RNAi沉默c-Met基因?qū)θ四X膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響

段韜，顧應(yīng)江，張彪

（1.四川省宜賓市第一人民醫(yī)院 神經(jīng)外科，四川 宜賓 644000；2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院 神經(jīng)外科，四川 瀘州646000；3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一大足醫(yī)院 神經(jīng)外科，重慶 402360）

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RNAi沉默c-Met基因?qū)θ四X膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響

段韜1，顧應(yīng)江2，張彪3

（1.四川省宜賓市第一人民醫(yī)院 神經(jīng)外科，四川 宜賓 644000；2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院 神經(jīng)外科，四川 瀘州646000；3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一大足醫(yī)院 神經(jīng)外科，重慶 402360）

目的探討RNAi沉默c-Met基因?qū)θ四X膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響。方法分別構(gòu)建3種靶向c-Met基因的短發(fā)卡RNA（shRNA）序列，以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方式導(dǎo)入人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，并篩選出穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株。采用PCR和Western blot檢測(cè)c-Met-shRNA轉(zhuǎn)染后U251細(xì)胞c-Met的表達(dá)情況，以篩選出可有效沉默c-Met基因的shRNA。c-Met基因沉默后，采用MTT法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)U521細(xì)胞增殖情況，采用Transwell法和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)U251細(xì)胞侵襲和遷移情況，采用裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)研究U251細(xì)胞體內(nèi)成瘤性。結(jié)果成功構(gòu)建可有效沉默c-Met基因的c-Met-shRNA1。沉默c-Met后，c-Met mRNA以及蛋白的表達(dá)均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而且可明顯抑制U251細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移以及體內(nèi)成瘤能力，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論RNAi沉默c-Met基因可有效抑制人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移以及體內(nèi)成瘤能力。

RNAi沉默；c-Met；人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞

人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤，約占全部中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤的32%，約占中樞神經(jīng)系統(tǒng)高度惡性腫瘤的81%［1-2］。腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的預(yù)后極差，患者5年存活率僅為20%～30%，高度惡性膠質(zhì)瘤患者的存活期僅為9～12個(gè)月［3］。高度惡性膠質(zhì)瘤難以治療的主要原因是由于其所具有的過(guò)度增殖、抗凋亡以及較強(qiáng)的侵襲、遷移能力等惡性生物學(xué)行為［4］。研究發(fā)現(xiàn)，c-Met基因編碼的產(chǎn)物在人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤中高表達(dá)，與腫瘤的增殖和侵襲等惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)［5-6］。因此，本研究采用RNAi技術(shù)沉默人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞c-Met基因的表達(dá)，以探討沉默c-Met基因?qū)θ四X膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞（中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)），RPMI 1640培養(yǎng)基、胎牛血清（Gibco，美國(guó)）；胰蛋白酶（Invitrogen，美國(guó)），EcoRⅠ和XhoⅠ限制性內(nèi)切酶、T4 DNA連接酶（New England Biolabs公司，英國(guó)），Opti-MEM培養(yǎng)基和Lipofectamine 2000（Invitrogen，美國(guó)），Trizol（Invitrogen公司，美國(guó)），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（ABI Applied Biosystems公司，美國(guó)），PCR試劑盒（TaKaRa公司，日本）；BALB/C-nu/nu裸鼠（上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)傳代人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞接種于含10%FBS、100 IU/L青霉素和100 mg/L鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基，37℃，5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞融合到85%左右時(shí)，用0.25%胰酶消化、傳代。

1.2.2靶向c-MetshRNA構(gòu)建根據(jù)c-Met基因信息，由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)并合成3條短發(fā)夾RNA（small hairpin RNA，shRNA），分別為c-Met-shRNA1、c-Met-shRNA2和 c-Met-shRNA3（內(nèi)含限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ和XhoⅠ的酶切位點(diǎn)），Blast比對(duì)與人類其他基因編碼序列無(wú)同源性。退火形成雙鏈DNA，經(jīng)T4 DNA連接酶與經(jīng)過(guò)EcoRⅠ和XhoⅠ酶切后的pGPU6/GFP/Neo載體連接，以構(gòu)建干擾c-Met表達(dá)的重組質(zhì)粒。c-Met-shRNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5α大腸桿菌，并轉(zhuǎn)移至含氨芐霉素抗性的瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，采用藍(lán)白斑法篩選陽(yáng)性克隆并送呈上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司測(cè)序。見表1。

1.2.3靶向c-Met-shRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞接種于6孔板，每孔細(xì)胞1×105，融合達(dá)到70%時(shí)，隨機(jī)分為5組開始轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。A液：1μg c-Met-shRNA用50μl OPTI-MEM稀釋，靜置10 min。B液：2μl Lipofectamine 2000用50μl OPTIMEM稀釋，靜置10 min?；旌螦、B液，靜置20 min。取出培養(yǎng)的U251細(xì)胞，棄去原培養(yǎng)液并用無(wú)血清培養(yǎng)液漂洗，再加入1 ml無(wú)血清培養(yǎng)液和A/B混合液，孵育6 h。6 h后棄去轉(zhuǎn)染液，更換為完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)72 h后，觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況。

1.2.4PCR檢測(cè)c-Met表達(dá)轉(zhuǎn)染72 h后，Trizol法提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。采用Primer 5.0軟件，參照文獻(xiàn)［7］，設(shè)計(jì)c-Met和G3PDH引物，由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司提供。c-Met正向：5'-ACAGTGGCATGTCAACATCGCT-3'，c-Met反向：5'-GCTCGGTAGTCTACAGATTC-3'，656 bp。G3PDH正向：5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'，反向：5'-TCCACCACCCTGTTGCTG-3'，1 000 bp。PCR反應(yīng)條件：首先，95℃預(yù)變性10 min；緊接著，95℃變性30 s，55℃退火1 min，68℃延伸1 min，共24個(gè)循環(huán)；最后，68℃延伸10 min。產(chǎn)品經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，Gene Tools軟件分析。

1.2.5Western blot檢測(cè)c-Met蛋白表達(dá)轉(zhuǎn)染72h后，收集細(xì)胞，PBS淋洗，置于冰浴，加入RIPA裂解液裂解30 min，刮離細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管，4℃，12 000 r/min離心5 min，取上清置入-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。樣品蛋白?jīng)二喹啉甲酸蛋白分析試劑盒定量，置入-20℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?0μg總蛋白上樣，經(jīng)10%SDS-PAGE電泳分離，轉(zhuǎn)至硝酸纖維膜；TBST淋洗3×10 min，5%脫脂奶粉室溫封閉1 h；加入c-Met一抗，4℃孵育過(guò)夜；TBST淋洗3×10 min，加入HRP標(biāo)記的兔抗鼠二抗，37℃孵育1 h；TBST淋洗3×10 min，DAB顯色。

1.2.6MTT檢測(cè)U251細(xì)胞增殖能力人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，以1×104孔的密度接種于24孔板培養(yǎng)。24 h后，每孔加入200μl的5 mg/μl的MTT的PBS溶液，37℃，5%二氧化碳孵育。4 h后，每孔加入100μl的二甲基亞砜，室溫慢速振搖15 min，以充分溶解結(jié)晶。酶標(biāo)儀560 nm測(cè)定各組的光密度值（optical density，OD）并繪制曲線。

表1　c-Met-shRNA序列

1.2.7Transwell檢測(cè)U251細(xì)胞侵襲能力以1× 109/L的密度將細(xì)胞接種于自帶基質(zhì)膠的Transwell小室上室，每室200μl；Transwell小室下室加入600μl含10%FBS、100 IU/L青霉素和100 mg/L鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基；37℃，5%二氧化碳孵育12 h，棉簽擦去靠近基底膜內(nèi)室的細(xì)胞，另一面的細(xì)胞經(jīng)10%甲醇固定30 min，PBS洗滌1次，結(jié)晶紫染色20 min，PBS洗滌1次，顯微鏡下觀察細(xì)胞并記數(shù)。

1.2.8細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)U251細(xì)胞遷移能力采用單層細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)U251細(xì)胞遷移能力。以2×105的密度將細(xì)胞接種于6孔板，融合達(dá)90%時(shí)，在培養(yǎng)板內(nèi)側(cè)底部沿直線劃痕，繼續(xù)孵育24 h。24 h后觀察細(xì)胞劃痕愈合情況。遷移能力=0 h劃痕距離-24 h劃痕距離。

1.2.9裸鼠體內(nèi)荷瘤實(shí)驗(yàn)收集培養(yǎng)的U251細(xì)胞，經(jīng)生理鹽水重懸；裸鼠腹部常規(guī)消毒后，皮下注射0.5ml重懸的U251細(xì)胞；每5 d觀察移植瘤的生長(zhǎng)情況，并測(cè)量瘤體大小。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)，多組間比較先用One-Way ANOVO方差分析，再用SNK檢驗(yàn)進(jìn)行組內(nèi)兩兩比較；計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。取雙側(cè)a=0.05為檢測(cè)水準(zhǔn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1靶向c-Met-shRNA構(gòu)建

構(gòu)建的重組質(zhì)粒c-Met-shRNA1，c-Met-shRNA 2和c-Met-shRNA3經(jīng)上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司測(cè)試證實(shí)構(gòu)建成功。

2.2靶向c-Met-shRNA轉(zhuǎn)染篩選

各組轉(zhuǎn)染效率分別為：未轉(zhuǎn)染組0.0%，空質(zhì)粒組75.3%，c-Met-shRNA1組85.8%；c-Met-shRNA2組71.2%，c-Met-shRNA3組67.4%，提示c-MetshRNA3的轉(zhuǎn)染效率最高，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。PCR檢測(cè)顯示，各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞c-MetmRNA表達(dá)均顯著低于未轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組，c-Met-shRNA1組（0.11± 0.02）較c-Met-shRNA2組（0.26±0.05）和c-MetshRNA3組（0.20±0.03）明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=13.500，P＜0.05；q=7.300，P＜0.05；q=4.380，P＜0.05）。Western blot檢測(cè)顯示，各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞c-Met蛋白表達(dá)均顯著低于未轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組，且c-Met-shRNA1組（0.21±0.05）較c-Met-shRNA2組（0.44±0.07）和c-Met-shRNA3組（0.34±0.06）明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=10.882，P＜0.05；q= 6.579，P＜0.05；q=3.719，P＜0.05）。提示c-Met-shRNA可沉默人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞c-Met基因和蛋白的表達(dá)，且以c-Met-shRNA1的沉默效果最好。見圖1。

圖1　PCR和Western blot檢測(cè)C-Met基因mRNA和蛋白質(zhì)的相對(duì)表達(dá)

2.3U251細(xì)胞增殖能力的影響

MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，從第24 h開始，c-MetshRNA1組OD值（0.21±0.02）明顯低于未轉(zhuǎn)染組（0.33±0.03）和空質(zhì)粒組（0.32±0.03），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.136，P＜0.05；q=7.675，P＜0.05；q=7.036，P＜0.05）。c-Met-shRNA1組第36 h（F=46.610，P＜0.05；q=10.776，P＜0.05；q=12.650，P＜0.05），48 h（F= 169.463，P＜0.05；q=23.426，P＜0.05；q=21.552，P＜0.05）和72 h（F=229.188，P＜0.05；q=25.548，P＜0.05；q=26.847，P＜0.05）的OD值均顯著低于未轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組。見圖2和表2。

流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞周期顯示，c-Met-shRNA1組G1期細(xì)胞比例（68.33%）顯著高于未轉(zhuǎn)染組（55.15%）和空質(zhì)粒組（56.71%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=40.833，P＜0.05）；而c-Met-shRNA1組S期細(xì)胞比例（10.85%）顯著高于未轉(zhuǎn)染組（30.62%）和空質(zhì)粒組（31.53%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=16.764，P＜0.05），見圖3。提示RNAi沉默c-Met基因可顯著抑制人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的增殖。

2.4U251細(xì)胞侵襲遷移能力的影響

Transwell檢測(cè)顯示，c-Met-shRNA1組穿膜細(xì)胞數(shù)目（10.98±3.21）顯著低于未轉(zhuǎn)染組（34.53± 4.31）和空質(zhì)粒組（33.79±4.27），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=34.240，P＜0.05；q=10.293，P＜0.05；q=9.970，P＜ 0.05），見圖4。提示RNAi沉默c-Met基因?qū)е氯四X膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的侵襲能力下降

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示，c-Met-shRNA1組細(xì)胞遷移距離顯著低于未轉(zhuǎn)染組和空白質(zhì)粒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=27.131，P＜0.05；q=9.312，P＜0.05；q=8.903，P＜0.05），見圖5。提示RNAi沉默c-Met基因?qū)е氯四X膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移能力下降。

2.5對(duì)裸鼠體內(nèi)成瘤的影響

裸鼠體內(nèi)荷瘤實(shí)驗(yàn)顯示，接種轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組細(xì)胞的裸鼠，10 d左右即形成明顯可見的腫瘤結(jié)節(jié)；而接種c-Met-shRNA1轉(zhuǎn)染細(xì)胞的裸鼠在15 d左右才形成腫瘤結(jié)節(jié)。腫瘤生長(zhǎng)曲線顯示，c-MetshRNA1組裸鼠腫瘤體積接種后的10 d（F=7.010，P＜0.05；q=4.511，P＜0.05；q=4.657，P＜0.05）、15 d（F=7.749，P＜0.05；q=4.767，P＜0.05；q=4.874，P＜0.05）、20 d（F=6.343，P＜0.05；q=4.361，P＜0.05；q=4.364，P＜0.05）、25 d（F=6.268，P＜0.05；q=4.316，P＜0.05；q=4.356，P＜0.05）和30 d（F=6.987，P＜0.05；q= 4.739，P＜0.05；q=4.398，P＜0.05），明顯小于同一時(shí)段的未轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組。見圖6。

圖2　MTT檢測(cè)c-Met-shRNA1對(duì)U251細(xì)胞增殖的影響

表2　各組不同時(shí)間點(diǎn)OD值 （±s）

表2　各組不同時(shí)間點(diǎn)OD值 （±s）

注與同一時(shí)期的未轉(zhuǎn)染組和空質(zhì)粒組比較，P＜0.05

圖3　流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)c-Met-shRNA1對(duì)U251細(xì)胞周期的影響

圖4　Transwell檢測(cè)c-Met-shRNA1對(duì)U251細(xì)胞侵襲能力的影響 （×400）

圖5　細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)c-Met-shRNA1對(duì)U251細(xì)胞遷移能力的影響 （×100）

圖6　裸鼠體內(nèi)成瘤生長(zhǎng)情況

3　討論

由于人腦膠質(zhì)瘤的惡性度高、預(yù)后差和死亡率高，因此，有效的診斷和治療對(duì)于延緩患者生命具有重要意義。大量研究證實(shí)，c-Met基因編碼的蛋白在人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤中高表達(dá)，與腦膠質(zhì)瘤的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，也是影響臨床治療效果的主要因素［8］。c-Met基因位于人類第七號(hào)染色體7q31，其編碼的產(chǎn)物蛋白是酪氨酸激酶受體（receptor tyrosine kinase，RTKs）家族成員之一，可以特異性識(shí)別并結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）［9］。HGF是由間質(zhì)細(xì)胞分泌的，研究發(fā)現(xiàn)它有促進(jìn)多種上皮細(xì)胞（包括腎小管細(xì)胞、腸道上皮細(xì)胞、乳腺上皮細(xì)胞和支氣管上皮細(xì)胞等）以及間質(zhì)細(xì)胞增殖和形態(tài)發(fā)生的功能，故而在胚胎發(fā)育、組織分化和促進(jìn)傷口愈合方面發(fā)揮重要作用［10-11］。然而在惡性腫瘤中，HGF與c-Met基因編碼的酪氨酸激酶受體特異性結(jié)合后，會(huì)引起c-Met酪氨酸自身磷酸化，激活c-Met受體酪氨酸激酶活性，并且為下游信號(hào)分子提供磷酸化區(qū)域，包括生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2（growth factor receptor bound protein-2，Grb-2），信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子3（signal transducer and activator of transcription-3，STAT-3），以及P85-磷脂酰肌醇-3激酶（P85-PI3 kinase，P85-PI3K）等，該信號(hào)分子進(jìn)一步誘發(fā)一系列信號(hào)傳導(dǎo)通路，最終傳至細(xì)胞核內(nèi)，介導(dǎo)c-Met基因激活導(dǎo)致的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移等生物學(xué)行為［12-13］。有研究證實(shí)，HGF/c-Met信號(hào)通路，通過(guò)上調(diào)腫瘤細(xì)胞中的纖溶酶原激活因子抑制因子1和尿激酶型纖溶酶原激活物等促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移［14］。CHU等［15-16］通過(guò)構(gòu)建shRNA干擾腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞，下調(diào)c-Met蛋白表達(dá)，可減慢甚至停止細(xì)胞的增殖周期，增加細(xì)胞凋亡，抑制機(jī)體對(duì)HGF刺激的反應(yīng)，提示或可通過(guò)特異性抑制HGF/c-Met信號(hào)通路達(dá)到治療腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤的目的。為了探討c-Met基因?qū)δX膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，本實(shí)驗(yàn)首先構(gòu)建了靶向c-Met基因的shRNA，并轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞，繼而以PCR和Western blot法篩選出可有效沉默c-Met基因的shRNA進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中shRNA干擾下調(diào)U251細(xì)胞中c-Met的表達(dá)，進(jìn)一步研究觀察U251細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力以及體內(nèi)成瘤能力的變化。MTT和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，下調(diào)c-Met后U251細(xì)胞的增殖受到明顯抑制；Transwell和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示下調(diào)c-Met明顯抑制U251細(xì)胞侵襲和遷移能力；裸鼠體內(nèi)荷瘤實(shí)驗(yàn)顯示，下調(diào)c-Met后，U251細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力受到抑制。綜上所述，RNAi沉默c-Met基因可有效抑制人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移以及體內(nèi)成瘤能力。

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（張蕾編輯）

Effect of RNAi silencingc-Metgene on proliferation and invasion ability of human gliomaU251cell

Tao Duan1，Ying-jiang Gu2，Biao Zhang3
（1.Department of Neurosurgery，the First People's Hospital of Yibin，Yibin，Sichuan 644000，China；2.Department of Neurosurgery，Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine，Southwest Medical University，Luzhou，Sichuan 646000，China；3.Department of Neurosurgery，the First Affiliated Dazu Hospital，Chongqing Medical University，Chongqing 402360，China）

Objective To investigate the effect of RNAi silencingc-Metgene on the proliferation and invasion ability of human gliomaU251cell.Methods Three kinds of short hairpin RNA（shRNA）targetingc-Metgene were constructed.All of theshRNAswere transfected intoU251cell by liposome transfection，in order to screen out the stable expression cell line.The expression of c-Met inU251cell was detected by PCR and Western Blot，in order to screen out the effective shRNA.The proliferation ofU251cell was detected by MTT assay and flow cytometry.The invasion and migration ofU251cell was detected by transwell assay and cell scratch.Results The shRNA targeting c-Metgene was successful constructed.The expression ofc-Metwas significantly decreased after c-Met gene was silenced，the difference was statistically significant（P＜0.05）.The proliferation，invasion，migration and tumorigenicity ofU251cell was inhibited after silencingc-Metgene，the difference was statistically significant（P＜0.05）. Conclusions RNAi silencingc-Metgene can effectively inhibit the proliferation，invasion，migration and tumorigenicity of human glioma U251 cell.

RNAi silencing；c-Met；human glioma cell U251

R-332；R739.41

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.16.003

1005-8982（2016）16-0012-06

2015-11-12

顧應(yīng)江，E-mail：asdd1688@126.com；Tel：15883048550