薯蕷皂苷對(duì)大鼠心肌收縮與鈉-鈣交換體的影響*

楊 帆，韓 鈺，叢恬馬先，康 毅，李 燕，孫 凱，尹永強(qiáng)，婁建石

薯蕷皂苷對(duì)大鼠心肌收縮與鈉-鈣交換體的影響*

楊 帆，韓 鈺，叢恬馬先，康 毅，李 燕，孫 凱，尹永強(qiáng)△，婁建石△

（天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室 ，天津300070）

目的:觀察薯蕷皂苷（Dio）對(duì)大鼠心肌收縮作用以及胞內(nèi)Ca2+濃度的影響 ，并初步探討其作用機(jī)制與Na+-Ca2+交換體（NCX）的關(guān)系。方法:采用Langendorff逆行主動(dòng)脈灌流法對(duì)大鼠離體心臟進(jìn)行灌流，利用壓力感受器插管法測(cè)定左心室相關(guān)心功能參數(shù)，記錄及其在應(yīng)用NCX選擇性抑制劑SEA0400情況下對(duì)左心室收縮壓（LVSP）、左心室舒張末期壓（LVEDP）、左心室內(nèi)壓最大上升/下降速率（±dp/dtmax）以及心率（HR）的影響；利用激光共聚焦顯微觀察薯蕷皂苷及SEA0400對(duì)大鼠心肌細(xì)胞H9c2細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的影響。結(jié)果:離體心臟灌流結(jié)果顯示，1μmol/LDio可顯著增加LVSP，增加約19.7%（P＜0.01）；增加左室內(nèi)壓最大上升速率（+dp/dtmax），增加約9.6% ；激光共聚焦測(cè)定Ca2+熒光強(qiáng)度實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:1μmol/L Dio可使H9c2細(xì)胞中Ca2+相對(duì)熒光強(qiáng)度增加（P＜0.01）；而在SEA0400存在的情況下，1μmol/L的Dio使細(xì)胞內(nèi)Ca2+相對(duì)熒光強(qiáng)度變?yōu)椋?7.09±0.63），給予Dio后差異有顯著性（P＜0.01）。在細(xì)胞液中無(wú)Ca2+或無(wú)Na+時(shí)，給予1μmol/L的Dio使Ca2+相對(duì)熒光強(qiáng)度減小，與給予1 μmol/L的Dio差異有顯著性（P＜0.01）。結(jié)論:Dio可增加左心室收縮壓和最大上升速率，表現(xiàn)正性肌力作用；Dio可使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加，其作用機(jī)制與增加Na+內(nèi)流 ，促進(jìn)NCX反向轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。

薯蕷皂苷；心??；大鼠；正性肌力作用 ；Na+-Ca2+交換體

【DOI】10.13459/j.cnki.cjap.2016.03.005

藥物的作用靶點(diǎn)在一定程度上決定了藥物療效。目前發(fā)現(xiàn)的與心肌收縮作用相關(guān)靶點(diǎn)［1］有很多，包括β腎上腺素受體［2］、磷酸二酯酶、L-型鈣通道、蛋白激酶A、蛋白激酶C、蛋白磷酸酶、Na+-K+-ATP酶［3］、Na+-Ca2+交換體（sodium-calcium exchanger，NCX）、肌漿網(wǎng)鈣泵［4］、蘭尼定受體、三磷酸肌醇受體等。其中，NCX作為調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡的重要途徑之一，與心肌收縮作用存在著密不可分的關(guān)系［5］?，F(xiàn)代研究［6-9］證實(shí) ，Dio具有改善心血管功能、降血脂、抗血小板聚集以及抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用。但Dio產(chǎn)生正性肌力作用及其具體機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道?；衔颯EA0400（2-［4-［（2，5-difluorophenyl）methoxy］phenyl］-5-ethoxyaniline）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類NCX選擇性阻斷劑 ，研究［10-13］表明，正常心肌細(xì)胞 25%的 Ca2+都是由 NCX外排，1μmol/L SEA0400可以抑制80%以上的Na+-Ca2+交換，對(duì)心肌細(xì)胞上其他離子通道、受體和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白沒(méi)有影響。本實(shí)驗(yàn)室研究了Dio對(duì)大鼠離體心臟的正性肌力作用，發(fā)現(xiàn)Dio能夠增加心臟收縮力，可增加心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度。本實(shí)驗(yàn)利用SEA0400作為模型藥物，探討Dio增加心肌收縮力和心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的機(jī)制，以大鼠離體灌流心臟和心肌H9c2細(xì)胞為載體，觀察Dio正性肌力作用和細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的變化，初步研究正性肌力作用與NCX之間的關(guān)系，為正性肌力藥物的探索提供新的發(fā)現(xiàn)與科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

大鼠心肌細(xì)胞H9c2細(xì)胞株（中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心）。健康、成年Wistar大鼠，雄性，體重250～300 g，合格證號(hào)SCXK（京）2012-0004，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。

1.2 主要儀器和試劑

儀器:PK-600S型恒溫水浴鍋；2℃～8℃藥品保存冰箱；電熱鼓風(fēng)干燥箱；微量加樣器；pH計(jì)；倒置熒光顯微鏡；Gemini XPS熒光讀板機(jī)；24孔板；0.22 μm微孔濾膜；共聚焦培養(yǎng)皿；GL-2 Langendorff灌流裝置；BL420-F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)；HW-1000超級(jí)恒溫水浴。

試劑:薯蕷皂苷（國(guó)家天然藥物研究中心）；SEA0400（MedChem Express，USA）；低糖DMEM培養(yǎng)基（HyClone，USA）；胎牛血清（Gibco，USA）；胰蛋白酶（HyClone，USA）；雙抗（青霉素及鏈霉素溶液100×）（北京索萊寶科技有限公司）；Fluo3-AM鈣離子熒光探針（碧云天）；JC-1熒光探針（碧云天）。

1.3 大鼠左心室功能測(cè)定

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組:1μmol/L Dio組；1μmol/L SEA0400組；1μmol/L SEA0400+1μmol/L Dio組。以給藥前5min作為正常對(duì)照，給藥后20 min作為給藥組。

1.3.2 離體心臟 Langendorff灌流法用25%烏拉坦1.0 g/kg麻醉大鼠，仰位固定于鼠臺(tái)上，迅速剪開(kāi)胸腔，暴露心臟，從主動(dòng)脈根部離斷取出心臟，放入4℃生理鹽水中，輕輕按壓，幫助泵出殘留血液并去除脂肪及結(jié)締組織。行主動(dòng)脈逆行插管，注意插管不宜過(guò)深，不得超過(guò)動(dòng)脈口進(jìn)入心腔。將插管連接Langendorff灌流裝置上，使用注射器快速注入4℃生理鹽水，排盡殘血，再以恒溫（37℃）、充氧（95%O2± 5%CO2）的K-H液8ml/min連續(xù)灌流，灌注壓為60 ～70mmHg左右。灌注K-H液。整個(gè)過(guò)程控制在1min以內(nèi)，以減少缺血對(duì)心臟組織造成的損傷。待心臟逐漸恢復(fù)跳動(dòng)，輕輕剪掉左心耳，采用插管法將球囊壓力感受器探頭經(jīng)左心房插入左心室。實(shí)驗(yàn)中選擇乳膠薄膜制作球囊，因其擴(kuò)展能力好，變形能力強(qiáng)，對(duì)心室壓力的變化更為敏感。壓力感受器經(jīng)壓力換能器與BL420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)相連，用于記錄左心室收縮曲線，采樣頻率為800/s。待心臟灌流穩(wěn)定20min后給藥。

1.3.3 觀測(cè)指標(biāo) 主要觀察心肌最大縮短速率（maximum shortening velocity，Vmax）、心率（heart rate，HR）、左心室收縮壓（left venteicular systolic pressuer，LVSP）、左心室舒張末期壓（left ventricular end dilated pressure，LVEDP）、左心室壓力上升最大速率（+dp/ dtmax）、左心室壓力下降最大速率（-dp/dtmax）等指標(biāo)。

1.4 細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的測(cè)定

1.4.1 Fluo3-AM工作液的配制 （1）母液配制:用44.2μl DMSO溶解50μg的Fluo3-AM粉末，配制成1mmol/L母液，分裝，封口避光，-20℃保存。（2）Fluo3-AM工作液的配制:用1ml臺(tái)氏液稀釋4μl母液即可得到濃度為4μmol/L Fluo3-AM的工作液。無(wú)Na+、無(wú)Ca2+組則分別采用不含Na+、不含Ca2+的臺(tái)式液稀釋。

1.4.2 測(cè)定方法 （1）以8×104cells/ml的密度將細(xì)胞接種于共聚焦培養(yǎng)皿中，于37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)24 h后，進(jìn)行給藥處理，與藥液共孵育時(shí)間為20min。（2）取各組細(xì)胞，棄去舊培養(yǎng)液，以1 ml臺(tái)氏液輕輕洗滌三遍。（3）加入500μl含4μmol/L Fluo3-AM的工作液，放入37℃、CO2孵育箱中避光負(fù)載30min。（4）在負(fù)載結(jié)束后，用1ml臺(tái)氏液輕輕洗滌細(xì)胞3遍，充分去除殘留的工作液。最后向激光共聚焦培養(yǎng)皿中的各組細(xì)胞加入1ml臺(tái)氏液，避光孵育20～30 min，以確保AM體在細(xì)胞內(nèi)的完全去酯化作用。（5）共聚焦顯微鏡Ca2+成像:加載好熒光指示劑的細(xì)胞置于激光共聚焦顯微鏡系統(tǒng)的載物臺(tái)上，在激發(fā)光488 nm處，可于525 nm處探測(cè)到熒光。選取固定視野攝影記錄最大熒光信號(hào)，經(jīng)光電倍增管和數(shù)字傳入式攝像機(jī)，輸入計(jì)算機(jī)系統(tǒng)，利用Image J軟件計(jì)算胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度，以此衡量H9c2細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+水平。熒光強(qiáng)度越大，表示細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+越高。以上步驟均在37℃條件下進(jìn)行。

1.4.3 實(shí)驗(yàn)分組 （1）正常對(duì)照組；（2）1μmol/L Dio組；（3）1μmol/L SEA0400組；（4）1μmol/L SEA0400+1μmol/L Dio組；（5）1μmol/L Dio+無(wú)Na+臺(tái)氏液組；（6）1μmol/L Dio+無(wú)Ca2+臺(tái)氏液組（其中無(wú)Na+臺(tái)氏液配制時(shí)使用LiCl替代NaCl）。

1.5 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 大鼠左心室收縮功能測(cè)定

1μmol/L Dio可顯著增加LVSP，由（80.34± 2.07）mmHg至（96.13±3.79）mmHg，增加近19.7% （P＜0.01）；+dp/dtmax由（3.01±0.53）mmHg/ms增至（3.30±0.16）mmHg/ms，增加約9.6%（P＜0.05，圖1）。

給予1μmol/L SEA0400+1μmol/L Dio的LVSP由（80.25±5.61）mmHg/ms上升為（81.79±9.35）mmHg/ms，+dp/dtmax由（2.83±0.09）mmHg/ms變?yōu)椋?.83±0.25）mmHg/ms，與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯變化。將給藥后各功能指標(biāo)數(shù)值分別除以給藥前正常對(duì)照組功能指標(biāo)數(shù)值，得出變化比值（P＜0.05，P ＜0.01，表1）。

Fig.1 Effectsof dioscin on LVSPof isolated Langendorff-perfused ratheart in the absence and presence of SEA0400LVSP:Left veatricular systolic pressure

Tab.1 Effects of SEA0400 and dioscin on cardiac functions in isolated ratheart

2.2 細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度測(cè)定

熒光探針Fluo3-AM與H9c2細(xì)胞共孵育后，與Ca2+相結(jié)合產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光（圖2）。與正常對(duì)照組相比，SEA0400使細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度降低，從（17.30±0.92）下降到（7.94±0.57）；Dio能顯著增強(qiáng)Ca2+熒光強(qiáng)度，從（17.30±0.92）上升到（26.90± 0.71）；SEA0400+Dio組與正常對(duì)照組差別不大，分別為（17.30±0.92）與（17.09±0.63）；與Dio組相比，無(wú)Ca2++Dio組和無(wú)Na++Dio組均使細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度顯著降低，從（26.90±0.71）下降到（8.17±0.50）和（12.73±0.39）（P＜0.01，圖3）。

3 討論

本室前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)Dio對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，可增強(qiáng)大鼠缺血再灌注損傷后的心肌抗氧化能力［14］；在離體水平上，也有研究［15］證實(shí)Dio衍生物可改善SD大鼠離體心臟左心室收縮功能，對(duì)缺血再灌注損傷具有明顯保護(hù)作用。在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)于離體和細(xì)胞水平，從心功能指標(biāo)、生化指標(biāo)角度證明了Dio具有正性肌力作用，且其機(jī)制與促進(jìn)NCX反向運(yùn)轉(zhuǎn)，誘發(fā)Na+外排，繼而促使Ca2+交換內(nèi)流入胞有關(guān)。

心肌細(xì)胞接受脈沖信號(hào)后，Na+通道首先被激活開(kāi)放，Na+大量?jī)?nèi)流，然后激活Ca2+通道，導(dǎo)致外Ca2+內(nèi)流，繼而激活胞內(nèi)肌漿網(wǎng)釋放Ca2+。此時(shí)，NCX根據(jù)細(xì)胞膜電位以及細(xì)胞內(nèi)外Na+與Ca2+的濃度，采取兩種轉(zhuǎn)運(yùn)方式:正向轉(zhuǎn)運(yùn)，即Ca2+外排耦聯(lián)Na+內(nèi)流；反向轉(zhuǎn)運(yùn)，即Ca2+內(nèi)流耦聯(lián)Na+外排。當(dāng)抑制NCX正向轉(zhuǎn)運(yùn)，或促進(jìn)NCX的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，使細(xì)胞Ca2+內(nèi)流增加，產(chǎn)生正性肌力作用［1］。文獻(xiàn)報(bào)道［16］，臨床上使用的洋地黃類藥物通過(guò)抑制心肌Na+-K+-ATP（NKA）酶的活性，使鈉泵失靈、細(xì)胞內(nèi)Na+增多，從而促進(jìn)Na+-Ca2+交換。本實(shí)驗(yàn)室之前的實(shí)驗(yàn)研究顯示［17］，Dio可激活Na+通道，使Na+內(nèi)流。因此筆者首先考慮細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高可能與NCX有關(guān)。

Fig.2 Effects of Dioscin on the fluorescence intensity of intracellular calcium ion in H9c2 cells （×100）

Fig.3 Effects of dioscin on the fluorescence intensity of intracellular calcium ion in H9c2 cellsDio:Dioscin；SEA0400:2-［4-［（2，5-difluorophenyl）methoxy］phenyl］-5-ethoxyaniline

Farkas等［18］發(fā)現(xiàn)，1μmol/L SEA0400對(duì)正常兔離體心臟心肌收縮力無(wú)明顯影響，這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。即單獨(dú)給予Dio時(shí)，正性肌力作用明顯，共同給予SEA0400和Dio時(shí)，與正常組相比幾乎無(wú)變化，但比單獨(dú)給予 Dio時(shí)變化比值顯著降低，說(shuō)明SEA0400可削弱Dio的正性肌力作用。細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，單獨(dú)給予Dio時(shí)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，共同給予SEA0400和Dio時(shí)，細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度與正常水平無(wú)太大差別，說(shuō)明SEA0400可部分阻斷Dio升高細(xì)胞內(nèi)Ca2+的能力，提示Dio產(chǎn)生心肌正性肌力作用，升高細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度與NCX有關(guān)。其次，為進(jìn)一步證明與NCX的聯(lián)系，考慮到細(xì)胞外Na+或Ca2+對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了無(wú)Na+或無(wú)Ca2+細(xì)胞外液。當(dāng)細(xì)胞外無(wú)Ca2+時(shí)，Dio不能升高細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，提示促進(jìn)外Ca2+內(nèi)流可能是其升高細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的機(jī)制之一；當(dāng)細(xì)胞外無(wú)Na+時(shí)，Dio也不能使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，表明促進(jìn)Na+內(nèi)流與其升高細(xì)胞內(nèi) Ca2+離子濃度密切相關(guān)。在SEA0400阻斷NCX或細(xì)胞外液沒(méi)有Na+或Ca2+時(shí)，Dio升高細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的作用均被阻斷。筆者的實(shí)驗(yàn)證實(shí)Dio可升高細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，據(jù)此推斷Dio增強(qiáng)心肌收縮力的作用與增強(qiáng)NCX反向轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)研究的Dio正性肌力作用機(jī)制與傳統(tǒng)的正性肌力藥物不同，為Dio的藥理作用研究提供了新的發(fā)現(xiàn)與科學(xué)依據(jù)。然而，Dio促進(jìn)Ca2+內(nèi)流、引起細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平升高繼而增強(qiáng)心肌收縮力是否存在其他機(jī)制以及是否會(huì)導(dǎo)致Ca2+超載等問(wèn)題，是筆者今后深入探索的方向。

［1］徐 毅，羅卓卡，黃霏霏 ，等.正性肌力藥物作用靶點(diǎn)的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)新藥雜志 ，2012，21（3）:268-272.

［2］PottC，Eckardt L，Goldhaber JI.Triple Threat:The Na+/ Ca2+Exchanger in the Pathophysiology of Cardiac Arrhythmia，Ischemia and Heart Failure［J］.Curr Drug Targets，2011，12（5）:737-747.

［3］PassosAG，Gondim AN，Roman-CamposD，etal.The positive inotropic effectof the ethyl acetate fraction from Erythrinavelutina leaves on themammalianmyocardium:the role of adrenergic receptors［J］.J Pharm Pharmacol，2013，65 （6）:928-936.

［4］Xie Z，Xie J.The Na/K-ATPase-mediated signal transduction as a target for new drug development［J］.Front Biosci，2005，10:3100-3109.

［5］Chen L，Xu Y，LiW，et al.The novel compound liguzinediol exerts positive inotropic effects in isolated rat heart via sarcoplasmic reticulum Ca2+ATPase-dependent mechanism ［J］.Life Sci，2012，91（11）:402-408.

［6］張偉鋒，劉寶山.薯蕷皂苷的藥理作用研究進(jìn)展［J］.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志 ，2010，5（6）:543-545.

［7］侯 娟，何文輝，王明霞，等 .薯蕷皂苷的藥理作用［J］.河北醫(yī)藥，2004，26（1）:71.

［8］王曉鵬，陸 羨.薯蕷皂苷生物活性研究新進(jìn)展［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué):中醫(yī)中藥分冊(cè)，2004，26（3）:138-141.

［9］宋 宇，梁長(zhǎng)青，何忠梅，等.薯蕷皂苷元體外抗腫瘤作用的研究［J］.中國(guó)腫瘤，2004，13（10）:651-653.

［10］Hobai IA，O'Rourke B.The potential of Na+/Ca2+exchange blockers in the treatment of cardiac disease［J］.ExpertOpin Inv Drugs，2004，13（6）:653-664.

［11］Birinyi P，Acsai K，Bányász T，et al.Effects of SEA0400 and KB-R7943 on Na+/Ca2+exchange current and L-type Ca2+current in canine ventricular myocytes［J］.Naunyn-SchmiedebergsArch Pharmacol，2005，372（1）:63-70.

［12］Matsuda T，Arakawa N，Takuma K，et al.SEA0400，a novel and selective inhibitorof the Na+-Ca2+exchanger，attenuates reperfusion injury in the in vitro and in vivo cerebral ischemic models［J］.J Pharmacol Exp Ther，2001，298 （1）:249-256.

［13］Iwamoto T，Kita S，Uehara A，etal.Molecular determinants of Na+/Ca2+exchange（NCX1）inhibition by SEA0400［J］. JBio Chem，2004，279（9）:7544-7553.

［14］汪玲芳，趙云茜，高衛(wèi)真，等.薯蕷皂苷增強(qiáng)大鼠缺血再灌注損傷后心肌抗氧化能力［J］.中藥藥理與臨床，2009，25（5）:44-46.

［15］胡長(zhǎng)鷹 ，于文喜 .山藥皂苷及其對(duì)離體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用［J］.食品工業(yè)科技，2011，（2）: 309-312.

［16］Kaneko Y，Nakajima T，Irie T，etal.Ventricular fibrillation following bidirectional tachycardia due to digitalis toxicity［J］. Intern Med，2011，50（19）:2243-2243.

［17］劉 靜，吳 紅，叢恬馬先，等.薯蕷皂苷含藥血清對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞鈉離子通道的影響［J］.中草藥，2014，45（16）:2370-2374.

［18］Farkas AS，AcsaiK，Nagy N，et al.Na+/Ca2+exchanger inhibition exerts a positive inotropic effect in the rat heart，but fails to influence the contractility of the rabbit heart［J］. Br JPharmacol，2008，154（1）:93-104.

The effects of dioscin on myocardial contraction and sodium-calcium exchanger

YANG Fan，HAN Yu，CONG Tian-shen，KANG Yi，LIYan，SUN Kai，YIN Yong-qiang△，LOU Jian-shi△
（Department of Pharmacology，Basic Medical College，Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China）

【ABSTRACT】Objective:To investigate the inotropic effectsof dioscin（Dio）in rat isolated-heartand intracellular free calcium concentration in isolated ratventricularmyocytes and to explore itsmechanism preliminarily.Methods:Leftventricle contractile functionwasmeasured using the Langendorff non-recirculatingmode of isolated rat heart perfusion.Effects of dioscin and dioscin+SEA0400，sodium-calcium exchanger （NCX）inhibitor，were investigated by measuring left ventricular systolic pressure（LVSP）and left ventricular end diastolic pressure （LVEDP）.Also，heart rate（HR），peak rateof rise/fallof leftventricular pressure（±dp/dtmax）of isolated ratheartwere calculated；Effects of dioscin and SEA0400 on intracellular free calcium concentration in ratH9c2 cellsweremeasured by Fluo3-AM and then detected the fluorescence intensitywith confocalmicroscopy.Results:With 1μmol/L dioscin，LVSPwas significantly increased by 19.7%（P＜0.01）and dp/ dtmaxwas increased by 9.6%；With 1μmol/L dioscin，the relative fluorescence intensity of intracellular free calcium concentrationswere strong significantly（P＜0.01）.While in presence of SEA0400，the relative fluorescence intensitywas changed to 17.09±0.63（P＜0.01）by 1μmol/L dioscin.With 1μmol/L dioscin，the relative fluorescence intensitywasweak（P＜0.01）without calcium or sodium in the extracellular fluid.Conclusion:Dioscin shows positive inotropic effecton isolated ratheart，enhancing the LVSPand+dp/dtmax；Dioscin increases the intracellular concentration ofCa2+in the cardiacmyocytesby increasing Na+influx and facilitating the reversemode of the sodium-calcium exchanger.

dioscin； myocardium； rat； positive inotropic effect； sodium-calcium exchanger

R331.3

A

1000-6834（2016）03-209-05

天津應(yīng)用基礎(chǔ)及前言技術(shù)研究計(jì)劃青年項(xiàng)目（14JCQNJC13700）

2015-11-12

2016-02-01

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