雄激素受體在乳腺癌不同分子分型中的表達(dá)差異

屠世曄，王波，毛海波（.奉化市中醫(yī)醫(yī)院，浙江 奉化 35500；.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，浙江 杭州30003）

雄激素受體在乳腺癌不同分子分型中的表達(dá)差異

屠世曄1，王波2，毛海波1
（1.奉化市中醫(yī)醫(yī)院，浙江 奉化 315500；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，浙江 杭州310003）

目的探討雄激素受體（AR）在不同乳腺癌分子分型中表達(dá)的差異。方法收集浸潤(rùn)性乳腺癌239例，免疫組化方法檢測(cè)ER、PR、HER-2和AR的表達(dá)；對(duì)于HER-2（++）的病例，進(jìn)一步應(yīng)用FISH法檢測(cè)HER-2基因的擴(kuò)增。根據(jù)免疫組化及FISH法檢測(cè)結(jié)果將乳腺癌分為4型，分析AR在不同乳腺癌分子分型中的表達(dá)。 結(jié)果AR的陽性率為89.1%；AR在Luminal A型、Luminal B型及HER-2過表達(dá)型乳腺癌中的陽性率分別為97.2%，100.0%和100.0%，而在Basal-like型乳腺癌中陽性率為26.9%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。結(jié)論AR在Luminal A、Luminal B和HER-2過表達(dá)型乳腺癌中具有很高的陽性率，而在Basal-like型乳腺癌中表達(dá)率則很低。

乳腺癌；雌激素受體；孕激素受體；HER-2；雄激素受體

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，居于女性惡性腫瘤的首位。分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)展使人們可以從基因水平進(jìn)一步分析乳腺癌的異質(zhì)性。2011年《St.Gallen共識(shí)》［1］中，將乳腺癌各分子分型的定義及治療選擇作了較明確的推薦（表1）。乳腺癌患者雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）水平的檢測(cè)已成為病理科常規(guī)的檢測(cè)項(xiàng)目，這些指標(biāo)的評(píng)估可以為臨床醫(yī)生正確選擇治療方式提供依據(jù)。除以上兩種激素受體外，研究發(fā)現(xiàn)，超過70%的乳腺癌組織中存在雄激素受體（AR）的表達(dá)［2］。本研究主要探討AR在不同乳腺癌分子分型中的表達(dá)，為將來的分型和治療提供借鑒。

表1　2011年St.Gallen共識(shí)中定義的乳腺癌亞型及其治療

1　資料與方法

1.1一般資料收集2013年1月～2015年1月浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理診斷為浸潤(rùn)性乳腺癌的病例239例，所有患者均接受手術(shù)治療，未行新輔助化療，有較為完整的臨床資料。年齡30～89歲，平均（59.5±5.8）歲。239例浸潤(rùn)性乳腺癌中，227例為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，5例為浸潤(rùn)性小葉癌，3例為粘液腺癌，分泌性癌、化生性癌、髓樣癌和微乳頭癌各1例。

1.2免疫組化以10%中性福爾馬林溶液固定標(biāo)本，切4μm厚石蠟切片，同時(shí)保留1張連續(xù)切片作HE染色觀察。采用Envision二步法檢測(cè)乳腺癌組織中ER、PR、HER-2、AR的表達(dá)?？贵w基本信息見表2。用已知陽性染色切片作為陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，不加一抗作為空白對(duì)照。

表2　抗體基本信息

1.3熒光原位雜交（FISH）對(duì)于HER-2（++）的病例，進(jìn)一步應(yīng)用FISH法檢測(cè)HER-2基因的擴(kuò)增。4μm切片，65℃烤片過夜。脫蠟至水后，將切片置于水浴鍋中，蒸餾水高溫煮20分鐘；滴加胃酶溶液，37℃消化30分鐘；75%，95%，100%乙醇脫水，切片風(fēng)干，滴加10μL探針（北京金普嘉公司）于切片上；設(shè)置雜交程序：83℃變性5分鐘，42℃雜交16小時(shí)，將切片置于雜交儀上進(jìn)行雜交。洗滌切片，梯度乙醇脫水并干燥，加DAPI復(fù)染封片，觀察切片。

1.4結(jié)果判定

1.4.1ER、PR、AR判定均采用≥1%瘤細(xì)胞核陽性作為陽性標(biāo)準(zhǔn)。

1.4.2HER-2判定判讀標(biāo)準(zhǔn)按照《乳腺癌HER2檢測(cè)指南（2014版）》［3］。陰性：無染色或≤10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色；（+）：＞10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色；（++）有兩種情況，第一種為＞10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整和/或弱至中等強(qiáng)度的細(xì)胞膜染色，第二種為≤10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色；（+++）：＞10%的浸潤(rùn)癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色。

1.4.3FISH判定計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞30個(gè)，統(tǒng)計(jì)Ratio值（Ratio值=30個(gè)細(xì)胞核中HER-2信號(hào)總數(shù)/30個(gè)細(xì)胞核中CEP17信號(hào)總數(shù)）。Ratio值在2.0及其以上或者Ratio值在2.0以下，但是平均HER-2拷貝數(shù)/細(xì)胞在6.0及其以上為陽性；Ratio值在2.0以下且平均HER-2拷貝數(shù)/細(xì)胞在4.0以下為陰性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1乳腺癌分型239例中，根據(jù)乳腺癌分子分型，Luminal A型144例 （60.3%），Luminal B型32 例 （13.4%），HER-2過表達(dá)型 29例 （12.1%），Basal-like型26例（10.9%），剩余8例未歸類（ER、PR、HER-2均陰性）。AR、ER、PR和HER-2陽性分別為213例 （89.1%）、176例 （73.6%）、147例（61.5%）和61例（25.5%）。

2.2AR在不同乳腺癌分子分型中的表達(dá)AR 在Luminal A型、Luminal B型和HER-2過表達(dá)型乳腺癌中具有很高的表達(dá)，陽性率分別為97.2%、100.0%和100.0%；而在Basal-like型乳腺癌中陽性率低，僅為26.9%；另有8例未歸類的乳腺癌AR陽性率為62.5%；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示各組之間AR的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表3。176例ER（+）的乳腺癌AR陽性率為97.7%；而63例ER（-）的乳腺癌AR陽性率為65.1%，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=82.903，P＜0.01）。147例PR （+）的乳腺癌AR陽性率為98.0%，而92例PR（-）的乳腺癌AR陽性率為75.0%，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。61例HER-2（+）的乳腺癌均表達(dá)AR，而HER-2（-）的乳腺癌AR陽性率為85.4%，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表4。

表3　AR在不同乳腺癌分子分型中的表達(dá)（n，%）

3　討論

近年來，基于基因表達(dá)譜不同提出的乳腺癌分子分型研究不斷深入，為乳腺癌的個(gè)體化治療提供了一個(gè)有力的依據(jù)。乳腺癌分子分型的研究已成為乳腺癌領(lǐng)域的熱點(diǎn)，并成功地應(yīng)用于臨床實(shí)踐中。此方法是根據(jù)ER、PR、HER-2和Ki-67的免疫組化結(jié)果進(jìn)行分型，包括Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達(dá)型和Basal-like型4種。不同的研究所報(bào)道的各分子亞型所占的比例不盡相同。Kim等［4］報(bào)道Luminal A型占44.5%，Luminal B型占7.8%，HER-2過表達(dá)型占17.1%，Basal-like型占14.7%。Carey等［5］報(bào)道美國(guó)乳腺癌Luminal A型、Luminal B型、HER-2過表達(dá)型和Basal-like型分別占50.4%、16.1%、6.7%和20%。袁中玉等［6］統(tǒng)計(jì)了1280例乳腺癌患者，發(fā)現(xiàn)Basal-like型、HER-2過表達(dá)型和 Luminal型乳腺癌分別占 20.9%、23.2%和55.9%。本研究中，Luminal A型乳腺癌有144例，Luminal B型乳腺癌有32例，HER-2型占29例，Basal-like型占26例，比例分別為60.3%，13.4%，12.1%和10.9%。

表4　AR的表達(dá)與其他免疫組化抗體的關(guān)系（n，%）

大部分乳腺癌組織都表達(dá)AR［7］。目前AR的表達(dá)主要依靠免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)，不同文獻(xiàn)報(bào)道的陽性率各不相同，大致在31%～90%之間，而多數(shù)在 60%～70%［8］。本實(shí)驗(yàn)中 AR的陽性率為89.1%。造成結(jié)果明顯不一致的原因可能是各研究檢測(cè)AR表達(dá)的形式、檢測(cè)方法和計(jì)數(shù)條件不盡相同，以及陽性判定標(biāo)準(zhǔn)不一致等［8］。

已有研究報(bào)告AR多與ER、PR共表達(dá)于乳腺癌，AR的表達(dá)率甚至高于ER和PR［9］。Agoff等［10］發(fā)現(xiàn)AR陽性可見于49%的ER（-）乳腺癌和89%的ER（+）乳腺癌。高仁里等［11］證實(shí)AR的表達(dá)與ER的表達(dá)呈正相關(guān)，且AR的表達(dá)率略高于ER的表達(dá)率。楊季紅等［12］也證明ER陽性組AR的表達(dá)率為85.3%，而ER陰性組AR的表達(dá)率為48.1%，兩組間表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。張文進(jìn)［13］指出AR表達(dá)與ER、PR陽性表達(dá)率呈正相關(guān)，乳腺癌中AR大多與ER、PR同時(shí)表達(dá)，只有少于10%的癌組織單獨(dú)表達(dá)。本研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道類似。ER（+）的乳腺癌AR陽性率為97.7%；ER（-）的乳腺癌AR陽性率為65.1%，兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。PR（+）的乳腺癌 AR陽性率為98.0%；PR（-）的乳腺癌AR陽性率為75.0%，兩組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。說明AR的表達(dá)與ER、PR的表達(dá)有關(guān)。

關(guān)于AR在乳腺癌各分子分型中的表達(dá)的研究甚少。在一項(xiàng)大樣本數(shù)據(jù)研究中，Laura等［14］發(fā)現(xiàn)AR的表達(dá)最常見于Luminal A型和Luminal B型乳腺癌，陽性率分別為91%和68%。而在HER-2過表達(dá)型乳腺癌中，陽性率略低（59%）。只有32% 的Basal-like型乳腺癌表達(dá)AR。各組之間AR的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［14］。本實(shí)驗(yàn)中AR在Luminal A型、Luminal B型和HER-2過表達(dá)型乳腺癌中具有很高的表達(dá)，陽性率分別為97.2%、100.0%和100.0%；而在Basal-like型乳腺癌中陽性率低很多，僅為26.9%。由此表明AR在乳腺癌中的表達(dá)與ER、PR有關(guān)，從而提示AR可以作為乳腺癌治療的一個(gè)新指標(biāo)。

綜上所述，AR在Luminal A型、Luminal B型和HER-2過表達(dá)型乳腺癌中具有很高的陽性率，而在Basal-like型乳腺癌中表達(dá)率則很低。

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