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    葉爾羌高原鰍“腸積水”病因調(diào)查及防治措施

    2016-08-23 06:21:03雷曼紅姜仁軍陳生熬
    水產(chǎn)養(yǎng)殖 2016年6期
    關(guān)鍵詞:胰臟塔里木瓊脂

    雷曼紅,姜仁軍,陳生熬

    (1.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,新疆 阿拉爾 843300;2.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,新疆 阿拉爾 843300)

    葉爾羌高原鰍“腸積水”病因調(diào)查及防治措施

    雷曼紅1,姜仁軍2,陳生熬1

    (1.塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,新疆阿拉爾843300;2.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,新疆阿拉爾843300)

    doi:10.3969/j.issn.1004-2091.2016.06.017

    葉爾羌高原 鰍 Triplophysa(Hedinichthgs)yarkandensis(Day),屬鯉形目(Cyprinidformes),鰍科(Cobitidae),高原鰍屬(Triplophysa),俗稱“狗頭魚(yú)”,廣泛分布于塔里木河流域,因其肉質(zhì)細(xì)膩、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,受到廣大消費(fèi)者的歡迎。由于資源銳減,近年來(lái),有關(guān)人員從野外捕撈野生葉爾羌高原鰍進(jìn)行馴養(yǎng)。人工養(yǎng)殖條件下,該魚(yú)夏、秋季常暴發(fā)“腸積水”病,該病發(fā)病快,病死率高,幾乎為100%,給生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的損失。2014年,筆者項(xiàng)目組對(duì)該病從病原菌的分離鑒定、疾病防治措施等方面進(jìn)行了研究,以期為葉爾羌高原鰍大規(guī)模人工養(yǎng)殖的病害防治提供一定的理論指導(dǎo)。

    1 材料及方法

    1.1材料

    瀕死的葉爾羌高原鰍,來(lái)自塔里木大學(xué)水產(chǎn)試驗(yàn)站,體長(zhǎng)10~20 cm;健康的葉爾羌高原鰍為來(lái)自塔河的野生葉爾羌高原鰍,體長(zhǎng)10~15 cm。

    1.2癥狀觀察

    取瀕臨死亡的病魚(yú)數(shù)尾進(jìn)行體表及體內(nèi)病癥觀察,以確定該病的典型癥狀。

    1.3病原的分離與鑒定

    1.3.1病毒學(xué)試驗(yàn)選取瀕死高原鰍肝胰臟,加l mL生理鹽水,在研缽中進(jìn)行研磨,加入青、鏈霉素溶液,作用15 min后,4 000 r/min離心10 min,之后取上清液,注射10尾健康的高原鰍,每尾0.1 mL,然后飼養(yǎng)在盛有50 L水的魚(yú)缸中,觀察7 d。

    1.3.2細(xì)菌的分離選取有典型病癥的魚(yú),用70%的酒精擦拭體表,無(wú)菌操作取其肝胰臟、腎臟,于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和兔血瓊脂平板上劃線分離,28℃恒溫培養(yǎng)24 h后取優(yōu)勢(shì)菌進(jìn)行純化,最后轉(zhuǎn)接到兔血瓊脂平板上培養(yǎng)。

    1.3.3回染試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)用魚(yú)為體長(zhǎng)10~15 cm的健康無(wú)傷的葉爾羌高原鰍,從塔里木河捕撈,在魚(yú)缸飼養(yǎng)30 d后進(jìn)行回染試驗(yàn),設(shè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組。每組實(shí)驗(yàn)魚(yú)各10尾,實(shí)驗(yàn)水溫28℃。

    用無(wú)菌生理鹽水清洗分離菌株的菌苔,用麥?zhǔn)媳葷岱y(cè)定并調(diào)節(jié)菌懸液濃度為6×108cells/mL,然后對(duì)高原鰍進(jìn)行腹腔注射,每尾注射0.1 mL;對(duì)照組注射相同劑量的無(wú)菌生理鹽水。連續(xù)7 d觀察魚(yú)的發(fā)病癥狀及死亡情況,發(fā)現(xiàn)死魚(yú)及時(shí)撈出,檢查其體表及內(nèi)臟器官的病變情況,同時(shí)做細(xì)菌分離。1.3.4病原菌鑒定將純化的病原菌株置于兔血瓊脂平板上培養(yǎng),于28℃培養(yǎng)24 h,觀察菌落特征,然后將病原菌株接種于鮮血瓊脂平板上,28℃條件下培養(yǎng)24 h,挑取單菌落混于生理鹽水中,用可見(jiàn)-紫外分光光度計(jì)測(cè)量并配成0.5×108cells/mL的菌懸液后,利用全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)VITEKAMS儀、革蘭陰性桿菌鑒定卡(GNI)進(jìn)行鑒定。

    1.3.5藥敏試驗(yàn)用涂布法接種菌株,然后將藥敏紙片(購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司)貼在培養(yǎng)基上,28℃條件下培養(yǎng)24 h后,測(cè)定抑菌圈直徑,根據(jù)《現(xiàn)代診斷學(xué)手冊(cè)》標(biāo)準(zhǔn),判斷致病菌株對(duì)藥物的敏感程度。

    2 結(jié)果

    2.1癥狀

    肉眼觀察:病魚(yú)腹部異常膨大,腹部?jī)蓚?cè)有點(diǎn)狀出血,鰓部組織、體表黏液明顯增多。解剖發(fā)現(xiàn):病魚(yú)腹腔中沒(méi)有水,即不是“腹水病”。腸道明顯鼓脹,充滿大量淡黃色積水,腸壁很薄,伴有少量氣體,大多數(shù)魚(yú)腸道內(nèi)沒(méi)有食物,腸壁明顯充血。肝胰臟呈磚紅色,具淤血斑;腎充血、出血;腹腔內(nèi)基本上看不到脂肪。

    2.2病毒學(xué)試驗(yàn)結(jié)果

    將10尾注射了滅菌組織懸液的葉爾羌高原鰍飼養(yǎng)兩周,無(wú)一發(fā)病,也無(wú)其他異常,說(shuō)明此病不是由病毒引起的。

    2.3菌落形態(tài)

    從病魚(yú)肝胰臟中分別分離到2株優(yōu)勢(shì)菌XJ-I 和XJ-II。菌株XJ-I和XJ-II在血瓊脂平板上培養(yǎng)24 h后均形成圓形、邊緣整齊、表面光滑、隆起、有光澤、不易挑取的菌落。

    2.4人工回歸感染

    將分離純化的菌株XJ-I和XJ-II進(jìn)行人工回歸感染實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明,菌株XJ-I和XJ-II對(duì)葉爾羌高原鰍均具有致病作用(表1),而且實(shí)驗(yàn)致死魚(yú)體死亡癥狀與自然發(fā)病魚(yú)體死亡癥狀基本相同。另外,從人工感染的病魚(yú)的肝胰臟中又分離到與實(shí)驗(yàn)菌株形態(tài)及菌落特征一致的菌株。由此表明,該病是由菌株XJ-I和XJ-II感染引起的。見(jiàn)表1。

    2.5病原菌鑒定

    表1 細(xì)菌的形態(tài)、菌落特征和致死情況

    對(duì)供試菌株進(jìn)行革蘭染色、顯微鏡觀察及氧化發(fā)酵試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)2株菌均為革蘭陰性桿菌,無(wú)莢膜,無(wú)芽孢。氧化酶、觸酶陽(yáng)性,葡萄糖發(fā)酵型,經(jīng)全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)VITEK-AMS儀、革蘭陰性桿菌鑒定卡(GNI)鑒定,2株菌均屬于嗜水氣單胞菌群,菌株XJ-I和XJ-II與《伯杰氏細(xì)菌手冊(cè)》上描述的嗜水氣單胞菌模式菌株(Aeramonas hydrophila)的生理生化形狀基本一致(表2)。

    2.6藥敏實(shí)驗(yàn)

    菌株對(duì)16種藥物的藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。在16種藥物中,菌株對(duì)新霉素、慶大霉素、奈啶酸、氟哌酸、恩諾沙星、磺胺對(duì)甲氧嘧啶6種藥物高度敏感。

    3 討論

    目前,尚無(wú)葉爾羌高原鰍“腸積水”病的相關(guān)資料報(bào)道。葉爾羌高原鰍生活在淡水中,體液滲透壓大于體外養(yǎng)殖水體滲透壓,為了平衡體內(nèi)外滲透壓,體外水分子通過(guò)鰓、皮膚進(jìn)入體內(nèi),而不是口腔吞咽的環(huán)境中的水分子進(jìn)入腸道,所以,腸道內(nèi)的積水應(yīng)該來(lái)自葉爾羌高原鰍機(jī)體的組織液。筆者認(rèn)為有如下幾個(gè)方面的原因引起:①養(yǎng)殖水溫升高,葉爾羌高原鰍機(jī)體免疫力下降,條件致病菌有可能乘機(jī)而入。該病的發(fā)病時(shí)間呈現(xiàn)明顯的季節(jié)性,通常集中在水溫25℃以上的夏、秋季發(fā)病,而在水溫較低的冬、春季節(jié),幾乎無(wú)該病的發(fā)生。由于葉爾羌高原鰍是冷水性魚(yú)類,水溫可能是誘導(dǎo)該病發(fā)生比較重要的因素之一,可能是水溫升高造成葉爾羌高原鰍魚(yú)體新陳代謝紊亂,導(dǎo)致胃、腸的蠕動(dòng)頻率和蠕動(dòng)幅度降低,腸中的水分不能及時(shí)排出體外從而形成積水。由于消化道積水的存在,引起攝食量降低,所以,患病的葉爾羌高原鰍消化道中食物很少或沒(méi)有,這使病情更加惡化,免疫力下降。嗜水氣單胞菌是典型的條件致病菌,一般在魚(yú)體免疫力下降時(shí)才會(huì)感染發(fā)病。②養(yǎng)殖密度高,水中的溶解氧偏低,魚(yú)體機(jī)能下降。葉爾羌高原鰍是需氧較高的魚(yú)類,溶氧一般不能低于5 mg/L。據(jù)觀察,密度高的養(yǎng)殖池的“腸積水”病就較為嚴(yán)重,而密度低的魚(yú)池發(fā)病率較低。因此,養(yǎng)殖密度也可能是影響該病發(fā)生的重要因素之一。

    表2 VITEK-AMS儀鑒定結(jié)果

    表3 菌株XJ-I和XJ-II的藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    關(guān)于葉爾羌高原鰍的“腸積水”病的致病機(jī)制有待進(jìn)一步研究。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)葉爾羌高原鰍病原微生物的研究、可供參考的文獻(xiàn)資料甚少,根據(jù)筆者對(duì)葉爾羌高原鰍長(zhǎng)期養(yǎng)殖的經(jīng)驗(yàn),總結(jié)出以下綜合防治措施,供參考。

    高溫季節(jié)采取必要的降溫措施,在魚(yú)池上方蓋遮陽(yáng)網(wǎng)。同時(shí),在魚(yú)池種植空心菜、水葫蘆等水生植物,改善水質(zhì)。

    定期往魚(yú)池潑灑芽孢桿菌等微生物制劑,促進(jìn)魚(yú)池的有機(jī)物分解。同時(shí),在飼料中定期拌喂復(fù)合維生素、乳酸菌和酵母菌,提高高原鰍的體質(zhì),促進(jìn)餌料的消化吸收。

    國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31360635);新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)基本科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013BA005);新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(201505)

    (2015-11-17)

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