and increase in adipokines levels:importance of the diet and physical activity［J］. Nutr Hosp，2009，24（4）:415-421.

［15］KOLEVA-GEORGIEVA DN，SIVKOVA NP，TERZIEVA D，et al.Serum inflammatory cytokines IL-1beta，IL-6，TNF-alpha and VEGF have influence on the development of diabetic retinopathy［J］.Filia Med（Plovdiv），2011，533（2）:44-50.

［16］張艷茹.糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清同型半朧氨酸、自細胞介素-6和腫瘤壞死因子-α的檢測意義［J］.中國實用醫(yī)刊，2012，39（11）: 9-10.

［17］FUNATSN H，YAMASCHITA H，NOMA H，et al.Aqueous humour levels of cytokines are related to vitreous levels and progression of diabetic retinopathy in diabetic patient［J］.Opthalmology，2005，243（1）:3-8.

（張蕾編輯）

Expression of interleukin-6 in tears of type 2 diabetic patientsw ith xerophthalm ia

Jie Zhang1，Wei-chaoWang2，HongWang3，Su-bo Liu2，Ya-ting Li4
（1.Departmentof Ophthalmology，the Third Clinical Hospital of Shijiazhuang，Shijiazhuang，Hebei 050011，China；2.Department of endocrinology，the First Clinical Hospital of Shijiazhuang，Shijiazhuang，Hebei050011，China；3.Departmentof senile disease，the First Clinical Hospital of Shijiazhuang，Shijiazhuang，Hebei 050011，China；4.The Seventh Clinical Hospital of Shijiazhuang，Shijiazhuang，Hebei 050031，China）

Objective To detect the concentration of the interleukin-6（IL-6）in tears and serums of type 2 diabetic patientswith xerophthalmia.M ethods Patientswere divided into:Group A（type 2 diabetesmellitus），Group B（type 2 diabetesmellituswith xerophthalmia）and Group C（normal）.The concentrations of IL-6 in tear and serumwere detected by ELISA.Comparisons between groupswere tested by One-Way ANOVA analysis.Results Concentrations of tear IL-6 were（12.90±8.30）pg/m l in group A，（22.43±12.97）pg/m l in group B and（4.69±3.29）pg/ m l in group C.The concentrations of IL-6 in group A and group B were significantly higher than that in group C（P＜0.01）.The concentration of IL-6 in group B was significantly higher than that in group A（P＜0.01）.The level of tear IL-6 had positive correlation with the level of serum IL-6（r=0.73，P＜0.01）.Conclusions The IL-6 concentration of tear in diabetic patientswith xerophthalmia is elevated，which indicates that tear IL-6 and serum IL-6 are related to the occurrence of type 2 diabetesmellituswith xerophthalmia.Tear IL-6 level is positively related to serum IL-6 level，which indicates that tear IL-6 is useful in the surveillance of 2 diabetesmellituswith xerophthalmia.

diabetic；xerophthalmia；tear；serum；interleukin-6

R 771.3

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.12.012

1005-8982（2016）12-0053-05

2016-01-04