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    水稻土和菜田添加碳氮后的氣態(tài)產(chǎn)物排放動態(tài)

    2016-08-24 00:44:38王海飛朱高荻魏歡歡何彥芳巨曉棠
    植物營養(yǎng)與肥料學報 2016年2期
    關鍵詞:銨態(tài)氮硝態(tài)菜地

    劉 燕, 王海飛, 朱高荻, 魏歡歡, 何彥芳, 高 兵, 蘇 芳, 巨曉棠

    (中國農業(yè)大學資源與環(huán)境學院,北京 100193; 環(huán)境保護部環(huán)境工程評估中心,北京 100012)

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    水稻土和菜田添加碳氮后的氣態(tài)產(chǎn)物排放動態(tài)

    劉 燕, 王海飛, 朱高荻, 魏歡歡, 何彥芳, 高 兵, 蘇 芳, 巨曉棠*

    (中國農業(yè)大學資源與環(huán)境學院,北京 100193; 環(huán)境保護部環(huán)境工程評估中心,北京 100012)

    菜地和稻田; N2O排放; 硝化作用; 反硝化作用

    本研究選取長江中游金井河小流域的典型酸性紅壤、不同土地利用方式的菜地和稻田土壤為研究對象,采用全自動連續(xù)在線培養(yǎng)體系(Robot系統(tǒng)),在控制溫度和土壤水分條件下,設置不同碳氮添加處理,探明金井河小流域不同土地利用方式下N2O及其他氣體的產(chǎn)生機制、影響因素,為制定不同土地利用方式溫室氣體減排措施提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1土壤樣品采集點概況

    表1 供試土壤部分基本性質

    1.2試驗設計與方法

    試驗1: 菜田和稻田好氣培養(yǎng)。設不施氮對照(CK)、添加銨態(tài)氮 40 mg/kg (AN)、AN+1%硝化抑制劑(AN+NI)、添加硝態(tài)氮40 mg/kg (NN)、NN+1%葡萄糖(NN+C)、缺氧條件下NN+1%葡萄糖(NN+C-O2)6個處理,每個處理3次重復,隨機排列。

    試驗2: 稻田土壤淹水培養(yǎng)。設不施氮對照(CK)、AN、AN+NI、AN+1%秸稈(AN+C)、缺氧條件下AN+1%的葡萄糖(AN+C-O2)、NN、NN+C、缺氧條件下NN+C-O28個處理,每個處理3次重復,隨機排列。

    銨態(tài)氮采用硫酸銨,硝態(tài)氮采用硝酸鈣,硝化抑制劑為二甲基吡唑磷酸鹽(DMPP),碳源為葡萄糖和晚稻秸稈。秸稈用球磨儀磨至0.15 mm后混入土壤,全碳含量為324.0 g/kg,全氮含量為12.0 g/kg。兩個試驗均采用全自動在線培養(yǎng)檢測體系(Robot系統(tǒng))培養(yǎng)測定,培養(yǎng)溫度設為20℃,土壤水分含量設置在70%WFPS (土壤孔隙含水量,Water filled pore space),培養(yǎng)周期為15天。

    將采集的0—20 cm新鮮土壤樣品過2 mm篩,撿出可見石頭、植物根系和殘渣,儲藏在4℃冰箱中,試驗前在恒溫培養(yǎng)室(20℃)內預培養(yǎng)一周。隨后進行正式培養(yǎng)試驗,將去離子水或肥料溶液裝入50 mL小噴壺并均勻噴灑于試驗土壤中(試驗2的AN+C處理是先將稻田秸稈與土壤混合均勻,再將肥料溶液噴灑至上),取混合后的新鮮土樣(試驗1相當于烘干土20 g; 試驗2相當于烘干土10 g,使水土比為2 ∶1)裝入120 mL的血清瓶中。用橡膠塞和鋁環(huán)將瓶口密封。用充氣抽真空清洗系統(tǒng)(帥恩科技,北京)抽真空后,充滿He,反復沖洗3次。對于好氣培養(yǎng)處理,在最后一次抽真空后向其中注入氦氣和氧氣的混合氣體,氧濃度為21%。最后用裝少量水的注射器平衡瓶內的氣壓。隨后放在20℃的恒溫水浴中,啟動監(jiān)測系統(tǒng),在計算機中設定各參數(shù)并編寫程序語言,由全自動在線培養(yǎng)體系(Robot系統(tǒng),挪威生命科學大學研發(fā))自動進樣[16],測定瓶內N2O、O2、CO2、NO、CH4和N2的濃度,儀器測定原理見1.3。按照試驗要求,試驗1監(jiān)測了O2、NO、N2O和CH4四種氣體,試驗2監(jiān)測了O2、NO、N2O、CH4和N2五種氣體。在此期間Robot系統(tǒng)每8 h持續(xù)測定記錄相關氣體濃度的變化情況。

    1.3氣體的采集和測定

    Robot系統(tǒng)是由頂空自動采樣器(CTC GC-Pal)、雙向旋轉蠕動泵(Gilson Minipuls 3)、氣相色譜儀(Agilent GC 7890A,美國)、氮氧化物分析儀(TAPI Model 200E)、恒溫水浴槽、及計算機(PC)等構成,其中氣相色譜內安裝有3個檢測器(ECD、TCD、FID)和4根分離柱(填充柱和毛細柱各2根),能夠分離和測定N2O(ECD、TCD)、N2(TCD)、O2(TCD)和CH4(FID),而NO是由氮氧化物分析儀測定[16]。具體的測定原理為: PC程序(Python)命令自動采樣器與雙向蠕動泵每8小時采集血清瓶頂空氣體并實現(xiàn)氣壓補充(注入相等體積的He),Python程序確保自動采樣器以圓形環(huán)路軌跡在血清瓶橡膠塞的不同位置采氣,從而最小化N2的泄漏。在蠕動泵的配合下自動采樣器從采集瓶中采集1 mL氣體(同時補充1 mL氦氣),送至氣相色譜和氮氧化物分析儀中分析測定,每針氣體分析時間為5.5 min。同時Python程序在PC文件中自動記錄相關數(shù)據(jù),所有氣體被程序存于獨立的文件夾中。試驗結束后,運用Robot系統(tǒng)專門的程序軟件和數(shù)據(jù)表格,自動分析氣體濃度,采用Robot標準表格換算為氣體的累積排放量,具體算法見1.5。每次試驗除了樣品外,還設置六個標氣瓶(兩個He瓶、高標N2O瓶、低標N2O瓶、NO標氣瓶和空氣瓶)測定氣體滲透率、稀釋效應及定量氣體。關于該系統(tǒng)更詳細介紹可參考Molstad 等[16]發(fā)表的文獻,包括用具體試驗驗證儀器精密度、靈敏度等特征。

    1.4土壤樣品測定

    試驗均在加入碳氮等物質后隨即和第15天測定土壤無機氮和含水量。稱取混勻的新鮮土壤樣品12.00 g(試驗1)或6.00 g(試驗2)于振蕩瓶中,加入50 mL(試驗1)或25 mL(試驗2)1 mol/L的優(yōu)級純KCl溶液,在180 r/min下振蕩1 h,用定性無銨濾紙將濾液過濾至10 mL 的離心管中,保存在-20℃冰箱中,用三通道連續(xù)流動分析儀(AA3)測定濾液中的硝態(tài)氮和銨態(tài)氮含量,同時測定土壤含水量。

    1.5數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析

    采用Microsoft Excel 2010進行數(shù)據(jù)處理,SPSS17.0進行P<0.05水平的顯著性檢驗(檢驗各處理氣態(tài)產(chǎn)物累積排放量和無機氮濃度變化的差異性)和Sigmaplot12.5(Systat Software Inc,印度班加羅爾)繪圖。

    Robot標準表格涉及系統(tǒng)氣體滲透率和稀釋效應計算。稀釋比例(Df)算法有兩種: 一是以采樣次數(shù)為橫坐標(X),以積分面積為縱坐標(Y)作圖,用Y=AeBX進行擬合,1-eB為每次稀釋的降低比例(每次回注He后濃度較回注前濃度的降低比例,即(A-AeB)/A); 二是分別計算[(Yn-Yn-1)/Yn-1],取平均值作為稀釋損失(1-eB)。氣體滲透率(Lf)算法是在測得Df之后,以Y0=Y0measured為起點依次計算(Yn-Yn-1)-Yn-1×(1-eB)=Lf,計算得Lf均值用于后續(xù)計算。此計算值為120 mL血清瓶內的氣體滲透濃度,后續(xù)樣品濃度計算時需要糾正血清瓶頂空體積(Lf×120/Vhs)。采用Robot標準表格換算所得的氣體累積排放量為實際濃度,需要在實測濃度的基礎上計算,計算公式: Yn實際=Yn實測+稀釋濃度損失(=Yn-1實測×Df)-Lf。其中稀釋濃度損失與上一實測濃度(Yn-1實測)有關; Df和Lf均需進行體積糾正(Lf×120/Vhs; Df×120/Vhs)。由Robot標準表格換算所得氣體累積排放量單位是ppmv,根據(jù)公式F=[M×C×(V-m/ρb)×10-3]/(Vm×m)將單位換算為mg/kg,其中F為氣體累積排放量(mg/kg),M為氣體摩爾質量(g/mol),C為瓶中氣體累積排放量(ppmv),V為血清瓶體積120 mL,m為瓶內干土重量(g),ρb為土壤容重(g/cm3),Vm為氣體摩爾體積,標準狀況下為22.4 L/mol。本文的氣體累積排放量是指培養(yǎng)期間培養(yǎng)瓶頂空累積量,包括了開始上機前很短時間已經(jīng)累積的氣體量。通過抽真空注氦氣過程盡量除盡瓶中本身存在的大量氮氣,但是由于抽洗過程本身的誤差導致每個瓶中N2殘留量不盡相同,為了消除重復間因起始量不同引起的誤差,在計算時減去起始的殘留量。其他氣體在抽真空注氦氣過程中已經(jīng)歸為零,現(xiàn)在圖上不是零的原因為: 從抽真空注氦氣過程到最后的上機測定,培養(yǎng)瓶大約經(jīng)過了3 h產(chǎn)生的氣體量,但這些不會影響各種氣體產(chǎn)生動態(tài)和機制。

    2 結果與分析

    2.1菜地土壤好氣培養(yǎng)氣態(tài)產(chǎn)物動態(tài)及N2O產(chǎn)生機制

    試驗1菜地不同碳氮添加氣態(tài)產(chǎn)物動態(tài)和累積排放量如圖1和表2所示。銨態(tài)氮(AN)添加后N2O排放量是添加硝態(tài)氮(NN)排放量的十多倍,說明硝化作用對N2O的貢獻較大。添加銨態(tài)氮+硝化抑制劑DMPP(AN+NI)后,N2O的排放量降低到對照水平,表明DMPP對酸性紅壤N2O有顯著抑制作用。由圖1還可看出,添加硝態(tài)氮(NN)后,培養(yǎng)前期有少量N2O釋放,對應NO減少,可能與NO被還原為N2O的反硝化過程有關。添加硝態(tài)氮+葡萄糖(NN+C)后,隨著培養(yǎng)時間的延長,在氧氣幾乎耗盡的同時伴隨有N2O及NO大量排放和累積。由表2可看出,N2O和NO累積排放量較其他處理有顯著差異,說明此時反硝化作用占主導。在硝態(tài)氮+葡萄糖同時厭氧(NN+C-O2)處理條件下,由于提供了充足碳源和厭氧環(huán)境,先出現(xiàn)一個小的NO累積峰(截圖所示),隨即出現(xiàn)N2O的累積排放峰,N2O排放減少后可能是N2的大量排放,這很好的響應了反硝化的趨勢,此時各氣體累積排放量與其他處理都有顯著差異。從培養(yǎng)前后土壤無機氮的變化可進一步證明反硝化作用的發(fā)生(圖2)。這說明酸性紅壤菜地受到低碳、缺水的影響,平常狀況下抑制了反硝化作用的發(fā)生。該處理在培養(yǎng)后期隨著土壤中的O2被耗盡,出現(xiàn)完全厭氧條件,伴隨CH4的累積排放峰,此時硝態(tài)氮含量幾乎為零。

    圖1 菜地各處理N2O、NO、CH4累積排放量和O2濃度隨時間的變化Fig.1 The variation of accumulated N2O, NO, CH4 emissions and O2 concentration in different treatments in vegetable soil

    從菜地各處理培養(yǎng)前后無機氮的變化看(圖2),CK、AN、NN和AN+NI處理無機氮略有增加,可能是有機氮的礦化引起。NN+C處理無機氮總含量有所降低,可能是轉化為氣態(tài)產(chǎn)物損失,也可能是被微生物固持。NN+C-O2處理總的無機氮含量明顯降低,并且主要成分為銨態(tài)氮,這主要是反硝化作用的強烈發(fā)生導致的。

    2.2稻田好氣條件下土壤氣態(tài)產(chǎn)物動態(tài)及N2O產(chǎn)生機制

    表2 菜地各處理氣體累積排放量及培養(yǎng)前后無機氮變化量(mg/kg)

    注(Note): 數(shù)據(jù)為3個重復的平均值±標準誤差Data in the table are average of triplicates±standard error; Δ表示在培養(yǎng)階段末期無機氮濃度與加入碳氮底物后培養(yǎng)初期的濃度之差Δ represents the difference of inorganic nitrogen concentration at the end of the incubation period and its concentration in the initial incubation period with carbon and nitrogen substrates being added; 不同小寫字母表示兩個處理間差異顯著Different small letters indicate significant difference (P<0.05)

    圖2 菜地各處理、含量動態(tài)變化Fig.different treatments in vegetable soil

    稻田好氣條件下各處理的無機氮變化如圖4所示,CK、AN、AN + NI和NN處理無機氮增加可能是有機氮的礦化引起。NN+C、NN+C-O2處理總無機氮有所降低,對應N2O和NO大量排放,并且其無機氮以銨態(tài)氮形式存在,這主要是因為反硝化作用的強烈進行所致。

    2.3稻田淹水條件下氣態(tài)產(chǎn)物動態(tài)及N2O產(chǎn)生機制

    稻田淹水條件下各碳氮添加處理的氣態(tài)產(chǎn)物動態(tài)和累積排放量如圖5和表4所示(試驗2)。淹水稻田土壤氣體變化與稻田好氣條件下有很大差別。稻田淹水條件下銨態(tài)氮(AN)、銨態(tài)氮+抑制劑(AN+NI)、銨態(tài)氮+秸稈(AN+C)以及缺氧時銨態(tài)氮+葡萄糖(AN+C-O2)處理與CK相比,均無N2O和NO的累積,此時N2是主要的產(chǎn)物,說明硝化作用很弱,反硝化作用增強。AN+C-O2處理中有大量CH4產(chǎn)生,與其他處理呈顯著差異(表4),表明在厭氧條件下提供碳源后,產(chǎn)甲烷菌活性增強。加入硝態(tài)氮(NN)后,出現(xiàn)明顯的N2O累積,隨后N2O含量趨于穩(wěn)定,伴隨N2的產(chǎn)生,該處理N2O和NO排放量較之前處理都有顯著差異(表4),說明此時反硝化作用強烈發(fā)生。添加硝態(tài)氮+碳源(NN+C)后,N2O大量排放和累積,隨著O2的消耗,出現(xiàn)厭氧狀況,N2O開始發(fā)生反硝化作用產(chǎn)生N2,并伴隨一定的CH4排放和累積。在缺氧條件下添加硝態(tài)氮+葡萄糖(NN+C-O2)處理先出現(xiàn)一個小的NO累積峰,隨后出現(xiàn)明顯的N2O排放高峰,而后N2O開始減少,對應大量N2累積,并伴隨CH4的大量產(chǎn)生,表明此時反硝化作用強烈,而且此時硝態(tài)氮含量幾乎為零。

    圖4 稻田各處理、動態(tài)含量變化Fig.different treatments in paddy soil

    表3 稻田各處理氣體累積排放量及培養(yǎng)前后無機氮變化(mg/kg)

    注(Note): 數(shù)據(jù)為3個重復的平均值±標準誤差Data in the table are average of triplicates±standard error; Δ表示在培養(yǎng)階段末期無機氮濃度與加入碳氮底物后培養(yǎng)初期的濃度之差Δ represents the difference of inorganic nitrogen concentration at the end of the incubation period and its concentration in the initial incubation period with carbon and nitrogen substrates being added; 數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示兩個處理間差異顯著Values followed by different small letters indicate significant difference (P<0.05).

    圖5 稻田淹水條件下各處理N2O、NO、N2、CO2、CH4累積排放量和O2濃度隨時間變化Fig.5 The variation of accumulated N2O, NO, N2, CO2, CH4 emissions and O2concentration in different treatments in the flooded paddy soil

    處理TreatmentNON2OCH4N2ΔNH+4ΔNO-3CK 0.01±0.02b0.03±0.005b0.04±0.006c0.21±0.06c7.13±1.96a-1.38±0.36aAN-0.006±0.01b0.02±0.001b0.07±0.006c0.07±0.02c-14.43±7.45bc-1.37±0.24aAN+C-0.002±0.02b0.03±0.01b0.05±0.000c0.21±0.01c-20.89±6.02c-0.84±0.95aAN+NI0.004±0.001b0.18±0.000b0.04±0.003c1.75±0.30a-13.28±3.38bc-1.33±0.28aAN+C-O20.004±0.008b0.001±0.000b233.33±0.58a0.05±0.003c-8.04±4.11b-1.48±0.18aNN 0.04±0.02a9.82±2.74a0.08±0.05c0.89±0.06b11.12±7.16a-24.43±6.17bNN+C 0.02±0.006ab1.36±0.31b1.77±0.30c0.19±0.002c-16.75±3.11bc-40.66±0.75cNN+C-O2 0.04±0.02a0.66±0.29b141.33±21.50b0.49±0.03bc4.16±2.72a-41.49±0.01c

    注Note: 數(shù)據(jù)為3個重復的平均值±標準誤差Data in the table are average of triplicates±standard error; Δ表示在培養(yǎng)階段末期無機氮濃度與加入碳氮底物后培養(yǎng)初期的濃度之差Δ represents the difference of inorganic nitrogen concentration at the end of the incubation period and its concentration in the initial incubation period with carbon and nitrogen substrates being added; 數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示兩個處理間差異顯著Values followed by different small letters indicate significant difference (P<0.05).

    圖6 稻田淹水條件下各處理、含量動態(tài)變化Fig.different treatments in the flooded paddy soil

    3 討論

    3.1菜田土壤硝化-反硝化機制

    菜地土壤中,好氣培養(yǎng)初期由于加入銨態(tài)氮,硝化作用貢獻了大量的N2O的排放,添加硝態(tài)氮后N2O排放量明顯小于銨態(tài)氮處理,說明反硝化對其貢獻很小,這與閻宏亮等[20]的研究結果類似。Ju等[21]研究了半濕潤溫帶季風氣候條件下N2O排放機理,結果表明高累積硝酸鹽條件下,硝化過程仍是N2O排放的主要途徑,這是因為旱地土壤水分狀況和土壤有機碳限制了反硝化作用的進行。本研究菜地酸性紅壤受到低碳、較低含水量的影響,反硝化受到了抑制。當提供充足的碳源和厭氧條件,出現(xiàn)N2O和NO的大量排放,說明易氧化態(tài)的有機碳能夠促進酸性紅壤反硝化N2O的產(chǎn)生[22],這與前人的研究結果[21, 23-24]一致。有機碳含量的高低和有效性對反硝化強度至關重要,它既能夠為反硝化微生物提供電子供體和能源,又能夠被好氧分解,有利于形成土壤厭氧微域,決定土壤反硝化作用的潛力。

    3.2稻田土壤的硝化-反硝化機制

    4 結論

    1)不同土地利用方式土壤N2O產(chǎn)生機制不同,菜地土壤N2O主要來自于硝化作用,好氣稻田和淹水稻田N2O主要來源于反硝化作用。

    2)由于缺少充足的碳源和厭氧環(huán)境,酸性紅壤菜地和稻田好氣條件下土壤反硝化作用受到限制。當提供充足的碳源和厭氧環(huán)境,其反硝化作用強烈發(fā)生。

    3)反硝化產(chǎn)物組成、產(chǎn)物累積量及出峰順序與碳源和氧氣濃度有關。

    4)淹水稻田添加碳源和氮源后,N2為主要產(chǎn)物; 只添加硝態(tài)氮,N2O成為主要氣態(tài)產(chǎn)物。

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    Dynamics of gaseous production after addition of carbon and nitrogen in paddy and vegetable soils

    LIU Yan, WANG Hai-fei, ZHU Gao-di, WEI Huan-huan, HE Yan-fang, GAO Bing, SU Fang, JU Xiao-tang*

    (CollegeofResourcesandEnvironmentalSciences,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100193,China;AppraisalCenterforEnvironment&Engineering,MinistryofEnvironmentalProtection,Beijing100012,China)

    vegetable garden and paddy field; N2O emission; nitrification; denitrification

    2014-12-17接受日期: 2015-03-06網(wǎng)絡出版日期: 2015-10-16

    國家973項目(2012CB417105);國家自然科學基金重點項目(41471190)資助。

    劉燕(1991—),女,青海民和人,碩士研究生,主要從事農田土壤N2O產(chǎn)生機制方面的研究。E-mail: liuycau@163.com

    Tel: 010-62733459, E-mail: juxt@cau.edu.cn

    S143.1; X171

    A

    1008-505X(2016)02-0326-11

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