Cripto—1介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在卵巢漿液性腺癌形成中的作用

步曉琳

【摘要】 目的 檢測Cripto-1、E-鈣粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）在卵巢腫瘤中的表達， 探討卵巢漿液性腺癌的發(fā)生發(fā)展機制， 以及Cripto-1介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）在其中的作用。方法 采用免疫組化SP法檢測Cripto-1、E-cadherin、Vimentin在60例卵巢漿液性腺癌、30例卵巢交界性漿液性腫瘤、20例卵巢漿液性腺瘤中的表達， 并探討其表達程度的相關(guān)性及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果 Cripto-1在卵巢漿液性腺瘤中的表達20.0%低于漿液性腺癌76.7%和交界性漿液性腫瘤56.7%， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， E-cadherin在卵巢漿液性腺瘤中的表達90.0%高于漿液性腺癌35.0%和交界性漿液性腫瘤53.3%， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Cripto-1、Vimentin在卵巢漿液性腺癌中的表達與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）；E-cadherin的表達與組織學(xué)分級有關(guān)（P<0.05）， 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05）。在卵巢漿液性腺癌中Cripto-1與E-cadherin的表達呈負(fù)相關(guān)（r=-0.81， P<0.05）， Cripto-1與Vimentin的表達呈正相關(guān)（r=0.42， P<0.05）。結(jié)論 在卵巢漿液性腺癌中Cripto-1、Vimentin表達上調(diào)， E-cadherin表達下調(diào)， 提示Cripto-1介導(dǎo)的EMT可能在卵巢漿液性腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過程中起作用。

【關(guān)鍵詞】 Cripto-1；E-鈣粘蛋白；波形蛋白；卵巢漿液性腺癌；上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.22.001

Effect by Cripto-1 mediated epithelial-mesenchymal transition in formation of ovarian serous adenocarcinoma BU Xiao-lin. Department of Pathology， Xinglin Branch of First Affiliated Hospital of Xiamen University， Xiamen 361000， China

【Abstract】 Objective To detect expression of Cripto-1， E-cadherin and Vimentin in ovarian tumor， and to investigate development mechanism of ovarian serous adenocarcinoma and effect by Cripto-1 mediated epithelial-mesenchymal transition （EMT）. Methods Immunohistochemical SP test was applied to detect expression of Cripto-1， E-cadherin and Vimentin in 60 cases with ovarian serous adenocarcinoma， 30 cases with ovarian borderline serous tumor and 20 cases with ovarian serous adenoma. Investigation was made on relationship between expression degree and clinical pathological parameters. Results Expression of Cripto-1 was lower in ovarian serous adenoma as 20.0% than 76.7% in ovarian serous adenocarcinoma and 56.7% in ovarian borderline serous tumor， their difference had statistical significance （P<0.05）. Expression of E-cadherin was higher in ovarian serous adenoma as 90.0% than 35.0% in ovarian serous adenocarcinoma and 53.3% in ovarian borderline serous tumor， their difference had statistical significance （P<0.05）. Expression of Cripto-1 and Vimentin showed their relationship with histological grade and lymphatic metastasis in ovarian serous adenocarcinoma （P<0.05）； while expression of E-cadherin was related with histological grade （P<0.05） and not related with lymphatic metastasis （P>0.05）. Cripto-1 and E-cadherin showed negatively correlated expression in ovarian serous adenocarcinoma （r=-0.81， P<0.05）， and expression of Cripto-1 and Vimentin showed their positive correlation （r=0.42， P<0.05）. Conclusion Up-regulated expression of Cripto-1 and Vimentin and down-regulated expression of E-cadherin in ovarian serous adenocarcinoma suggest the effect by Cripto-1 mediated EMT in invasion and metastasis of ovarian serous adenocarcinoma.

【Key words】 Cripto-1； E-cadherin； Vimentin； Ovarian serous adenocarcinoma； Epithelial-mesenchymal transition

卵巢癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一， 是卵巢惡性腫瘤最常見的組織類型， 因為其組織學(xué)類型復(fù)雜， 早期病情隱匿， 大部分患者發(fā)現(xiàn)到確診時腫瘤細(xì)胞已經(jīng)播散和轉(zhuǎn)移， 錯過了最佳治療時間， 治療效果不佳， 生存期短， 是女性生殖系統(tǒng)中病死率最高的腫瘤。卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移方式主要有兩種：①直接在腹腔內(nèi)播散和血管淋巴管轉(zhuǎn)移；②研究發(fā)現(xiàn)， EMT是癌細(xì)胞發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的重要機制之一[1]。在EMT的發(fā)生過程中， 腫瘤細(xì)胞不僅形態(tài)學(xué)上發(fā)生改變， 其表達的標(biāo)志物也會隨之發(fā)生變化。最近一項研究表明， Cripto-1可以促進EGFR基因突變的非小細(xì)胞肺癌患者的EMT[2]。本研究旨在探討Cripto-1介導(dǎo)的EMT在卵巢漿液性腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用， 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1. 1 標(biāo)本來源 選取2010～2015年廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理確診卵巢漿液性腺癌患者60例。年齡24～73歲， 中位年齡58歲， 平均年齡56.3歲。術(shù)前未經(jīng)輔助治療。選取同期病理確診的卵巢漿液性腺瘤患者20例及交界性漿液性腫瘤患者30例作為對照。所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定， 常規(guī)脫水、石蠟包埋， 將蠟塊制備3 μm厚度連續(xù)切片。

1. 2 結(jié)果判定 采用免疫組化SP法， 按試劑盒說明書操作， Cripto-1主要定位于細(xì)胞質(zhì)， 出現(xiàn)棕黃色顆粒狀染色為陽性；E-cadherin蛋白主要定位于細(xì)胞膜， 細(xì)胞膜呈棕黃色顆粒為陽性；Vimentin蛋白定位于胞漿， 胞質(zhì)中呈棕黃色顆粒為陽性表達。

1. 3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2驗；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

Cripto-1在卵巢漿液性腺瘤中的表達低于漿液性腺癌和交界性漿液性腫瘤， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， E-cadherin在卵巢漿液性腺瘤中的表達高于漿液性腺癌和交界性漿液性腫瘤， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。Cripto-1、Vimentin在卵巢漿液性腺癌中的表達與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）；E-cadherin的表達與組織學(xué)分級有關(guān)（P<0.05）， 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05）。見表2。在卵巢漿液性腺癌中Cripto-1與E-cadherin的表達呈負(fù)相關(guān)（r=-0.81， P<0.05）， Cripto-1與Vimentin的表達呈正相關(guān)（r=0.42， P<0.05）。見表3。Cripto-1分別在卵巢漿液性腺瘤、漿液性交界性腫瘤、漿液性腺癌中的免疫組化染色見圖1， 圖2， 圖3。

3 討論

腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移是卵巢癌死亡的主要原因， 其機制尚未十分明確， 一直以來是研究者關(guān)注的熱點。腫瘤細(xì)胞由良性向惡性轉(zhuǎn)變時， 為適應(yīng)與周圍基質(zhì)的接觸， 其形態(tài)學(xué)和分子機制也隨之發(fā)生了變化， 上皮細(xì)胞經(jīng)去分化轉(zhuǎn)變?yōu)殚g葉細(xì)胞， 同時細(xì)胞的粘附力降低， 運動遷移能力增強， 即EMT， 既往有研究報道， EMT與獲得干細(xì)胞樣特性有關(guān)[3]。Luo等[4]發(fā)現(xiàn)， 卵巢癌EMT的發(fā)生與干細(xì)胞的形成密切相關(guān)， 而干細(xì)胞對傳統(tǒng)治療手段不敏感[5， 6]。積極的探索卵巢漿液性腺癌的發(fā)病機制， 從初始階段抑制腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展， 對卵巢癌患者的防治尤為重要。

E-cadherin是跨膜糖蛋白， 主要位于上皮細(xì)胞， 能抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的產(chǎn)生， 通過介導(dǎo)上皮細(xì)胞間的粘附， 促進同型細(xì)胞間連接的緊密性， 維持細(xì)胞形態(tài)、運動及粘附能力。發(fā)生EMT時， 正常上皮細(xì)胞表面的E-cadherin表達下調(diào)， 而代表間質(zhì)細(xì)胞表達的標(biāo)記蛋白表達升高， 導(dǎo)致癌細(xì)胞之間粘附能力下降， 加快細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[7， 8]。本研究中， 在漿液性腺瘤中E-cadherin的表達程度較高， 其表達程度與漿液性腺癌患者的組織學(xué)分級有關(guān)（P<0.05）， 腫瘤從良性向交界性再向惡性轉(zhuǎn)變過程中， 其表達程度越來越低， 并且表達程度與漿液性腺癌患者的分化有關(guān)， 在高-中分化組織中的表達高于低分化， 說明從良性到癌這個轉(zhuǎn)變過程中其細(xì)胞間的粘附能力越來越差。Vimentin是間質(zhì)表達的標(biāo)記物， 但在一些低分化惡性腫瘤的上皮組織中也有表達。本研究中Vimentin的表達水平與卵巢漿液性腺癌患者的組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）， 分化越差的組織中其表達程度越高， 說明在一些腫瘤發(fā)生過程中， 其細(xì)胞形態(tài)和生長方式也發(fā)生變化， 上皮細(xì)胞向纖維細(xì)胞樣形態(tài)轉(zhuǎn)變， 更易移動， 進而引起EMT的發(fā)生。

Cripto-1基因為表皮生長因子家族的成員。在人幾種不同類型的腫瘤中過表達， 但其生物學(xué)行為在惡性腫瘤中的機制不明。本研究發(fā)現(xiàn)， 漿液性腺瘤患者Cripto-1的表達水平較低， 其表達程度與漿液性腺癌患者的組織學(xué)分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）。提示其陽性的正常組織細(xì)胞存在有惡變的潛在風(fēng)險， 高表達可能促進腫瘤生長。進一步行Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示， 在癌組織中Cripto-1的表達程度較高， 而E-cadherin的表達程度較低， 二者之間呈負(fù)相關(guān)（r=-0.81， P<0.05）， 而與Vimentin的表達程度呈正相關(guān)（r=0.42， P<0.05）， 由此可見， 隨著病變惡性程度的增高， Cripto-1的陽性表達增高， E-cadherin表達下調(diào)， Vimentin表達于上皮中。本次研究發(fā)現(xiàn)， 當(dāng)Cripto-1表達較高時， E-cadherin的表達受到抑制， 而其表達程度降低說明細(xì)胞間粘附能力下調(diào)， 進而促進上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生， 腫瘤細(xì)胞即播散種植于腹盆腔， 發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。其機制可能是， Cripto-1 通過激活Ras-Raf-MEK- ERK和PI3K-Akt信號通路刺激腫瘤細(xì)胞的增殖與存活。但EMT的發(fā)生是多因子共同作用的結(jié)果， 是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的重要樞紐， 對其發(fā)生的分子機制還有待進一步研究， 早期阻斷EMT的轉(zhuǎn)變可以提高患者的遠(yuǎn)期生存率， 并且為治療提供寶貴的機會。

綜上所述， 在卵巢漿液性腺癌中Cripto-1、Vimentin表達上調(diào)， E-cadherin表達下調(diào)， 提示Cripto-1介導(dǎo)的EMT可能在卵巢漿液性腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過程中起作用。

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[收稿日期：2016-03-25]