抗神經(jīng)元抗體對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征診斷的意義

呂　虹　吳　淵　王利娟　張國(guó)軍*

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100050；2.北京市免疫試劑臨床工程技術(shù)研究中心，北京 100050；3.北京市順義區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 101300)

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· 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床 ·

抗神經(jīng)元抗體對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征診斷的意義

呂虹1，2吳淵3王利娟1，2張國(guó)軍1，2*

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100050；2.北京市免疫試劑臨床工程技術(shù)研究中心，北京 100050；3.北京市順義區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 101300)

目的探討抗神經(jīng)元抗體譜對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征(paraneoplastic syndrome of nervous system，PNSNS)臨床診斷的價(jià)值。方法本研究采用神經(jīng)元抗原譜抗體IgG試劑盒(歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司)對(duì)68份血清樣本的抗Hu抗體、抗Yo抗體、抗Ri抗體、抗Ma2/ta抗體、抗CV2抗體、抗Amp抗體進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果48例PNSNS中陽(yáng)性6例(6/48，12.5%)，其中A組中樞神經(jīng)脫髓鞘病陽(yáng)性率為23.5%(4/17)、B組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病陽(yáng)性率為0% (0/11)、C組格林巴利綜合征陽(yáng)性率為10.0%(2/20)；健康體檢者陽(yáng)性率為0 (0/20)。PNSNS疾病組中中樞神經(jīng)脫髓鞘病與格林巴利綜合征疾病的陽(yáng)性率和健康對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但PNSNS疾病組抗神經(jīng)元抗體的陽(yáng)性率有高于健康對(duì)照組的趨勢(shì)。結(jié)論血清中神經(jīng)元特異性抗體譜的測(cè)定有助于神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤性綜合征中的一些疾病的診斷。

神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征；抗神經(jīng)元抗體譜；中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病

神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤性綜合征(paraneoplastic syndrome of nervous system，PNSNS)是在某些惡性腫瘤患者體內(nèi)，腫瘤未發(fā)生轉(zhuǎn)移的情況下引起的神經(jīng)系統(tǒng)功能異常改變，發(fā)病機(jī)制主要是由于機(jī)體對(duì)腫瘤表達(dá)的神經(jīng)元抗原發(fā)生免疫作用產(chǎn)生抗體，這些抗體對(duì)正常的組織也會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)，破壞正常神經(jīng)及相關(guān)組織[1]。PNSNS可影響神經(jīng)系統(tǒng)的任何一個(gè)部位，大腦皮質(zhì)、小腦、脊髓、周圍神經(jīng)、神經(jīng)肌肉接頭及肌肉均可受累，可導(dǎo)致臨床常見(jiàn)疾病的發(fā)生，如腦干、小腦以及大腦邊緣系統(tǒng)腦炎、眼肌陣攣性運(yùn)動(dòng)失調(diào)、肌無(wú)力綜合征[2-4]。近年來(lái)，相繼報(bào)道[5-8]在 PNSNS 患者的血清 、腦脊液及尿液中均發(fā)現(xiàn)特異性抗神經(jīng)元抗體，

其中以抗-Hu抗體 、抗-Yo抗體 、抗-Ri 抗體最為多見(jiàn)。本研究對(duì)48例PNSNS血清及20例健康體檢者進(jìn)行了神經(jīng)元特異性抗體譜的檢測(cè)，旨在探討抗神經(jīng)元抗體在不同PNSNS中出現(xiàn)的頻率以及與臨床癥狀的相關(guān)性，從而期望抗神經(jīng)元抗體成為鑒別各種PNSNS的血清學(xué)指標(biāo)。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院2013年3月至2015年4月門診及住院患者的血清48例，所有患者診斷均符合副腫瘤綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2標(biāo)本準(zhǔn)備及分組

所有PNSNS患者及健康對(duì)照均清晨空腹采靜脈血，抽取3～5 mL于EDTA-K2抗凝血管，靜置30 min后，以3 500 r/min 離心10 min，吸取血清于EP管中，-80 ℃保存。實(shí)驗(yàn)共分為4組，其中A組中樞神經(jīng)脫髓鞘病(n=17)、B組運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病(n=11)、C組格林巴利綜合征(n=20)、D組健康體檢者(n=20)。

1.3實(shí)驗(yàn)試劑

神經(jīng)元抗原譜抗體IgG試劑盒由歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司提供，采用免疫印跡方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)前將-80 ℃保存的血清提前12 h置于4 ℃冰箱復(fù)融，隨后進(jìn)行抗神經(jīng)元抗體IgG抗體譜的檢測(cè)。具體步驟如下：(1)加樣溫育：將檢測(cè)膜條放入溫育槽中，在每個(gè)槽中加入1.5 mL已稀釋通用緩沖液，按加樣方案向相應(yīng)槽中加入30 μL樣本，搖擺床上室溫反應(yīng)60 min；(2)清洗：吸去槽內(nèi)液體，用1.5 mL已稀釋通用緩沖液清洗3次，每次5 min；(3)酶結(jié)合物溫育：吸去槽內(nèi)液體，在每個(gè)槽中加入1.5 mL已稀釋的酶結(jié)合物；(4)再清洗：吸去槽內(nèi)液體，用1.5 mL已稀釋通用緩沖液清洗3次，每次5 min；(5)底物溫育 吸去槽內(nèi)液體，在每個(gè)槽中加入1.5 mL底物液，搖擺床上室溫反應(yīng)10 min；(6)終止反應(yīng)：吸去槽內(nèi)液體，用1.5 mL蒸餾水清洗3次，每次1 min，將已溫育的濕的檢測(cè)膜條置于綠色紙上結(jié)果判定模板中的黏膜上，待膜條干透后，判讀結(jié)果；(7)結(jié)果判讀：用Euroimmun AG掃描儀掃描膜條，用EUROLineScan軟件進(jìn)行結(jié)果判讀(表1)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件完成，健康對(duì)照組和PNSNS兩組抗Hu抗體、抗Yo抗體、抗Ri抗體、抗Ma2/Ta抗體、抗Amphiphysin抗體水平顯著性檢驗(yàn)用χ2檢驗(yàn)， 以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)采用診斷試驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)，計(jì)算敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值。

表1　EUROLineScan結(jié)果判讀

Weakly positive，positive and heavy positive equal to positive.

2　結(jié)果

48例PNSNS中檢測(cè)到抗神經(jīng)元抗體陽(yáng)性樣本6例，總陽(yáng)性率12.5%，其中4例是中樞脫髓鞘疾病，陽(yáng)性率為23.5%，2例是格林巴利綜合征，陽(yáng)性率為10.0%；4例中樞脫髓鞘疾病存在的神經(jīng)元特異性抗體分別是抗Hu、抗Yo、抗Ri、抗Ma2/Ta、抗CV2、抗Amphiphysin；格林巴利組檢測(cè)出抗Ma2/Ta、抗Amphiphysin各一例，健康對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病組沒(méi)有檢測(cè)到抗神經(jīng)元抗體(表2)。PNSNS疾病組與健康對(duì)照組相比，抗體陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.169)，詳見(jiàn)表3。此方法敏感度為100%，特異度為32.3%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為12.5%，陰性預(yù)測(cè)值為100%。

表2　PNSNS組和健康對(duì)照組抗體陽(yáng)性比較

PNSNS: paraneoplastic syndrome of nervous system.

3　討論

PNSNS發(fā)病機(jī)制現(xiàn)在普遍認(rèn)同的觀點(diǎn)是腫瘤細(xì)胞與人體神經(jīng)元存在共同表位，腫瘤細(xì)胞作為始動(dòng)抗原誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，該抗體抑制腫瘤生長(zhǎng)的同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損傷[9]。PNSNS的發(fā)生率約為1%[10]，但臨床上應(yīng)引起高度重視，因?yàn)镻NSNS的臨床表現(xiàn)非常多，神經(jīng)系統(tǒng)癥狀在數(shù)周至數(shù)月內(nèi)迅速發(fā)展，產(chǎn)生嚴(yán)重后果甚至死亡，且約60%患者出現(xiàn)PNSNS癥狀時(shí)，原發(fā)癌尚處于可根治階段，及時(shí)認(rèn)識(shí)PNSNS不但有助于惡性腫瘤的早期診斷和治療，更重要的是使神經(jīng)系統(tǒng)損害得到改善，甚至挽救患者生命。有研究[11]表明抗神經(jīng)元抗體的種類與PNS所屬疾病種類相關(guān)。抗Hu抗體最常見(jiàn)于小細(xì)胞肺癌患者，抗Yo抗體多見(jiàn)于女性伴婦科腫瘤或乳腺癌的患者，抗Ri抗體與眼肌陣攣性運(yùn)動(dòng)失調(diào)癥高度相關(guān)，抗Amphiphysin抗體與肌無(wú)力綜合征感覺(jué)性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病高度相關(guān)[12]。當(dāng)然，缺乏腫瘤神經(jīng)抗體也可發(fā)生PNS，沒(méi)有神經(jīng)綜合征也可存在抗體[13]。楊愛(ài)景[14]的研究顯示686例疑似PNSNS患者采用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)元抗體中，抗Hu抗體陽(yáng)性81例，抗Yo抗體陽(yáng)性3例，抗Ri抗體陽(yáng)性4例，總陽(yáng)性率12.8%，其中Hu、Yo、Ri陽(yáng)性抗體分別占11.8%、0.4%、0.6%。崔桂云等[15]對(duì)31例PNSNS患者血清中抗神經(jīng)元抗體進(jìn)行檢測(cè)，有25例存在特異性抗體，神經(jīng)元抗體的陽(yáng)性率達(dá)80.6%。本研究結(jié)果與崔桂云等[15]的研究結(jié)果相差過(guò)大，筆者認(rèn)為這可能與標(biāo)本選取以及標(biāo)本量有關(guān)，需要選取同類型疾病增加標(biāo)本量繼續(xù)深入研究。

表3　PNSNS患者及健康對(duì)照血清神經(jīng)元抗體檢測(cè)陽(yáng)性率

本實(shí)驗(yàn)中，在48例PNSNS中檢測(cè)到抗神經(jīng)元抗體陽(yáng)性6例，總陽(yáng)性率12.5%，其中4例是中樞脫髓鞘疾病，陽(yáng)性率為23.5%，2例是格林巴利綜合征，陽(yáng)性率為10.0%；4例中樞脫髓鞘疾病存在的神經(jīng)元特異性抗體分別是抗Hu、抗Yo、抗Ri、抗Ma2/Ta、抗CV2、抗Amphiphysin，值得指出的是1例同時(shí)存在抗Hu、抗CV2、抗Amphiphysin 3種抗體；格林巴利組檢測(cè)出抗Ma2/Ta、抗Amphiphysin各1例，健康對(duì)照組和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病組沒(méi)有檢測(cè)到抗神經(jīng)元抗體。雖然PNSNS疾病組與健康對(duì)照組相比，抗體陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.169)，但是PNSNS疾病組抗神經(jīng)元抗體的陽(yáng)性率有高于健康對(duì)照組的趨勢(shì)，與之前的報(bào)道不符的原因可能是由于樣本量不足，而且檢測(cè)方法為定性檢測(cè)，方法學(xué)還有待探討。本試驗(yàn)方法檢測(cè)敏感度和陰性預(yù)測(cè)值都達(dá)到了100%，對(duì)臨床排除診斷提供了一定的參考價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新之處是將PNSNS細(xì)分為中樞脫髓鞘、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元以及格林巴利3組，進(jìn)行對(duì)神經(jīng)元特異性抗體的檢測(cè)以及比對(duì)。

總之，本課題組將在本實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)繼續(xù)上擴(kuò)大樣本量探討抗神經(jīng)元抗體與各種PNSNS的關(guān)系，期望抗神經(jīng)元抗體能夠成為鑒別各種PNSNS的血清學(xué)指標(biāo)。另外，可以摸索一種定性檢測(cè)神經(jīng)元特異性抗體的方法，從而研究神經(jīng)元特異性抗體效價(jià)的變化對(duì)PNSNS診斷、治療檢測(cè)。

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編輯慕萌

Significance of the detection of anti-neuronal antibodies in the diagnosis of paraneoplastic syndrome of nervous system

Lyu Hong1，2， Wu Yuan3， Wang Lijuan1,2， Zhang Guojun1，2*

(1.DepartmentofCentralLaboratory，BeijingTiantanHospital，CapitalMedicalUniversity，Beijing100050，China； 2.EngineeringResearchCenterofImmunologicalReagentsClinicalResearch，Beijing100050，China； 3.DepartmentofLaboratory，BeijingShunyiHospital，Beijing101300，China)

ObjectiveTo evaluate the significance of the detection of anti-neuronal antibodies in the early diagnosis of paraneoplastic syndrome (PNS) of nervous system (PNSNS). MethodsWe detected anti-Hu, anti-Yo, anti-Ri, anti-Ma2/ta, anti-CV2, anti-Amphiphysin antibodies of 68 sera by neuronal antigen spectrum of IgG antibody kit (amount medical laboratory diagnostics ag); ResultsOf the 48 PNS samples, 6 (6/48,12.5%) were positive for anti-neuronal autoantibodies, among which, 4(23.5%)positive samples were from Group A (demyelinating diseases), 2 (10.0%) positive samples were from Group C (Guillain-Barre syndrome); samples from Group B (motor neuron diseasse) and D (Healthy control) were all negative. There was a trend of higher ratio of anti-neuronal antibodies positive rate in PNSNS group than healthy control group, although the data failed to reach a statistical significance. ConclusionThe detection of anti-neuronal antibodies might be a credible method in the early diagnosis of PNSNS.

paraneoplastic syndrome of nervous system (PNSNS)；anti-neuronal antibodies; demyelinating disease

北京市衛(wèi)生系統(tǒng)高層次衛(wèi)生技術(shù)人才培養(yǎng)項(xiàng)目(2013-3-052)。This study was supported by High Level Technical Talent Development of Beijing Health System(2013-3-052).

10.3969/j.issn.1006-7795.2016.04.015]

R 446.1

2016-04-30)

*Corresponding author， E-mail：tiantanzgj@163.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-07-2021∶12網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20160714.2112.012.html