大花蕙蘭疫病病原鑒定及防治藥劑篩選

秦建彬，魏翠華 ，江　昊

(福建省福州市農(nóng)業(yè)科學研究所　350019)

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大花蕙蘭疫病病原鑒定及防治藥劑篩選

秦建彬，魏翠華 ，江昊

(福建省福州市農(nóng)業(yè)科學研究所350019)

對福州地區(qū)感病大花蕙蘭疫病的病原菌進行鑒定并進行接種試驗，采用菌絲生長速率法測定7種藥劑對該病菌的抑制效果。試驗結果表明：大花蕙蘭疫病的病原為棕櫚疫霉；大花蕙蘭新葉和受傷的老葉易感病，接種后的發(fā)病率為100.0%和53.3%，無刺傷的老葉則不發(fā)??；高濃度的四霉素和烯酰嗎啉對病原菌的抑制效果最好，平均抑菌率達到95.0%以上，各藥劑的抑菌效果隨著稀釋濃度的升高而下降。

大花蕙蘭疫??；病原鑒定；棕櫚疫霉；藥劑篩選

大花蕙蘭又名虎頭蘭、喜姆比蘭，植物分類學上屬蘭科蘭屬多年生草本植物，是國際上五大盆栽蘭花之一，也是重要的切花蘭花種類之一[1]。大花蕙蘭疫病菌主要為害幼苗和成株的莖基部與葉片，其中心葉最易受到傷害，發(fā)病初期病部為褐色小斑點，水漬狀，適溫高濕時病斑迅速擴大，變?yōu)楹稚蟀?，最后病部腐爛易拔起，整株死亡。每年的6-10月是該病高發(fā)期，如不及時處理防治，傳染極快，是大花蕙蘭的一種毀滅性病害。在國內對于花卉疫病方面的研究較少，唐祥寧等[2]對上海地區(qū)大花蕙蘭真菌性病害進行了鑒定，認為是棕櫚疫霉菌引起了大花蕙蘭的疫?。魂愑缽姷萚3]研究鑒定了廣州地區(qū)9種花卉疫病的發(fā)生情況，發(fā)現(xiàn)柑橘生疫霉、棕櫚疫霉、煙草疫霉等都會引起花卉疫病發(fā)生；姬廣海等[4]研究發(fā)現(xiàn)，黃單胞菌屬的地毯草黃單胞菌是引起紅掌細菌性疫病的病原菌。可見引起花卉疫病的病因較為復雜，不同地點由于生態(tài)條件不同，或者同一地點發(fā)病時間不同，導致疫病的優(yōu)勢菌種類都可能不同。對于在福建地區(qū)大花蕙蘭疫病發(fā)生發(fā)展的研究尚未見到報道，因此本研究對在福州栽培大花蕙蘭過程中出現(xiàn)的疫病進行了病原菌初步鑒定和藥劑篩選試驗，以期為后續(xù)的進一步研究提供科學依據(jù)。

1　材料與方法

1.1供試材料

1.1.1蘭花材料2014年在福州市農(nóng)業(yè)科學研究所的蘭花大棚中采集感病植株的病部作為分離鑒定的材料。

1.1.2供試藥劑

甲霜·霜霉威(青島百禾源生物工程有限公司)，咪鮮松脂銅(南京博士邦化工科技有限公司)，大生M-45(陶氏益農(nóng))，烯酰錳鋅(福建新農(nóng)大正生物工程有限公司)，0.15%四霉素水劑(遼寧微科生物工程有限公司)，多菌靈(江蘇藍豐生物化工股份有限公司)，烯酰嗎啉(德國勞倫斯生命科學有限公司)。

1.2試驗方法

1.2.1病原菌的分離鑒定病原菌的分離鑒定和藥劑篩選試驗均在福州市農(nóng)業(yè)科學研究所的實驗室中進行。分別剪取病葉和感病莖基部，沖洗晾干，在病健交界處切取5 mm×5 mm的小塊，經(jīng)75%乙醇、升汞依次消毒，再用無菌水進行多次漂洗，移入選擇性V8培養(yǎng)基(含五氯硝基苯50 μg/mL、多菌靈50 μg/mL、青霉素50 μg/mL和利福平100 μg/mL)中培養(yǎng)，從新長出的菌落邊緣挑取菌絲移入新制備的培養(yǎng)基中進行純培養(yǎng)。觀察菌落的生長情況，顯微鏡觀察孢囊梗、孢子囊的形態(tài)，根據(jù)相關文獻[5-6]對分離的菌株進行鑒定。

1.2.2孢子囊的制備與致病性測定將菌株置于V8培養(yǎng)基上生長3 d后，從菌落邊緣切取2 mm×2 mm的菌絲塊移至V8培養(yǎng)液中，在25℃黑暗條件下培養(yǎng)3 d，倒去培養(yǎng)液換上無菌土壤浸出液，在25℃光照條件下培養(yǎng)3 d后在顯微鏡下鏡檢是否產(chǎn)生孢子囊，待產(chǎn)生大量孢子囊后，將孢子囊懸浮液置于4℃冰箱中，再放入25℃恒溫箱中約20 min，使游動孢子充分釋放，于磁力振蕩器上混勻，并將孢子濃度調至4×103個/mL。

剪取健康的大花蕙蘭新葉與老葉，用清水洗凈并用75%乙醇進行表面消毒。取25 μL孢子囊懸浮液分別接種于葉片上，接種分為刺傷和不刺傷兩種處理，每個處理10片葉，重復3次，以接種無菌水為對照，接種后保濕6 d，記錄葉片的發(fā)病情況。

1.2.3抑菌試驗采用菌絲生長速率法測定[5]，用無菌水將供試藥劑設置為500、1000和1500倍液3個稀釋濃度，分別取200 μL加到V8培養(yǎng)基中攤平，用無菌接種針將菌絲挑到含藥培養(yǎng)基中央。取200 μL無菌水加入V8培養(yǎng)基作對照(CK)處理。每個處理3次重復。放于28℃下培養(yǎng)3 d，用“十字交叉法”測量菌株在含不同藥劑培養(yǎng)基上的菌落直徑，計算各種藥劑對菌絲的生長抑制率。抑菌率(%)=[(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/對照菌落直徑]×100

2　結果與分析

2.1病原菌孢子形態(tài)特征

在V8培養(yǎng)基上菌落呈圓形，灰白色，氣生菌絲中間多，四周少，菌絲寬度為4.0～9.6 μm；氣生菌絲水培后形成較多的淡褐色厚垣孢子，孢囊梗簡單合軸式分枝產(chǎn)生大量孢子囊，孢子囊形狀不規(guī)則，呈橢圓形、卵形，倒梨形或不規(guī)則形，大小為28～67 μm×22～44 μm，長寬比為1.1～1.9；乳突明顯，常為單乳突，有時為雙乳突，乳突高2.2～4.8 μm；孢子囊基部圓形，孢囊柄多生于正基部，孢子囊易脫落，脫落后具短柄，長度為0～6.4 μm。

2.2病原菌鑒定結果

根據(jù)病原菌的菌落生長特征和形態(tài)特征，孢囊梗、孢子囊形狀和大小，厚垣孢子及寄主范圍，鑒定該病原菌為卵菌綱霜霉目疫霉科疫霉屬棕櫚疫霉[Phytophthorapalmivora(Bulter)Bulter]。

2.3致病性測定結果

致病性測定結果表明，大花蕙蘭新葉2個處理發(fā)病率達到了100.0%，而老葉刺傷的發(fā)病率為53.3%，無刺傷的不發(fā)病。癥狀與發(fā)病植株一致，對照不發(fā)病，從發(fā)病組織中重新分離出的病原菌與接種的病原菌完全一致，說明引起大花蕙蘭疫病的病原菌為棕櫚疫霉。

2.4藥劑抑菌效果

從表1可見，不同藥劑對菌絲的抑制效果存在差異，各藥劑隨著稀釋濃度的升高抑制效果下降。在500倍液濃度下，抑制效果最好的是四霉素和烯酰嗎啉，平均抑菌率達到95.0%以上，與其他處理差異達極顯著水平；其次是烯酰錳鋅，平均抑制率為82.4%；大生和咪鮮松脂銅的平均抑菌率在50.0%以上；抑制效果最差的是多菌靈，平均抑菌率只有29.9%。在1000倍液濃度下，各藥劑的平均抑菌率都有所下降，四霉素和烯酰嗎啉的平均抑菌率為93.2%和90.9%，與其他處理差異達極顯著水平；烯酰錳鋅的平均抑菌率為61.9%；多菌靈的平均抑菌率最低，為19.7%。在1500倍液濃度下，各藥劑平均抑菌率呈現(xiàn)下降趨勢，四霉素和烯酰嗎啉兩處理的平均抑菌率為70.2%和61.4%，兩處理間差異達顯著水平，與其他處理差異達極顯著水平；烯酰錳鋅的平均抑菌率為32.5%；大生、咪鮮松脂銅、甲霜·霜霉威和多菌靈處理間的平均抑菌率較低，且這4種藥劑之間抑菌率差異不顯著。

表1　不同藥劑對棕櫚疫霉的抑制效果

3　結論與討論

經(jīng)過鑒定，引起福州地區(qū)大花蕙蘭疫病的病原菌是棕櫚疫霉[Phytophthorapalmivora(Bulter)Bulter]，這與唐祥寧在上海地區(qū)對大花蕙蘭疫病的研究以及陳永強在廣州地區(qū)對卡特蘭疫病的研究結果一致[2-3]。謝為龍[7]報道了在臺灣地區(qū)棕櫚疫霉也是蘭花疫病的主要病原菌之一，說明棕櫚疫霉在不同的地區(qū)都會引起洋蘭的疫病。該病菌的寄主范圍廣泛[8]，主要寄主包括鳳梨、木瓜、番木瓜、柑橘、枇杷、蝶蘭屬、洋蒲桃等，其危害植物后殘留在土壤中或者周邊植株上，等到氣候條件適宜時可再次侵染新植株。侵染過程分為游動孢子的釋放、游動孢子游動、休止孢子形成、休止孢子萌發(fā)、附著孢子形成、菌絲擴展、孢子梗形成和新一代孢子囊產(chǎn)生等[9]。因此，大花蕙蘭種植大棚周邊應盡量避免種植棕櫚疫霉的寄主植物。

致病性研究發(fā)現(xiàn)大花蕙蘭的嫩葉和受傷的老葉較易感病，因此在大花蕙蘭嫩葉長出和換盆時應做好預防工作，可在每年春季大花蕙蘭新葉長出時施用四霉素和烯酰嗎啉進行防治。

室內藥劑篩選結果發(fā)現(xiàn)，低濃度的四霉素和烯酰嗎啉對大花蕙蘭疫病病原菌有很好的抑制作用，可以為田間防治該病提供一定的參考，但是各藥劑在田間的實際防治效果還需要進一步研究。

[1]盧思聰.中國蘭與洋蘭[M].北京：金盾出版社，1994.

[2]唐祥寧，鄧建玲.上海地區(qū)大花蕙蘭真菌病害鑒定[J].江西植保，2008，31(4)：198-200.

[3]陳永強，戚配坤，姜子德.廣州地區(qū)九種花卉疫病病原菌的鑒定[J].華南農(nóng)業(yè)大學學報，1999，20(4)：5-9.

[4]姬廣海，魏亞東，蔣桂芝，等.紅掌細菌性疫病的病原菌初步鑒定[J].植物病理學報，2004,34(2)：107-111.

[5]王自然，郭俊，周東果，等.檸檬苗期一種新病害的病原鑒定及防治藥劑的室內篩選[J].植物保護，2012,38(4)：166-170.

[6]余永年.中國真菌志霜霉目[M].北京：科學出版社，1998:139-191.

[7]謝為龍.臺灣花卉疫病[J].動植物檢疫，1998(25)：27-28.

[8]余永年，莊文穎，李金亮.柑橘疫霉[J].真菌學報，1986(S1)：31-39.

[9]郭子祥，何成興，吳文偉，等.烯酰嗎啉、甲霜靈錳鋅對辣椒疫霉的抑菌活性[J].云南大學學報，2008,30(S1)：188-189.

(責任編輯：林玲娜)

Pathogen identification and chemical screening of cymbidium blight

QIN Jian-bin, WEI Cui-hua, JIANG Hao

(FuzhouInstituteofAgriculturalSciences,FujianProvince350019)

In this paper, pathogen identification and inoculation experiment of cymbidium blight were carried out. Inhibition effect of seven chemicals on cymbidium blight was studied by mycelial growth rate method. The results showed that the pathogen of cymbidium blight wasPhytophthorapalmivora. Tender and wounded old leaves were infected easily. Infection rate after inoculation were 100.0% for young leaves and 53.3% for old ones, respectively. Old leaves without wound showed no infection. High concentration tetramycin and dimethomorph had good inhibition effects on pathogen, showed over 95.0% of inhibition rate. All tested chemicals had downward trend of controlling efficacy with increasing diluted concentration.

Cymbidium blight; pathogen identification;Phytophthorapalmivora; chemical screening

2016-02-25

秦建彬，男，1977年生，副研究員。

福州市科技攻關項目(2013-N-51)。

10.13651/j.cnki.fjnykj.2016.03.006