冠心病中醫(yī)證候動(dòng)物模型研究進(jìn)展

耿亞 馬月香

摘要：冠心病（coronary artery heart disease，CHD）是心血管疾病常見(jiàn)病種。CHD動(dòng)物模型是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究疾病發(fā)展轉(zhuǎn)歸及評(píng)價(jià)藥物作用療效必不可少的工具，而針對(duì)于中醫(yī)證候的動(dòng)物模型是在中醫(yī)基本思想的指導(dǎo)下在動(dòng)物身上模擬出人類(lèi)疾病的某些特征，制備出與人類(lèi)疾病癥狀和病理變化相似或相同的動(dòng)物模型。目前，建立CHD中醫(yī)證候動(dòng)物模型的方法多種多樣，本文從痰瘀互結(jié)、心脾陽(yáng)虛、寒凝血瘀、痰濁血瘀、心氣虛、氣虛血瘀方面綜述了這幾類(lèi)模型的研究進(jìn)展，以期為冠心病的研究提供參考。

關(guān)鍵詞：冠心??；中醫(yī)證候；動(dòng)物模型；綜述

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.08.035

中圖分類(lèi)號(hào)：R259.414 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2016）08-0129-04

冠心?。╟oronary artery heart disease，CHD）是指冠狀動(dòng)脈粥樣硬化使管腔狹窄或阻塞，或/和冠狀動(dòng)脈痙攣導(dǎo)致心肌缺血缺氧而引起的心臟病，又稱(chēng)缺血性心臟?。↖HD）。根據(jù)CHD臨床致病特點(diǎn)，可歸屬中醫(yī)學(xué)“胸痹”“真心痛”等范疇。在CHD研究中，動(dòng)物模型的建立是主要研究方法之一，近年許多研究者在冠心病中醫(yī)證候動(dòng)物模型研究中取得一定成效，但也存在諸多與中醫(yī)基本思想不協(xié)調(diào)的問(wèn)題。筆者通過(guò)檢索中國(guó)知識(shí)資源總庫(kù)2005-2015年文獻(xiàn)，對(duì)有關(guān)CHD中醫(yī)證候動(dòng)物模型文獻(xiàn)做一梳理，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 痰瘀互結(jié)證小型豬模型

林氏等[1]以高脂飼料（每100 kg飼料含膽固醇2 kg，膽鹽0.5 kg，豬油10 kg）每日每只900 g喂養(yǎng)

小型豬2周，并以介入法對(duì)冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮進(jìn)行損傷，術(shù)后繼續(xù)以高脂飼料每日每只900 g喂養(yǎng)8周。觀察測(cè)量并分別記錄小型豬高脂2、6、10周的體質(zhì)指數(shù)、舌象、心電圖，以及無(wú)創(chuàng)血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，包括心輸出量、每搏輸出量、外周血管阻力、左心做功。

在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，因小型豬的生理解剖、血脂指標(biāo)和人類(lèi)非常相近[2]。生理生化方面，豬的血液學(xué)、血流動(dòng)力學(xué)、血液生化指標(biāo)方面已被證實(shí)與人類(lèi)相似，而且品種純正、體質(zhì)量較小、生長(zhǎng)緩慢，近年來(lái)，在中醫(yī)證候動(dòng)物模型研究中應(yīng)用越來(lái)越突出[3-4]。有學(xué)者以《中藥新藥治療冠心病心絞痛的臨床研究指導(dǎo)原則》為參照，對(duì)小型豬冠心病模型痰瘀互結(jié)證候進(jìn)行診斷與評(píng)分，制定了CHD痰瘀互結(jié)證小型豬模型的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)主癥、兼癥、舌象、脈象進(jìn)行評(píng)分，根據(jù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)判斷CHD痰瘀互結(jié)證小型豬模型是否建立[1，5]。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)意在模擬中醫(yī)過(guò)食肥甘厚味而引起脾運(yùn)失健，痰濕壅盛，進(jìn)而導(dǎo)致血脈痹阻的痰瘀互結(jié)的中醫(yī)證候，以高脂飲食和冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷術(shù)復(fù)制出CHD痰瘀互結(jié)證動(dòng)物模型。

2 心脾陽(yáng)虛證大鼠模型

韋氏等[6]先適應(yīng)性飼養(yǎng)大鼠1周，然后對(duì)大鼠施行肩胛骨間棕色脂肪組織（brown adipose tissue，BAT）切除，術(shù)后在19 ℃環(huán)境下以高脂飼料（83%基本飼料，15%三酰甘油，2%膽固醇）飼養(yǎng)21 d，第22日皮下多點(diǎn)注射垂體后葉素（10 U/kg），第29日對(duì)大鼠施以中藥。觀察測(cè)量并分別記錄大鼠行為（活動(dòng)度、攝食行為、毛發(fā)改變、體質(zhì)量變化等）、肛溫、體溫、心電圖、心肌單相動(dòng)作電位，以及心率、動(dòng)作電位時(shí)程、動(dòng)作電位0相幅值、動(dòng)作電位50%復(fù)極化時(shí)程、90%復(fù)極化時(shí)程。因心脾陽(yáng)虛包括陽(yáng)虛癥狀（畏寒喜溫、形寒肢冷等）和脾虛癥狀（消瘦、乏力、納少、便溏及腹瀉、脘腹脹痛等）兩大癥狀群，可在實(shí)驗(yàn)中根據(jù)大鼠模型組行為、心電圖、心臟指數(shù)、肛溫，以及體質(zhì)量與對(duì)照組比較，對(duì)差異指標(biāo)進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計(jì)學(xué)分析[6]，依差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，評(píng)價(jià)CHD心脾陽(yáng)虛證動(dòng)物模型是否建立。在CHD中醫(yī)證候中，單純心陽(yáng)虛證在臨床上較少見(jiàn)，多為混合陽(yáng)虛證，如心脾陽(yáng)虛等[7]。中醫(yī)認(rèn)為，心脾陽(yáng)虛多因飲食不節(jié)、寒邪傷陽(yáng)等，致脾胃運(yùn)化失健，遂聚濕生痰，上犯心胸，阻遏心陽(yáng)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)BAT切除術(shù)、注射垂體后葉素、高脂飲食、寒冷刺激的方式，模擬“飲食不節(jié)，寒邪傷陽(yáng)”，使CHD心脾陽(yáng)虛大鼠動(dòng)物模型在病因病機(jī)上更加符合心脾陽(yáng)虛證型。

3 寒凝血瘀證大鼠模型

王氏等[8]先用20%烏拉坦5 mL/kg對(duì)大鼠腹腔注射進(jìn)行麻醉，并將大鼠仰臥固定于鼠臺(tái)，連接生理記錄儀并記錄大鼠標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖，然后經(jīng)口對(duì)大鼠氣管插管，連接動(dòng)物呼吸機(jī)，解剖并分離出股靜脈進(jìn)行靜脈置管，5 s恒速注射注入垂體后葉素（6 U/kg，濃度為2 U/mL），造模30 min后進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)觀測(cè)。觀察測(cè)量并分別記錄大鼠體溫、體征（唇周、爪子、耳朵、尾巴的顏色，大便形態(tài)）、心電圖、微靜脈管徑、紅細(xì)胞流速、6-酮-前列腺素F1α、血漿血栓素B2。將模型組與正常組檢測(cè)指標(biāo)比較，根據(jù)差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義判斷CHD寒凝血瘀證大鼠模型是否建立。

中醫(yī)認(rèn)為，寒主收引，可抑遏陽(yáng)氣，使血行瘀滯?！端貑?wèn)·調(diào)經(jīng)論篇》曰：“厥氣上逆，寒氣積于胸中而不瀉，不瀉則溫氣去，寒獨(dú)留，則血凝泣，凝則脈不通?！毖芯勘砻?，造模大劑量注射垂體后葉素具有寒邪致病特點(diǎn)，提示大鼠因寒邪內(nèi)侵而復(fù)制出的動(dòng)物模型為寒凝血瘀動(dòng)物模型[9]。

4 痰濁血瘀證兔模型

張氏等[10]首先對(duì)雄性家兔以高脂飼料（膽固醇1%、蛋黃粉15%、豬油15%、基礎(chǔ)飼料79%）飼養(yǎng)35 d，第36日采取冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)，以30 mg/kg戊巴比妥腹腔注射，剪毛，常規(guī)消毒，開(kāi)胸，對(duì)冠狀動(dòng)脈左前降支完全結(jié)扎，心電圖監(jiān)測(cè)。觀察測(cè)量并分別記錄實(shí)驗(yàn)前后全血黏度高切變率、全血黏度低切變率、血漿黏度、纖維蛋白原、血清白細(xì)胞介素-6。將模型組與正常組檢測(cè)指標(biāo)比較，根據(jù)差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義判斷CHD痰濁血瘀證兔模型是否建立。中醫(yī)認(rèn)為，過(guò)食肥甘厚味可使脾運(yùn)失健，津液不布，遂聚為痰，痰上擾心胸，致心脈痹阻。本實(shí)驗(yàn)中對(duì)家兔冠狀動(dòng)脈左前降支完全結(jié)扎及高脂喂養(yǎng)，旨在模擬痰阻心胸，血行失暢，脈絡(luò)不利，心脈痹阻，以復(fù)制出痰濁血瘀證動(dòng)物模型。

5 心氣虛證大鼠模型

唐氏等[11]使用近交系Wistar大鼠采取游泳法建模，大鼠靜息狀態(tài)下喂養(yǎng)精飼料5 g/100 g，在水溫25～28 ℃條件下以強(qiáng)迫負(fù)重（大鼠自身質(zhì)量5%）方式游泳至力竭（頭沒(méi)入水下10 s不上?。?，進(jìn)行2次，前后間隔10 min，第18日起在游泳基礎(chǔ)上連續(xù)4 d灌服心得安溶液2.4 mg/100 g。觀察測(cè)量并分別記錄實(shí)驗(yàn)前后大鼠行為狀態(tài)、精神狀態(tài)、體征、左心室動(dòng)力學(xué)指標(biāo)、心臟功能。將模型組與正常組檢測(cè)指標(biāo)比較，根據(jù)數(shù)據(jù)差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判斷CHD心氣虛證大鼠模型是否建立。

心氣虛證是心血管病系統(tǒng)中尤為常見(jiàn)的證型[12]，而且在動(dòng)物模型的構(gòu)建中很難建立無(wú)兼證的心氣虛證模型[13]?！端貑?wèn)·刺志論篇》有“谷盛氣盛，谷虛氣虛”。 “氣為血之帥，血為氣之母”，“氣能行血”，血的正常運(yùn)行有賴(lài)于氣的推動(dòng)及谷氣的充盈，而心臟的正常搏動(dòng)在于氣血的正常運(yùn)行。本實(shí)驗(yàn)在飲食方面只給予大鼠每日基礎(chǔ)需要量，并增加其消耗量，意在模擬“谷虛氣虛”“勞則氣虛”；心得安溶液具有抑制心肌細(xì)胞鈣離子和鈉離子內(nèi)流的作用，也是非選擇性β受體阻斷劑，大劑量或長(zhǎng)期使用可引起心肌缺氧等，實(shí)驗(yàn)中在大鼠力竭運(yùn)動(dòng)后灌服心得安溶液，加重心氣耗損，以復(fù)制出CHD心氣虛證動(dòng)物模型。

6 氣虛血瘀證小型豬模型

在CHD中醫(yī)證候中，氣虛和血瘀證候最為常見(jiàn)[14-16]。該模型首先對(duì)小型豬進(jìn)行麻醉，無(wú)菌條件下肋間開(kāi)胸，于左回旋支冠狀動(dòng)脈放置Ameroid收縮環(huán)，縫合，建立慢性心肌缺血模型[17]。郭氏等[18]在此基礎(chǔ)上觀察并采集術(shù)前正常狀態(tài)及術(shù)后4周的四診信息、心電圖、冠狀動(dòng)脈造影、頸部前腔靜脈血5 mL、超聲心動(dòng)圖，并以此評(píng)價(jià)小型豬血瘀證模型的建立情況。經(jīng)過(guò)觀察，該模型4～8周由血瘀證向氣虛血瘀證證型轉(zhuǎn)變，在8～12周該模型表現(xiàn)為氣虛血瘀證[18-19]。

首先建立慢性心肌缺血小型豬模型，在造模第4周對(duì)小型豬進(jìn)行冠狀動(dòng)脈造影、毒理學(xué)、微球流量、病理組織學(xué)、磁共振掃描檢查，以檢查結(jié)果評(píng)價(jià)是否建立心肌缺血模型[17]；然后參照血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)[20]進(jìn)行診斷，通過(guò)對(duì)比模型組與正常組的四診信息、冠狀動(dòng)脈造影、心電圖、血液流變學(xué)等指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)[18]，通過(guò)數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，判斷血瘀證模型是否建立；8～12周詳細(xì)記錄小型豬動(dòng)態(tài)，采集詳細(xì)四診信息，借助心臟超聲、冠狀動(dòng)脈造影，根據(jù)血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)[20]、中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)[21]及中獸醫(yī)臨床診斷經(jīng)驗(yàn)[22]進(jìn)行評(píng)價(jià)，根據(jù)統(tǒng)計(jì)分析差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義判斷CHD氣虛血瘀證小型豬模型是否建立。

《難經(jīng)·二十二難》曰：“氣主煦之，血主濡之?！敝嗅t(yī)學(xué)有“氣為血之帥，血為氣之母”與“因?qū)嵵绿摗钡睦碚?，氣能生血、行血、攝血，血能養(yǎng)氣、載氣。本實(shí)驗(yàn)首先采用結(jié)扎左回旋支冠狀動(dòng)脈復(fù)制出血瘀證型，然后因脈絡(luò)瘀阻，血行凝滯，瘀血不去，新血不生，留瘀日久，遂心氣痹阻，以致心氣虛損，意在中醫(yī)因?qū)嵵绿摾碚撝笇?dǎo)下復(fù)制出CHD氣虛血瘀證動(dòng)物模型。此模型雖造模時(shí)間較長(zhǎng)，但基本符合中醫(yī)理論中病的發(fā)展傳變規(guī)律，對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)研究具有指導(dǎo)意義。

7 小結(jié)與展望

《難經(jīng)·六十難》說(shuō)：“心之病，有厥痛，有真痛，何謂也……其五臟氣相干，名厥心痛……其痛甚，但在心，手足青者，即名真心痛?！薄督饏T要略·胸痹心痛短氣病脈證治》：“胸痹，心中痞氣，氣結(jié)在胸，胸滿(mǎn)，脅下逆搶心?！逼渲饕C(jī)為心脈痹阻，臨床主要表現(xiàn)為本虛標(biāo)實(shí)，本虛責(zé)之氣虛、氣陰兩虛及陽(yáng)氣虛，標(biāo)實(shí)責(zé)之寒凝、氣滯、痰濁、血瘀，且可相兼為病。CHD中醫(yī)證候表現(xiàn)很多，在研究過(guò)程中需要根據(jù)不同要求建立不同的動(dòng)物模型。

目前較為提倡病證結(jié)合動(dòng)物模型，一般先建立疾病模型，再根據(jù)所需的中醫(yī)證候施予干預(yù)因素，以獲得病證結(jié)合模型[23]。而在中醫(yī)臨床診療中，“證”隨“病”的發(fā)展轉(zhuǎn)歸不斷變化，很難確定所建立的模型是否為所需要的動(dòng)物模型。由于“證”是中醫(yī)特色，與“病”緊密聯(lián)系，因此，在建立中醫(yī)證候動(dòng)物模型過(guò)程中應(yīng)同時(shí)考慮病證結(jié)合，使動(dòng)物模型更加符合臨床實(shí)際。這樣才更符合臨床需要，實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性也才能得到保障。

目前CHD中醫(yī)證候動(dòng)物模型建立尚存在一些問(wèn)題：①動(dòng)物與人及動(dòng)物間的生理機(jī)能方面均存在差異，且性別不同、品系不同的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)造模刺激因素的反應(yīng)不同，相同的處理手段對(duì)不同種類(lèi)、不同年齡的動(dòng)物產(chǎn)生的生理影響也不盡相同。因此，在造模的動(dòng)物選擇上，應(yīng)更注重選擇與人體病理生理特點(diǎn)相近的動(dòng)物，以增加實(shí)驗(yàn)在臨床應(yīng)用上的可靠性。②在中醫(yī)證候動(dòng)物的模型建立評(píng)價(jià)中，缺少符合中醫(yī)特色的評(píng)價(jià)體系，應(yīng)建立規(guī)范的冠心病中醫(yī)證候動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)體系，使CHD中醫(yī)證候動(dòng)物模型的建立更加統(tǒng)一化、規(guī)范化、合理化、穩(wěn)定化。③人和動(dòng)物之間必然存在著差異，動(dòng)物模型只是在一定程度上對(duì)人的病理現(xiàn)象進(jìn)行模擬，不能完全對(duì)等，具體的CHD中醫(yī)證候動(dòng)物模型與臨床實(shí)踐存在一定差距，今后應(yīng)當(dāng)對(duì)CHD中醫(yī)證候動(dòng)物模型做進(jìn)一步深入研究，使CHD中醫(yī)證候動(dòng)物模型更符合中醫(yī)病因病機(jī)要求，接近人體生理病理特點(diǎn)，符合臨床需要，為臨床應(yīng)用打好基礎(chǔ)。

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