四國(guó)藥典胰酶標(biāo)準(zhǔn)淺析

黃素娟，劉莉莎，范慧紅Δ

(1.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050；2.中國(guó)藥科大學(xué)，江蘇 南京 211100)

四國(guó)藥典胰酶標(biāo)準(zhǔn)淺析

黃素娟1,2，劉莉莎1，范慧紅1Δ

(1.中國(guó)食品藥品檢定研究院，北京 100050；2.中國(guó)藥科大學(xué)，江蘇 南京 211100)

本文闡述了中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、英國(guó)藥典、日本藥局方中胰酶標(biāo)準(zhǔn)的歷史沿革，并對(duì)現(xiàn)行版四國(guó)藥典胰酶標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較和討論，發(fā)現(xiàn)各國(guó)藥典胰酶標(biāo)準(zhǔn)各有異同，其中活力限度要求差異較大，應(yīng)予以重視，就效價(jià)測(cè)定方法而言，美國(guó)藥典、英國(guó)藥典的方法更為合理。

胰酶；中國(guó)藥典；美國(guó)藥典；英國(guó)藥典；日本藥局方；效價(jià)測(cè)定

胰酶是從豬、羊或牛胰中提取的多種酶混合物，主要為胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶。臨床上廣泛用于消化不良及肝、胰腺疾病引起的消化障礙，尤其是膽囊纖維變性疾病。胰酶的使用有一定的歷史，早在20世紀(jì)五六十年代已經(jīng)被各國(guó)藥典收錄，至今仍廣泛使用。目前，國(guó)內(nèi)現(xiàn)有胰酶藥品共有批準(zhǔn)文號(hào)84個(gè)，其中有2個(gè)進(jìn)口藥品，制劑包括片劑、腸溶膠囊以及復(fù)方制劑，相關(guān)生產(chǎn)單位53家。通過(guò)查閱中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、英國(guó)藥典和日本藥局方，發(fā)現(xiàn)各國(guó)藥典胰酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)各不相同，尤其是胰酶中胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶三酶的限度、效價(jià)單位以及相應(yīng)測(cè)定方法，應(yīng)當(dāng)引起重視。本文對(duì)各國(guó)藥典胰酶標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)比討論，旨在發(fā)現(xiàn)異同并為胰酶的質(zhì)量研究提供參考。

1 四國(guó)藥典胰酶收載概況

1.1 歷史沿革 第一版中國(guó)藥典(1953年版)開(kāi)始收載胰酶，最初標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)項(xiàng)目?jī)H包含性狀、脂肪、酪蛋白轉(zhuǎn)化量。直至1977年版藥典，標(biāo)準(zhǔn)中效價(jià)測(cè)定修訂為采用半定量的比濁法測(cè)定胰酶中胰蛋白酶的活力，方法誤差較大；脂肪限度由原標(biāo)準(zhǔn)不得超過(guò)30 mg提高到不得超過(guò)20 mg。隨著藥典不斷更新修訂，胰酶的標(biāo)準(zhǔn)要求也有所變化。1985年版藥典，胰酶標(biāo)準(zhǔn)增加了干燥失重項(xiàng)目，開(kāi)始規(guī)定胰酶中胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶三酶活力限度，并建立起相應(yīng)效價(jià)測(cè)定方法，一直沿用至今。2010年版藥典新增微生物限度。

美國(guó)藥典于1955年版(第15版)開(kāi)始收載胰酶，標(biāo)準(zhǔn)要求檢查性狀、脂肪、胰蛋白酶與胰淀粉酶活力，其酶活力測(cè)定方法分別為簡(jiǎn)單的比濁法與比色法。在1970年版(第18版)建立了新的胰蛋白酶測(cè)定方法，以胰酶標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用紫外分光光度法在280 nm下測(cè)定效價(jià)。此外，該版本首次要求限定微生物不得檢出沙門(mén)氏菌，直至2015年版(第38版)新增該項(xiàng)下不得檢出大腸桿菌。在1975年版(第19版)增加干燥失重測(cè)定項(xiàng)以及胰脂肪酶效價(jià)限度。用胰酶標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并采用pH指示連續(xù)滴定法測(cè)定胰脂肪酶活力。在1990年版(第22版)胰淀粉酶效價(jià)測(cè)定方法由原比色法更新為使用標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)法。2000年版(第24版)開(kāi)始使用胰淀粉酶胰蛋白酶混合標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定胰淀粉酶和胰蛋白酶的效價(jià)，胰脂肪酶標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定胰脂肪酶效價(jià)，方法至今未變。

英國(guó)藥典1953年版到1968年版胰酶標(biāo)準(zhǔn)比較簡(jiǎn)單，規(guī)定檢測(cè)項(xiàng)目有性狀、鑒別、酶活力，其中胰蛋白酶及胰淀粉酶活力測(cè)定方法采用比色法，胰脂肪酶采用pH指示滴定法。1973年版，增加微生物限度、干燥失重，并開(kāi)始規(guī)定胰蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶三酶效價(jià)，建立效價(jià)測(cè)定新方法。其中胰蛋白酶以胰酶標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用紫外分光光度法在280 nm下測(cè)定效價(jià)。胰脂肪酶的效價(jià)測(cè)定以橄欖油為底物，牛膽鹽溶液為激活劑，開(kāi)始使用標(biāo)準(zhǔn)品定量，胰淀粉酶仍采用比色法定量。1980年版，胰蛋白酶效價(jià)測(cè)定法的檢測(cè)波長(zhǎng)由280 nm改為275 nm，胰脂肪酶效價(jià)測(cè)定方法中激活劑由原標(biāo)準(zhǔn)牛膽鹽溶液改用牛磺膽酸鈉。1988年版，胰淀粉酶效價(jià)測(cè)定方法更新，開(kāi)始使用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行效價(jià)測(cè)定。

日本藥局方從1986年版(第11版)到1991年版(第12版)，胰酶標(biāo)準(zhǔn)檢查項(xiàng)目有性狀、脂肪、酸敗、干燥失重、熾灼殘?jiān)?，并要求?duì)胰蛋白酶和胰脂肪酶活力進(jìn)行測(cè)定，采用了半定量方法。1996年版(第13版)開(kāi)始限定胰酶中三酶效價(jià)并相應(yīng)建立新的測(cè)定方法。

由四國(guó)藥典胰酶標(biāo)準(zhǔn)的歷史沿革可見(jiàn)，胰酶的標(biāo)準(zhǔn)在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)檢測(cè)項(xiàng)目的增補(bǔ)及提高較少。效價(jià)測(cè)定的方法由半定量到定量，由絕對(duì)到相對(duì)，逐步提高方法的專屬性和合理性。從標(biāo)準(zhǔn)提高的進(jìn)程來(lái)看，美國(guó)藥典、英國(guó)藥典發(fā)展要比我國(guó)稍快。美國(guó)藥典早在1955年版開(kāi)始要求胰酶效價(jià)測(cè)定，英國(guó)藥典于1973年版增加胰酶中三酶效價(jià)測(cè)定，中國(guó)藥典直到1985年版才新增三酶效價(jià)測(cè)定項(xiàng)。

1.2 現(xiàn)行版四國(guó)藥典胰酶標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比 現(xiàn)行版四國(guó)藥典對(duì)胰酶定義及性狀的描述基本一致，均對(duì)胰酶中胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶三酶的效價(jià)進(jìn)行了明確的限度規(guī)定，但是由于效價(jià)的定義和測(cè)定方法均不相同(見(jiàn)下文)，各國(guó)限度也均不一致。鑒別項(xiàng)僅有英國(guó)藥典要求按照相應(yīng)方法檢測(cè)胰淀粉酶和胰脂肪酶。對(duì)于脂肪的檢測(cè)，中國(guó)藥典和日本藥局方要求較美國(guó)藥典和英國(guó)藥典更為嚴(yán)格。此外，日本藥局方?jīng)]有對(duì)微生物限定，而是通過(guò)檢測(cè)酸敗來(lái)進(jìn)行安全性檢查。各國(guó)藥典對(duì)胰酶的標(biāo)準(zhǔn)中均沒(méi)有純度、有關(guān)物質(zhì)以及重金屬等檢查項(xiàng)目。胰酶藥典中質(zhì)控項(xiàng)目規(guī)定見(jiàn)表1。

表1 現(xiàn)行版四國(guó)藥典胰酶標(biāo)準(zhǔn)

-表示未規(guī)定,means not provided

2 現(xiàn)行版四國(guó)藥典胰酶效價(jià)測(cè)定方法比較

酶類藥物以活力來(lái)確保其有效性，可見(jiàn)效價(jià)測(cè)定至關(guān)重要，但是各國(guó)胰酶效價(jià)測(cè)定法以及酶活力單位的定義都各有不同。胰酶主要含胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶，下面就現(xiàn)行版四國(guó)藥典分別對(duì)此三酶的效價(jià)測(cè)定方法進(jìn)行闡述。

表2 現(xiàn)行版四國(guó)藥典胰酶中胰蛋白酶效價(jià)測(cè)定Tab.2 The latest edition of trypsase potency determination in four countries’ pharmacopeia

2.2 胰淀粉酶 胰淀粉酶可作用于α-1,4-糖苷鍵催化淀粉水解，終產(chǎn)物為麥芽糖和葡萄糖[5-6]，各國(guó)藥典均通過(guò)終產(chǎn)物的定量來(lái)確定酶的效價(jià)。中國(guó)、美國(guó)、英國(guó)藥典均采用次碘酸法，利用碘在堿性溶液中生成具有強(qiáng)氧化性的次碘酸鹽與糖中的醛基結(jié)構(gòu)反應(yīng)，使葡萄糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸，用硫代硫酸鈉滴定剩余碘量，達(dá)到定量測(cè)定胰淀粉酶活力的目的。中國(guó)藥典直接以硫代硫酸鈉滴定液滴定供試品反應(yīng)后的剩余碘量，進(jìn)而計(jì)算胰淀粉酶活力。美國(guó)、英國(guó)藥典方法相似，利用已知活力單位的標(biāo)準(zhǔn)品與供試品平行測(cè)定，以相應(yīng)的結(jié)果比值來(lái)計(jì)算，將標(biāo)準(zhǔn)品的活力單位量值傳遞給供試品，從而達(dá)到測(cè)定目的。日本藥局方測(cè)定方法則是先用斐林試劑與淀粉水解產(chǎn)物葡萄糖反應(yīng)生成氧化亞銅，再加入硫酸與碘化鉀，經(jīng)進(jìn)一步反應(yīng)生成碘單質(zhì)，用硫代硫酸鈉定量滴定碘生成量來(lái)確定胰淀粉酶的效價(jià)。

表3 現(xiàn)行版四國(guó)藥典胰酶中胰淀粉酶效價(jià)測(cè)定Tab.3 The latest edition of pancreatic amylase potency determination in four countries’ pharmacopeia

2.3 胰脂肪酶 各國(guó)最新版藥典中胰酶的胰脂肪酶效價(jià)測(cè)定原理均為：胰脂肪酶能裂解大分子底物，在一定條件下把甘油三酯類脂肪逐步水解，終產(chǎn)物為甘油及相應(yīng)的脂肪酸[5-6]，采用一定方法檢測(cè)脂肪酸的生成量即可確定胰脂肪酶的活力。中國(guó)、美國(guó)、英國(guó)藥典所用的方法是pH指示連續(xù)滴定法，保持滴定體系的pH穩(wěn)定，用已知濃度堿液滴定水解液，定量測(cè)定胰脂肪酶的活力。中國(guó)藥典直接以氫氧化鈉滴定液滴定供試品水解液中的酸量，進(jìn)而確定胰脂肪酶活力。而美國(guó)藥典和英國(guó)藥典均用了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定，美國(guó)藥典中根據(jù)測(cè)定時(shí)的滴定時(shí)間和滴定液消耗體積作相關(guān)曲線，用其中滴定液消耗速率恒定的直線段上的點(diǎn)計(jì)算產(chǎn)酸速率，通過(guò)比較供試品與標(biāo)準(zhǔn)品的酶活力確定供試品中胰脂肪酶是否符合限度要求；英國(guó)藥典則參照標(biāo)準(zhǔn)品耗堿量來(lái)計(jì)算供試品的胰脂肪酶活力。日本藥局方采用反滴定法，首先加入過(guò)量氫氧化鈉，再用鹽酸返滴定，通過(guò)氫氧化鈉消耗的量來(lái)確定胰脂肪酶活力。

表4 現(xiàn)行版四國(guó)藥典胰酶中胰脂肪酶效價(jià)測(cè)定Tab.4 The latest edition of pancrelipase potency determination in four countries’ pharmacopeia

綜上所述，四國(guó)藥典中胰酶效價(jià)測(cè)定方法原理基本一致，但中國(guó)藥典和日本藥局方均采用絕對(duì)法，而美國(guó)、英國(guó)藥典采用了法定標(biāo)準(zhǔn)品，其中英國(guó)藥典采用歐洲藥典會(huì)提供的胰酶標(biāo)準(zhǔn)品，均從豬的胰臟中分離提純獲得。美國(guó)、英國(guó)藥典采用相對(duì)法以法定標(biāo)準(zhǔn)品為參照進(jìn)行胰酶的效價(jià)測(cè)定，更為合理。

3 小結(jié)

綜觀四國(guó)藥典中胰酶收載情況，其標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定在一些方面趨于一致，一些方面又存在差別。從歷史沿革看，胰酶標(biāo)準(zhǔn)修訂的進(jìn)展較慢，各國(guó)標(biāo)準(zhǔn)中測(cè)定的項(xiàng)目也不多，這與酶本身的特性有關(guān)，胰酶乃至眾多的酶類藥物在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中很少有純度、有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)，這是酶類藥物安全性控制研究過(guò)程中值得思考并且需要突破的問(wèn)題。胰酶是一種混合酶制劑，除了胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶外，還可能存在其他酶[7]，這對(duì)于胰酶的使用存在安全性風(fēng)險(xiǎn)。酶的效價(jià)決定了酶的有效性，效價(jià)測(cè)定的重要性不言而喻，比較四國(guó)藥典發(fā)現(xiàn)，就胰酶效價(jià)測(cè)定方法而言，日本藥局方中的方法相對(duì)簡(jiǎn)單，我國(guó)藥典所使用的方法是絕對(duì)法，一直未用到標(biāo)準(zhǔn)品，美國(guó)藥典與英國(guó)藥典方法趨于一致，均采用了相對(duì)法，以標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)，方法更具合理性。找出并認(rèn)識(shí)各國(guó)藥典間的標(biāo)準(zhǔn)差異，為縮小差距奠定基礎(chǔ)。隨著用藥安全要求的不斷提高，我國(guó)有必要將藥典標(biāo)準(zhǔn)不斷改善，嘗試研制胰酶標(biāo)準(zhǔn)品，采用相對(duì)法測(cè)定效價(jià)，使之更為合理，以更好地保障胰酶藥品的安全、有效、質(zhì)量可控。

[1] 中國(guó)藥典ChP[S].1953年版-2015年版.

[2] 美國(guó)藥典 USP[S].第15版-第38版.

[3] 英國(guó)藥典BP[S].1953年版-2015年版.

[4] 日本藥局方JP[S].第11版-第16版.

[5] 陳樂(lè)儀，關(guān)祖真，梁玉玲，等.胰酶中脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶活力測(cè)定方法的研究[J].生化藥物雜志，1985，01：48-57.

[6] 游文素.胰酶酶活力測(cè)定方法分析[J].中國(guó)藥業(yè)，2000，9(5)：23.

[7] 劉湘新，唐小武，劉進(jìn)輝，等.胰酶的制備與生物活性測(cè)定[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2006，6：35-37.

(編校：吳茜)

Analysisonthepancreatinstandardsoffourcountries’pharmacopoeia

HUANG Su-juan1,2, LIU Li-sha1, FAN Hui-hong1Δ
(1.National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050；2.China Pharmaceutical University,Nanjing 211100,China)

The history about pancreatin standards in different pharmacopeia, i.e.the Chinese Pharmacopoeia (ChP), the United States Pharmacopoeia (USP), the British Pharmacopoeia (BP), and the Japanese Pharmacopoeia (JP) were clarified in this paper.As well as the latest edition of pancreatin standards in different pharmacopeia were compared and discussed.There are many similarities and differences of the pancreatin standards between ChP and the three other pharmacopoeias.We should attach importance to the significant difference of the potency limitation in four countries’ pharmacopoeia.Otherwise,the potency test method of pancreatin in USP and BP is more reasonable.

pancreatin; Chinese Pharmacopoeia; the United States Pharmacopoeia; British Pharmacopoeia; Japanese Pharmacopoeia; potency determination

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.10.002

黃素娟，女，碩士在讀，研究方向：生化藥物分析，E-mail: susuhappy138@163.com；范慧紅，通信作者，女，博士，研究員，研究方向：生化藥物分析，E-mail: shenghuayaoshi@126.com。

中國(guó)食品藥品檢定研究院2015年中青年發(fā)展研究基金(2015A02)

R921

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