M i rcoR N A-195在胃癌患者血清及組織中的表達(dá)水平及意義

孫彥珍，李珍，袁征

（河南省南陽市中心醫(yī)院 病理科，河南 南陽 473000）

M i rcoR N A-195在胃癌患者血清及組織中的表達(dá)水平及意義

孫彥珍，李珍，袁征

（河南省南陽市中心醫(yī)院 病理科，河南 南陽 473000）

目的研究m i croR N A-195（m i R-195）在患者血清及胃癌組織中的表達(dá)水平，并探討其表達(dá)水平與胃癌臨床病理的關(guān)系。方法選取該院62例胃癌患者為研究組，同期來該院體檢的36例健康人群為對照組，采用R T-PC R法檢測兩組人群血清中以及胃癌組織及對應(yīng)癌旁組織中的m i R-195的表達(dá)水平，并探討m i R-195與臨床病理參數(shù)的相互關(guān)系。結(jié)果研究組血清中m i R-195的表達(dá)水平顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。m i R-195在胃癌組織中的表達(dá)水平亦顯著低于對應(yīng)的癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；相關(guān)分析結(jié)果顯示，m i R-195的低表達(dá)與胃癌浸潤深度、分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而與腫瘤部位均無相關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論m i R-195在胃癌患者中的低表達(dá)可能對胃癌的發(fā)生發(fā)展有一定的促進作用。

m i croR N A-195；胃癌；分期

胃癌是常見的腫瘤，據(jù)統(tǒng)計，胃癌發(fā)病率位于全球惡性腫瘤的第4位，且死亡率極高，僅次于肺癌［1］。胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多階段和多步驟的過程，是遺傳因素、環(huán)境因素和生物因素共同作用的結(jié)果。然而目前對于胃癌的具體機制尚未完全明了。M i rco RNA-195（m i R-195）是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類m i croRNA，有研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，m i R-195在骨肉瘤、結(jié)直腸癌等腫瘤中表達(dá)異常，參與腫瘤細(xì)胞的凋亡調(diào)節(jié)及腫瘤的形成［2-3］。然而到目前為止，m i RNA-195在胃癌組織中的表達(dá)水平研究以及其與胃癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系研究尚無報道。因此，本研究通過檢測m i RNA-195在胃癌患者血清及組織中的表達(dá)，探討m i RNA-195與胃癌TNM分期的關(guān)系，從而為胃癌的診治及預(yù)后提供相關(guān)的實驗依據(jù)。

1　資料與方法

1.1臨床資料

62例腫瘤組織來源于2011年11月-2014年8月在本院行胃癌手術(shù)的標(biāo)本，同時取癌旁組織。其中，男29例，女33例；年齡52～77歲，平均（65.2± 6.5）歲；術(shù)前未做過任何放療及化療。對照組為同期健康體檢者36例。其中，男15例，女21例；年齡64～78歲，平均（65.4±9.3）歲。

1.2主要試劑

采用Tri zol試劑盒（上海英駿公司）提取組織及血清中的RNA，采用美國Fem ant es公司cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒對RNA進行逆轉(zhuǎn)錄，PCR試劑盒購于南京生興生化科技有限公司。

1.3組織以及血漿標(biāo)本總R N A提取及逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

62例患者于手術(shù)中取胃癌及對應(yīng)腫瘤邊緣2～6 cm處癌旁組織進行實驗分析。此外，清晨空腹時抽取各實驗對象外周靜脈血5 m l，加入EDTA抗凝劑（上海新睿），2 h內(nèi)于4℃、10 000×g離心10 m i n，離心后提取上層血清備用。取約100 m g組織或150μl血清，加入1 m l Tri zol充分勻漿后，按照說明書的要求抽提總RNA，所得RNA溶于20μl DEPC處理水。提取的總RNA經(jīng)紫外分光光度計定量。進一步采用cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒對所得RNA逆轉(zhuǎn)錄，并將其置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。PCR反應(yīng)條件：95℃變性20 s，然后60℃ 20 s，70℃ 1 s，50個循環(huán)。采用ABI公司7900型Real-Ti m e PCR儀進行PCR分析，最終結(jié)果采用2-ΔΔCt法進行相對定量分析［4］。m i R-195引物序列為5'-CGTAGCAGCACAGA AAT-3'以及5'-GTGCAGGGTCCGGGT-3'［5］。PCR對照采用U6內(nèi)參：5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'以及5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，均通過正態(tài)性檢驗。兩組間比較用兩獨立樣本t檢驗，多組間比較為單因素方差分析。用Spearm an法分析m i R-195 m RNA表達(dá)水平與胃癌TNM分級的關(guān)系，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1胃癌患者血清中m i R-195 m R N A水平降低

與正常人比較，m i R-195在胃癌患者血清中的m RNA表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義［（1.21± 0.23）vs（0.32±0.11），t=25.86，P＜0.05］。見圖1。

2.2胃癌組織及對應(yīng)癌旁m i R-195 m R N A的表達(dá)水平

與癌旁組織比較，m i R-195在胃癌組織中的表達(dá)水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 ［（1.19±0.21）vs （0.41±0.27），t=14.90，P＜0.05］（見圖2），具體數(shù)據(jù)見圖3。

2.3胃癌組織m i R-195表達(dá)水平與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

結(jié)果顯示，胃癌組織中m i R-195 m RNA在Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中的表達(dá)低于Ⅰ、Ⅱ期組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；m i R-195 m RNA在高分化組織中的表達(dá)水平低于低分化組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；m i R-195 m RNA表達(dá)隨著浸潤程度加重而降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；m i R-195 m RNA在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)水平低于無轉(zhuǎn)移的組織（P＜0.05）；m i R-195 m RNA在不同部位的表達(dá)無差異（P＞0.05）。見表1。

圖1　胃癌患者血清中m i R-195m R N A的表達(dá)水平

圖2　胃癌及對應(yīng)癌旁組織中m i R-195 m R N A的表達(dá)水平

圖3　胃癌及對應(yīng)癌旁組織中m i R-195 m R N A的表達(dá)水平

表1　m i R-195 m R N A表達(dá)與胃癌的臨床病理特征的關(guān)系

2.4胃癌患者血清及癌組織m i R-195表達(dá)水平與胃癌臨床病理分級的相關(guān)性

進一步Spearm an相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清中m i R-195 m RNA表達(dá)水平與胃癌TNM分期程度負(fù)相關(guān)（r=0.554，P＜0.05）。見表2。

表2　m i R-195 m R N A表達(dá)水平與胃癌的TN M分級的關(guān)系 （±s）

表2　m i R-195 m R N A表達(dá)水平與胃癌的TN M分級的關(guān)系 （±s）

注：與胃癌TNM各級間比較，1）r=0.501，P＜0.05；2）r=0.554，P＜0.05

T N M分級胃癌組織Ⅰ1 3 　0 . 5 1 ± 0 . 2 1 　0 . 4 9 ± 0 . 2 3 Ⅱ1 7 　0 . 4 6 ± 0 . 1 9 　0 . 4 1 ± 0 . 4 6 Ⅲ1 4 　0 . 3 5 ± 0 . 1 8 　0 . 3 6 ± 0 . 4 3 Ⅳ1 8 　0 . 2 9 ± 0 . 1 81）　0 . 2 7 ± 0 . 5 52）例數(shù)胃癌血清

3　討論

m i RNA是一類全長為19～25 nt的單鏈小分子RNA，廣泛存在于組織、血清、血漿或其他體液中。該分子本身不具有蛋白編碼的功能，但對編碼蛋白基因的信使RNA（m RNA）有著重要調(diào)控作用。越來越多的研究表明，m i RNA的表達(dá)異常與腫瘤進展存在重要的關(guān)聯(lián)［6-10］。研究認(rèn)為，m i R-195在多種腫瘤組織中表達(dá)異常，參與腫瘤細(xì)胞的凋亡調(diào)節(jié)及腫瘤的形成［2-3］。Zhao等［11］采用RT-PCR技術(shù)檢測21例乳腺癌患者血清中m i R-195表達(dá)水平明顯低于正常人，且認(rèn)為m i R-195的表達(dá)水平可以作為乳腺癌的特異性診斷分子。此外，在食管癌組織中，m i R-195水平被抑制［12］。到目前為止，胃癌中m i R-195的表達(dá)水平及其對胃癌可能存在著的生理功能還未知。

本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中m i R-195表達(dá)水平低于癌旁組織，從而提示m i R-195發(fā)揮抑癌基因的重要作用。本研究還發(fā)現(xiàn)，胃癌患者血清中m i R-195表達(dá)水平低于正常人，進一步證實m i R-195在胃癌發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮抑癌功能。進一步分析胃癌組織m i R-195表達(dá)水平與胃癌臨床病理特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中m i R-195 m RNA在Ⅲ、Ⅳ期胃癌組織中的表達(dá)低于Ⅰ、Ⅱ期組織；m i R-195 m RNA在高分化胃癌組織中的表達(dá)水平低于低分化組織，說明胃癌惡性程度越嚴(yán)重，m i R-195 m RNA水平越低，提示m i R-195可能參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展；此外，筆者還發(fā)現(xiàn)，m i R-195 m RNA表達(dá)隨著浸潤程度加重而降低，m i R-195 m RNA在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)水平低于無轉(zhuǎn)移的組織。以上結(jié)果均說明m i R-195的低表達(dá)對胃癌的發(fā)生、發(fā)展有著一定的促進作用，進一步提示了m i R-195在胃癌組織中發(fā)揮重要的抑癌功能，

通過相關(guān)分析進一步發(fā)現(xiàn)，m i R-195在胃癌組織及血清中的表達(dá)隨著胃癌TNM分級增加而降低，呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，表明m i R-195在胃癌的診斷、分級以及臨床預(yù)后的評價中可能起著潛在的重要作用。Deng等［13］研究發(fā)現(xiàn)，使用m i R-195的模擬物能夠顯著抑制胃癌細(xì)胞的生長，提示m i R-195很有可能通過影響胃癌細(xì)胞的生長來參與腫瘤的進展，研究還發(fā)現(xiàn)，m i R-195通過參與細(xì)胞周期蛋白D1和E1的作用以抑制在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖［14］，進而說明m i R-195還可能通過影響癌細(xì)胞的增殖參與胃癌的進程。

綜上所述，m i R-195的低表達(dá)在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用，可能通過影響胃癌細(xì)胞的增殖及生長來實現(xiàn)的。臨床中，m i R-195的檢測對胃癌患者的治療以及預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義。

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（申海菊編輯）

Expression of mircoRNA-195 in serum and tissues of patients with gastric cancer and its significance

Yan-zhen Sun，Zhen Li，Zheng Yuan
（Department of Pathology，Nanyang Central Hospital of Henan，Nanyang，Henan 473000，China）

Objective To study the expression of mircoRNA-195（miR-195）in serum and tissues of patients with gastric cancer，and to discuss its correlation with clinical pathology of gastric cancer.Methods Sixty-two patients with gastric cancer in our hospital were selected as research group，and 36 healthy people who were accepted for physical examination in our hospital in the same period as control group.The expression level of miR-195 in serum，gastric cancer tissue and corresponding para-carcinoma tissue of the two groups was detected by real-time PCR；and the correlations between the expression level of miR-195 and clinicopathological parameters were discussed.Results The expression level of miR-195 in serum of the research group was significantly lower than that of the control group（P＜0.05）.The expression level of miR-195 in the gastric cancer tissue was significantly lower than that of the corresponding para-carcinoma tissue （P＜0.05）.Correlation analysis showed that the low expression level of miR-195 was significantly correlated with the invasion depth，differentiation degree，clinical stages and lymphatic metastasis of gastric cancer（P＜0.05），but it had no significant correlation with tumor location（P＞0.05）.Conclusions The low expression level of miR-195 has certain effect on promoting the occurrence and development of gastric cancer.

microRNA-195；gastric cancer；stage

R 735.2

A

1005-8982（2016）05-0059-04

10.3969/j.i s s n.1005-8982.2016.05.012

2015-09-16