參芪多糖泡騰片免疫調(diào)節(jié)作用的藥理研究

任　娟，顧　燕（.江蘇省中醫(yī)院，南京009；.江蘇睿博醫(yī)藥有限公司，江蘇南京）

參芪多糖泡騰片免疫調(diào)節(jié)作用的藥理研究

任娟1，顧燕2（1.江蘇省中醫(yī)院，南京210029；2.江蘇睿博醫(yī)藥有限公司，江蘇南京211112）

目的考察參芪多糖泡騰片對小鼠和大鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。方法通過碳粒廓清試驗及2，4-二硝基氟苯（DNFB）誘導小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應，通過測定小鼠右耳腫脹度和肝、脾、胸腺指數(shù)，考察參芪多糖泡騰片對小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用；通過測定注射用環(huán)磷酰胺（CTX）致免疫低下大鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白介素-2（IL-2）水平等的變化，考察參芪多糖泡騰片對大鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。結(jié)果參芪多糖泡騰片能夠升高小鼠肝指數(shù)、脾指數(shù)、廓清指數(shù)K值及吞噬指數(shù)α值；增強DNFB誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應；并升高CTX所致免疫低下大鼠脾指數(shù)和TNF-α、IL-2水平。結(jié)論參芪多糖泡騰片具有增強小鼠特異性免疫和非特異性免疫功能、提高大鼠免疫力的作用。

多糖類；片劑；黨參/藥理學；黃芪/藥理學；免疫活性；超敏反應，遲發(fā)型；碳粒廓清試驗

參芪多糖泡騰片由黨參、黃芪的提取物制成，主要成分為黨參多糖和黃芪多糖?，F(xiàn)代藥理學實驗表明，黨參多糖是黨參的主要有效成分之一，具有調(diào)節(jié)機體免疫、清除自由基和抗衰老等作用［1-3］；黃芪多糖也具有增強免疫力的作用［4-6］。黃芪和黨參組方，在免疫調(diào)節(jié)方面具有一定協(xié)同作用，可用于肺脾氣虛引起的神疲乏力，少氣懶言，自汗眩暈，以及肺癌、胃癌見上述證候者的輔助治療。本文參照文獻［7］，通過動物實驗，考察參芪多糖泡騰片的免疫調(diào)節(jié)作用，為臨床應用提供理論支持。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1藥物與試劑參芪多糖泡騰片（規(guī)格：1.8 g，批號：20110201，自制），注射用胸腺五肽（規(guī)格：1 mg，批號：20100701，海南中和藥業(yè)有限公司），參芪五味子片（規(guī)格：0.25 g，批號：1001020003，甘肅獨一味生物制藥股份有限公司），印度墨水（規(guī)格：100 mL，批號：0040327，上海長江日用粘合材料廠），2，4-二硝基氟苯（DNFB，武漢福鑫化工有限公司）等；腫瘤壞死因子-α（TNF-α）試劑盒、白介素-2（IL-2）試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；注射用環(huán)磷酰胺（CTX，規(guī)格：0.2 g，批號：11072523，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司），純水（自制）；其余為分析純。

1.1.2主要儀器YB502型電子天平（上海海康電子儀器廠）、AY220型電子分析天平（島津公司）、紫外分光光度儀UV-2501（島津公司）、耳打孔器等。

1.1.3動物美國癌癥研究所（ICR）種小鼠120只，體質(zhì)量19～21 g，無特定病原體（SPF）級，雌雄各半，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，許可證號：SCXK（滬）2011-0003；Wistar大鼠70只，體質(zhì)量（174±16）g，SPF級，雌雄各半，由山東大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（魯）20110005。

1.2方法

1.2.1藥物用量設(shè)置

1.2.1.1小鼠用量設(shè)置參芪多糖泡騰片人用量按每天2次、每次1片計，人用量每天3.600 g。按成人70.00kg和小鼠0.02 kg等效劑量折算系數(shù)法［8］，該劑量相當于小鼠劑量的0.468 g/kg，相當于參芪多糖原料粉末0.168 g。高、中、低劑量分別設(shè)為1.374、0.468、0.156 g/kg，組建比為3∶1；參芪五味子人用量按每天3次、每次4片計算，人用量每天3.000 g，小鼠的等效劑量為0.400 g/kg；注射用胸腺五肽人用量按2.000 mg/d計算，小鼠的等效劑量為0.260mg/kg。

1.2.1.2大鼠用量設(shè)置大鼠按成人70.00kg和大鼠0.20 kg等效劑量折算系數(shù)法計算，等效劑量為0.324 g/kg。高、中、低劑量分別設(shè)為0.972、0.324、0.108 g/kg，組建比為3∶1。同法計算，參芪五味子等效劑量為0.270 g/kg，注射用胸腺五肽為0.090 mg/kg。

1.2.2參芪多糖泡騰片對小鼠非特異性免疫功能的影響

1.2.2.1藥物配置參芪多糖泡騰片高劑量組溶液：取參芪多糖泡騰片適量，研細，精密稱取粉末，純水溶解并稀釋至質(zhì)量濃度為0.068 7 g/mL，標為溶液①；中劑量組溶液：取溶液①適量，加2倍體積純水稀釋，質(zhì)量濃度為0.0229 g/mL，標為溶液②；低劑量組溶液：取溶液①適量，加8倍體積純水稀釋，質(zhì)量濃度為0.007 6 g/mL，標為溶液③；注射用胸腺五肽溶液：取1支注射用胸腺五肽，以 7.6 mL生理鹽水溶解，藥物質(zhì)量濃度為0.026 0 mg/mL，標為溶液④；參芪五味子溶液：取參芪五味子2片，以純水研磨并稀釋至25 mL，質(zhì)量濃度為0.0200g/mL，標為溶液⑤。

1.2.2.2實驗操作取體質(zhì)量19～21 g的SPF級ICR種小鼠60只，按體質(zhì)量、性別隨機分為六組：正常對照組、參芪多糖泡騰片低劑量組、參芪多糖泡騰片中劑量組、參芪多糖泡騰片高劑量組、參芪五味子對照組和注射用胸腺五肽對照組，每組10只，雌雄各半。對小鼠進行標記，參芪多糖泡騰片低、中、高劑量組及參芪五味子對照組根據(jù)體質(zhì)量灌胃給予相應質(zhì)量濃度藥物溶液，給藥劑量為0.2 mL/10 g。正常對照組灌胃給予等劑量純水，連續(xù)給藥7 d。注射用胸腺五肽對照組肌內(nèi)注射給藥，給藥劑量為0.1 mL/10 g。所有小鼠末次給藥后1 h稱質(zhì)量，尾靜脈注射印度墨汁0.05 mL/10 g，于1、5 min后分別從眼眶靜脈取血20 μL，加入0.1%碳酸鈉（Na2CO3）溶液2 mL搖勻，用分光光度計在680 nm波長下測定吸光度［以下分別用吸光度1（OD1）和OD5表示1、5 min所取血樣的吸光度］，處死動物，稱肝、脾質(zhì)量。按下式計算廓清指數(shù)K、吞噬指數(shù)α，考察藥物是否具有提高非特異性免疫功能的作用。廓清指數(shù)K=（logOD1-logOD5）/（t5-t1）；吞噬指數(shù)α=體質(zhì)量/肝脾質(zhì)量×K1/3。

1.2.3參芪多糖泡騰片對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的影響

1.2.3.1藥物配制方法同1.2.2.1。

1.2.3.2實驗操作動物及分組同1.2.2.2。對小鼠進行標記，參芪多糖泡騰片低、中、高劑量組及參芪五味子對照組分別根據(jù)體質(zhì)量灌胃給予相應質(zhì)量濃度的藥物溶液，連續(xù)灌胃給藥7 d，給藥劑量為0.2 mL/10 g，正常對照組灌胃給予等劑量純水，連續(xù)給藥7d。注射用胸腺五肽對照組肌內(nèi)注射給藥，給藥劑量為0.1 mL/10 g。除正常對照組外，參芪多糖泡騰片低、中、高劑量組，參芪五味子對照組，注射用胸腺五肽對照組小鼠腹部用1% DNFB溶液均勻涂抹進行致敏（腹部去毛，面積3 cm× 3 cm，涂1%DNFB 50 μL），致敏后第5天，將1%DNFB溶液10μL均勻涂抹于小鼠右耳（兩面）進行攻擊，正常對照組同樣涂耳但未致敏。攻擊后24 h，頸椎脫臼處死小鼠，剪下左、右耳殼，用打孔器取下直徑8 mm的耳片，稱質(zhì)量。測定小鼠右耳腫脹度、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。考察藥物是否具有提高特異性免疫功能的作用。

1.2.4參芪多糖泡騰片對CTX所致免疫低下大鼠器官功能和TNF-α、IL-2等的影響

1.2.4.1藥物配制參芪多糖泡騰片高劑量組溶液：稱取參芪多糖泡騰片粉末適量，以純水溶解并稀釋，質(zhì)量濃度為0.097 2 g/mL，標為溶液①；中劑量組溶液：取溶液①適量，加2倍體積純水稀釋，質(zhì)量濃度為0.0324g/mL，標為溶液②；低劑量組溶液：取溶液①適量，加8倍體積純水稀釋，質(zhì)量濃度為0.010 8 g/mL，標為溶液③；注射用胸腺五肽溶液：取1支注射用胸腺五肽，以11 mL生理鹽水溶解，藥物質(zhì)量濃度為0.090 0 mg/mL，標為溶液④；參芪五味子溶液：取參芪五味子片4片，以純水研磨并稀釋至37 mL，質(zhì)量濃度為0.025 0 g/mL，標為溶液⑤。

1.2.4.2實驗操作選取體質(zhì)量（174±16）g的SPF級Wistar大鼠70只，按體質(zhì)量、性別隨機分為正常對照組、模型對照組、參芪多糖泡騰片低劑量組、參芪多糖泡騰片中劑量組、參芪多糖泡騰片高劑量組、參芪五味子對照組和注射用胸腺五肽對照組。每組10只，雌雄各半。對大鼠進行標記，參芪多糖泡騰片低、中、高劑量組及參芪五味子對照組分別根據(jù)體質(zhì)量灌胃給予相應質(zhì)量濃度的藥物溶液，給藥劑量為：0.1 mL/10 g。正常對照組和模型對照組灌胃給予等劑量純水。注射用胸腺肽對照組肌內(nèi)注射給藥，給藥劑量為0.1 mL/10 g，連續(xù)給藥7 d。7 d后除正常對照組外，其余各組大鼠隔天腹腔注射CTX 40 mg/kg共5次。末次給藥后1 h，動物稱質(zhì)量，取血測定血清TNF-α、IL-2水平，處死動物稱胸腺、脾質(zhì)量，計算大鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。考察藥物是否具有提高特異性免疫功能的作用。

1.3統(tǒng)計學處理應用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)　果

2.1參芪多糖泡騰片對小鼠非特異性免疫功能的影響參芪多糖泡騰片對小鼠廓清指數(shù)K、吞噬指數(shù)α、肝指數(shù)及脾指數(shù)均有不同程度的升高作用，對吞噬指數(shù)K的影響最明顯；隨著劑量增加，作用增強；中、高劑量組的作用強于參芪五味子對照組及注射用胸腺五肽對照組。見表1。

2.2參芪多糖泡騰片對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的影響參芪多糖泡騰片能夠增強DNFB誘導小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應，其中中劑量組的作用與參芪五味子類似。見表2。

表1　參芪多糖泡騰片對小鼠非特異性免疫功能的影響（±s）

表1　參芪多糖泡騰片對小鼠非特異性免疫功能的影響（±s）

注：與正常對照組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與參芪五味子對照組、注射用胸腺五肽對照組比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

組別　廓清指數(shù)K　吞噬指數(shù)α　肝指數(shù)（g/10 g）脾指數(shù)（g/10 g）正常對照組低劑量組中劑量組高劑量組參芪五味子對照組注射用胸腺五肽對照組0.06±0.03 0.07±0.04a0.08±0.03ac0.09±0.02ad0.07±0.01a0.08±0.02a6.15±0.48 6.37±0.59a6.95±0.43ac7.88±0.34bd6.88±0.43a6.07±0.70 0.54±0.05 0.57±0.08 0.60±0.06a0.63±0.07b0.59±0.15 0.57±0.13 0.03±0.01 0.03±0.01 0.03±0.03ac0.04±0.01bd0.03±0.01 0.03±0.01

表2　參芪多糖泡騰片對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的影響（±s）

表2　參芪多糖泡騰片對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的影響（±s）

注：與正常對照組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與注射用胸腺五肽對照組比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

組別　耳腫脹度（g）脾指數(shù)（g/10 g）胸腺指數(shù)（g/10 g）正常對照組低劑量組中劑量組高劑量組參芪五味子對照組注射用胸腺五肽對照組0.85±0.76 6.26±7.26 9.38±2.15bd10.05±10.21bd8.25±2.33bd2.91±1.05 0.04±0.01 0.04±0.01c0.06±0.00ad0.06±0.01bd0.04±0.00 0.03±0.01a0.023±0.003 0.024±0.005c0.030±0.014d0.029±0.011d0.028±0.012 0.012±0.002b

2.3參芪多糖泡騰片對CTX所致免疫低下大鼠器官功能和TNF-α、IL-2的影響參芪多糖泡騰片可使脾指數(shù)、IL-2及TNF-α水平升高，對胸腺指數(shù)的作用不明顯；其中中、高劑量組對脾指數(shù)的作用、高劑量組對TNF-α的影響、中劑量組對IL-2的影響與參芪五味子對照組相當。見表3。

表3　參芪多糖泡騰片對CTX致免疫低下大鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、TNF-α和IL-2的影響（±s）

表3　參芪多糖泡騰片對CTX致免疫低下大鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)、TNF-α和IL-2的影響（±s）

注：與正常對照組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型對照組比較，cP＜0.05，dP＜0.01。

組別　脾指數(shù)（mg/100 g）胸腺指數(shù)（mg/100 g）IL-2　TNF-α正常對照組模型對照組低劑量組中劑量組高劑量組參芪五味子對照組注射用胸腺五肽對照組0.47±0.22c0.17±0.02a0.18±0.05a0.22±0.05ac0.23±0.07ac0.20±0.06a0.16±0.03a0.19±0.03 0.04±0.01b0.04±0.01b0.04±0.01b0.03±0.01b0.07±0.07b0.03±0.01b1 277.24±682.62 632.83±300.12b640.73±378.18b790.02±353.32bc758.57±358.33bc694.65±325.82b817.01±402.29bd156.45±14.12 126.87±12.42a123.00±32.35a175.22±34.33ac224.80±131.64bd105.24±57.89a219.59±123.95bd

3　討　論

免疫力是人體自身的防御功能，免疫失調(diào)會引起各種疾病。人體免疫系統(tǒng)由免疫器官、免疫細胞及免疫分子組成。肝臟、脾臟及胸腺是人體主要的免疫器官，通過測定肝、脾及胸腺指數(shù)可反映藥物的免疫調(diào)節(jié)作用；免疫細胞單核巨噬細胞的吞噬能力反映了機體的非特異性免疫作用，通過碳粒廓清試驗可測定機體對異物的吞噬能力，從而反映藥物的非特異性免疫調(diào)節(jié)作用；機體TNF-α、IL-2等免疫分子水平高低，也能反映藥物的免疫調(diào)節(jié)作用。

本研究結(jié)果表明，參芪多糖泡騰片能增強非特異性細胞免疫作用，其作用強于對照藥物參芪五味子，具有增強DNFB誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的作用，其效果與參芪五味子類似；可改善被CTX抑制的大鼠免疫功能，表現(xiàn)為升高脾指數(shù)和TNF-α、IL-2水平，但對胸腺指數(shù)無明顯作用。其免疫調(diào)節(jié)作用具有劑量依賴性，中劑量組可達到較明顯的作用。參芪多糖泡騰片的免疫增強作用，可用于臨床癌癥的輔助治療。

黨參和黃芪單方或復方在抗腫瘤方面已有臨床應用。鄭學芝等［9］研究了黃芪多糖對COLO205人結(jié)腸癌細胞株的抑制作用；蘇宏等［10］研究了參芪化瘀方對H22肝癌細胞survivin表達的影響；柏長青等［11］進行了黃芪、黨參提取物抑制肺癌細胞誘導血管內(nèi)皮細胞遷移的研究。

總之，中藥主要通過扶正祛邪來達到提高機體免疫力及自身抑癌能力的目的，其不良反應少，能夠提高患者的生活質(zhì)量。中藥成分復雜，作用靶點多，可從多方面輔助治療癌癥。本研究為參芪多糖泡騰片的臨床應用提供了理論支持。

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Pharmacological study on immunoregulation effect of Shenqi Polysaccharide Effervescent Tablets

Ren Juan1，Gu Yan2（1.Jiangsu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjing，Jiangsu 210029，China；2.Jiangsu Ruibo Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanjing，Jiangsu 211112，China）

ObjectiveTo investigate the immunoregulation effects of Shenqi Polysaccharide Effervescent Tablets in mice and rats.MethodsThe carbon particle clearance test and 2，4-dinitrofluorobenzene（DNFB）were used to induce the mice delayed type hypersensitivity reaction，the changes of the spleen index，thymus index，TNF-α and IL-2 in immunosuppressed rats caused by cyclophosphamide（CTX）were detected for investigating the immunoregulation effects of Shenqi Polysaccharide Effervescent Tablets in rats.ResultsShenqi Polysaccharide Effervescent Tablets could increase the liver index，spleen index，clearance index K value and phagocytic index α value；and enhanced the spleen index，TNF-α and IL-2 levels in immunosuppressed rats caused by CTX.ConclusionShenqi Polysaccharide Effervescent Tablets can enhance specific immune and non-specific immune function of mice and increases the immunity in rats.

Polysaccharides；Tablets；Codonopsispilosula/pharmacology；Astragalusmembranaceus/pharmacology；Immunocompetence；Hypersensitivity，Delayed；Carbon clearance test

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.01.017

A

1009-5519（2016）01-0051-03

任娟（1987-），藥師，主要從事中藥調(diào)配工作。

（2015-08-18）