固相凝集法血小板抗體檢測(cè)與早期流產(chǎn)相關(guān)性探討

林燕，聶宇波，徐靜，張春燕

(江西省贛州市人民醫(yī)院 輸血科，江西 贛州 341000)

固相凝集法血小板抗體檢測(cè)與早期流產(chǎn)相關(guān)性探討

林燕Δ，聶宇波，徐靜，張春燕

(江西省贛州市人民醫(yī)院 輸血科，江西 贛州 341000)

目的研究探討通過(guò)固相凝集法檢測(cè)血小板抗體對(duì)判斷早期流產(chǎn)的臨床意義，并分析血小板抗體檢測(cè)結(jié)果與早期流產(chǎn)的相關(guān)性。方法選取江西省贛州市人民醫(yī)院產(chǎn)科2015年9月～2016年6月就診的有早期流產(chǎn)史的50例女性作為研究對(duì)象，采用固相凝集法對(duì)其血小板抗體進(jìn)行檢測(cè)，并計(jì)算檢測(cè)陽(yáng)性率。同時(shí)，選取同期在產(chǎn)科接受產(chǎn)前檢查的正常孕婦1092例作為對(duì)照，行相同檢測(cè)，比較2組受檢女性的血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性率。結(jié)果有早期流產(chǎn)史的觀察組女性血小板抗體陽(yáng)性檢出率(22.0%)顯著高于無(wú)早期流產(chǎn)史的正常孕婦(3.1%)(P<0.05)；有早期流產(chǎn)史的女性中，流產(chǎn)次數(shù)>2次的女性血小板抗體篩查陽(yáng)性率(40.0%)顯著高于流產(chǎn)次數(shù)≤2次的女性(17.5%)(P<0.05)；血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性的女性早期流產(chǎn)的發(fā)生率(24.4%)顯著高于檢測(cè)陰性的女性(3.6%)(P<0.05)，且血小板抗體篩查結(jié)果與早期流產(chǎn)之間存在顯著相關(guān)性(r=0.782，P<0.05)，其相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)RR=6.96。結(jié)論通過(guò)固相凝集法對(duì)孕婦的血小板抗體進(jìn)行篩查，有利于早期流產(chǎn)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)，也有利于流產(chǎn)病因的分析及新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜的預(yù)防。

固相凝集法；血小板抗體；早期流產(chǎn)

有調(diào)查研究顯示，當(dāng)母嬰之間的血小板血型不合的情況下，妊娠免疫會(huì)誘發(fā)早期流產(chǎn)、新生兒同種免疫血小板減少性紫癜等一系列不良反應(yīng)的出現(xiàn)[1]。因而，對(duì)不同妊娠時(shí)期孕婦的血小板抗體進(jìn)行檢測(cè)具有十分重要的意義。本文選擇早期流產(chǎn)史的女性50例作為研究對(duì)象，通過(guò)固相凝集法對(duì)其血小板抗體進(jìn)行檢測(cè)，并分析其檢測(cè)結(jié)果與早期流產(chǎn)之間的相關(guān)性，具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取江西省贛州市人民醫(yī)院產(chǎn)科2015年9月～2016年6月就診的有早期流產(chǎn)史的女性50例作為觀察組，其年齡在22～37歲，平均年齡為(32.1±2.8)歲；其中，有1～2次自然流產(chǎn)史的女性40例，有2次以上自然流產(chǎn)史的女性10例，所有被調(diào)查者的流產(chǎn)時(shí)間均發(fā)生于妊娠后的3個(gè)月左右。

選取同期在婦產(chǎn)科接受產(chǎn)前檢查的正常孕婦1092例作為對(duì)照，其年齡在23～38歲，平均年齡為(31.2±3.0)歲，所有孕婦均無(wú)輸血史，且經(jīng)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩查結(jié)果呈陰性，IgG抗-A、抗-B效價(jià)均在64以下。

2組受檢者在年齡等方面的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法 采集受檢者的靜脈血液標(biāo)本3 mL，并將其置于含有乙二胺四乙酸二鉀的采血管中進(jìn)行抗凝處理，在3000 r/min的速度下離心5 min，吸取上層血漿。選擇長(zhǎng)春博德生物科技有限公司生產(chǎn)的固相凝集法血小板抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)血小板抗體結(jié)果進(jìn)行判斷，操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行：①制備血小板懸液(有效期內(nèi)機(jī)采血小板用0.9%NaCl進(jìn)行5～10倍稀釋)；②向反應(yīng)孔中加入50 μL血小板懸液，輕搖反應(yīng)板10s，平板離心機(jī)50 g離心5 min，使血小板固定在反應(yīng)孔底部，倒出反應(yīng)孔中液體，洗滌工作液洗滌3次，最后一次洗滌后將反應(yīng)板倒置于吸水紙上吸干殘余液體；③立即向每個(gè)反應(yīng)孔中加入100 μL低離子強(qiáng)度溶液，并分別在相應(yīng)孔中加入50 μL患者樣本、陽(yáng)性及陰性對(duì)照，封口膠封好混勻置于37 ℃水浴孵育30 min；④棄去封口膜洗滌5次，加入50 μL抗人IgG及指示紅細(xì)胞，輕輕振蕩混勻，200 g離心5 min。紅細(xì)胞平鋪于反應(yīng)孔的底部表面或者紅細(xì)胞只能夠結(jié)合到部分孔底部的情況為陽(yáng)性；以紅細(xì)胞在反應(yīng)孔底部中央發(fā)生紅細(xì)胞聚集的情況為陰性[2]。

比較2組受檢女性的血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性率，探討早期流產(chǎn)史女性的流產(chǎn)次數(shù)與血小板抗體檢測(cè)結(jié)果的影響，并分析血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性與早期流產(chǎn)之間的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 不同組別女性的血小板抗體篩查結(jié)果比較 經(jīng)固相凝集法檢測(cè)2組受檢女性的血小板抗體，有早期流產(chǎn)史的觀察組女性和無(wú)早期流產(chǎn)史的正常孕婦抗體陽(yáng)性檢出率分別為22.0%和3.1%，觀察組顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同組別女性的血小板抗體篩查結(jié)果比較[n(%)]Tab.1 Comparison of platelet antibody screening between two groups[n(%)]

*P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.2 不同流產(chǎn)次數(shù)的女性的血小板抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果 有早期流產(chǎn)史的女性中，流產(chǎn)次數(shù)≤2次和>2次的女性，血小板抗體篩查陽(yáng)性率分別為17.5%和40.0%，流產(chǎn)次數(shù)>2次的女性顯著高于流產(chǎn)次數(shù)≤2次的女性，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同流產(chǎn)次數(shù)的女性的血小板抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果[n(%)]Tab.2 Comparison of platelet antibody screening between different abortion frequency[n(%)]

*P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

2.3 血小板抗體與早期流產(chǎn)之間的相關(guān)性 血小板抗體檢測(cè)陽(yáng)性與陰性的女性中，早期流產(chǎn)的發(fā)生率分別為24.4%(11/45)、3.6%(39/1097)，血小板抗體篩查陽(yáng)性的女性，早期流產(chǎn)率顯著升高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示血小板抗體篩查結(jié)果與早期流產(chǎn)之間存在顯著相關(guān)性(r=0.782，P<0.05)，其相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)RR=6.96。見(jiàn)表3。

表3 血小板抗體與早期流產(chǎn)之間的關(guān)系Tab.3 Corelation of platelet antibody and early abortion

3 討論

血小板表面的復(fù)雜血型抗原是由遺傳決定，且屬于常染色體顯性遺傳[3]，血小板血型抗原中，與其他細(xì)胞表面或組織共有的血型抗原，被稱(chēng)為血小板相關(guān)抗原，包括人類(lèi)白細(xì)胞抗原HLA-A、HLA-B及ABH紅細(xì)胞血型系統(tǒng)抗原；另一類(lèi)則為分布于血小板膜糖蛋白上的血小板特異性抗原HPA[4]，目前被國(guó)際公認(rèn)的血小板特異性抗原有5個(gè)系統(tǒng)10個(gè)抗原，由于其存在獨(dú)特的型特異性，被稱(chēng)為血小板血型，血小板抗原不合是導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生血小板抗體的重要原因，而血小板抗體的產(chǎn)生原因又包括了自身免疫因素、輸血因素等多種[5]。人類(lèi)血小板抗原與多次輸血后血小板輸注無(wú)效、輸血后紫癜以及新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜等之間都有密切的關(guān)系。機(jī)體在被血小板特異性抗原或HLA等相關(guān)免疫因素影響會(huì)產(chǎn)生抗血小板抗體[6]。

本文討論的是血小板抗體與女性早期流產(chǎn)之間的關(guān)系，則只考慮自身免疫因素的影響。母嬰間血小板血型不合的妊娠免疫會(huì)導(dǎo)致母親對(duì)胎兒血型抗原免疫產(chǎn)生抗體，并對(duì)胎兒的血小板進(jìn)行破壞，胎兒的血小板減少則會(huì)誘發(fā)流產(chǎn)，且由于這種IgG抗體一般在妊娠第14周就可以通過(guò)胎盤(pán)屏障，孕婦發(fā)生流產(chǎn)的時(shí)間也一般在3個(gè)月左右；即使未出現(xiàn)早期流產(chǎn)的情況，也可能因新生兒血小板減少造成新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜，重者還會(huì)對(duì)新生兒的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、重要臟器等造成影響，導(dǎo)致水腫、出血等嚴(yán)重癥狀出現(xiàn)，或因急性顱內(nèi)出血等情況導(dǎo)致死亡，危害十分嚴(yán)重。因而，對(duì)于孕婦的血小板抗體篩查意義十分重大，特別是那些有早期流產(chǎn)史或者習(xí)慣性流產(chǎn)的女性而言，血小板抗體的篩查需得到高度重視。

本文對(duì)有早期流產(chǎn)史的女性、正常孕婦的血小板抗體篩查結(jié)果進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)有早期流產(chǎn)史的女性血小板抗體陽(yáng)性率顯著高于正常孕婦，且有流產(chǎn)次數(shù)越多，血小板抗體陽(yáng)性率也相應(yīng)升高的情況，這與劉凌[7]的研究結(jié)果基本一致，且本文有早期流產(chǎn)史的女性血小板抗體陽(yáng)性率(22.0%)較之更高，與正常孕婦之間的差異也更為顯著(P<0.05)。而通過(guò)血小板抗體篩查結(jié)果與早期流產(chǎn)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性分析可見(jiàn)，2者呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，血小板抗體篩查陽(yáng)性女性的早期流產(chǎn)高(相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)RR=6.96)。

需要注意的因母嬰間血型不合導(dǎo)致流產(chǎn)的情況有2種，一種為母嬰間紅細(xì)胞ABO系或Rh系血型抗體不合，另一種是母嬰間血小板血型不合的血小板抗體，也就是本文研究的內(nèi)容，前者被認(rèn)為是導(dǎo)致晚期習(xí)慣性流產(chǎn)的主要原因[8], 而后者則被認(rèn)為是導(dǎo)致早期流產(chǎn)的主要原因。這是由于相對(duì)于紅細(xì)胞，血小板在妊娠早期更容易進(jìn)入母體血液循環(huán)，并因血小板血型的抗原抗體同種免疫反應(yīng)誘發(fā)早期流產(chǎn)[9-10]。

本研究應(yīng)用固相凝集法進(jìn)行血小板抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)離心速度和孵育溫度需嚴(yán)格把控，該方法結(jié)果直觀，易于判讀，敏感性和特異性強(qiáng)，方便臨床應(yīng)用，且易于標(biāo)準(zhǔn)化。但也存在以下影響因素：樣本抗凝不充分容易形成纖維蛋白凝塊及指示紅細(xì)胞溶血或污染出可導(dǎo)致假陽(yáng)性。

綜上所述,通過(guò)固相凝集法對(duì)孕婦的血小板抗體進(jìn)行篩查，有利于早期流產(chǎn)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)，也有利于流產(chǎn)病因的分析及新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜的預(yù)防。

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(編校：王儼儼)

Relationshipbetweenplateletantibodydetectionandearlyabortionbysolidstateagglutination

LIN YanΔ, NIE Yu-bo, XU Jing, ZHANG Chun-yan
(Department of Blood Transfusion, Ganzhou People’s Hospital, Ganzhou 341000, China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance of platelet antibodies in the determination of early abortion by solid-phase agglutination, and to analyze the correlation between the results of platelet antibody detection and early abortion.Methods50 women selected from Ganzhou People’s Hospital of Jiangxi province from September 2015 to June 2016 had early abortion history as the research object, using solid agglutination method to detect platelet antibody, and calculate the positive detection rate.At the same time, 1092 cases pregnant women undergoing normal prenatal examination were selected as control group, for the same detection, compare platelet antibody positive rate between two groups.ResultsThe platelet antibody positive rate in early history of abortion in observation group female was 22%, which was significantly higher than that in normal pregnant women without early abortion (3.1%)(P<0.05); the platelet antibody screening positive rate in abortion time above twice of early abortion women was 40.0%, significantly higher than bellow twice(17.5%)(P<0.05); the early abortion rate of platelet antibody positive women was 24.4%, significantly higher than that of negative women (3.6%), there were statistically significant differences (P< 0.05), and there was a significant correlation between the platelet antibody screening results and early abortion(r=0.782，P<0.05), the relative risk ofRR=6.96.ConclusionIt is helpful to predict the risk of early abortion and the analysis of the cause of abortion and the prevention of neonatal autoimmune thrombocytopenia purpura by the method of solid state agglutination.

solid state agglutination; platelet antibody; early abortion

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.10.043

林燕，通信作者，女，本科，副主任技師，研究方向：輸血檢驗(yàn)，E-mail：1403247326@qq.com。

R714.21

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