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    肝細(xì)胞肝癌患者外周血中T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的變化

    2016-07-28 01:33:26李曉云于曉輝王維戴飛武承鳳孫延榮
    肝臟 2016年5期
    關(guān)鍵詞:外周血肝硬化機(jī)體

    李曉云 于曉輝 王維 戴飛 武承鳳 孫延榮

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    肝細(xì)胞肝癌患者外周血中T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞的變化

    李曉云于曉輝王維戴飛武承鳳孫延榮

    730050甘肅蘭州蘭州軍醫(yī)蘭州總醫(yī)院醫(yī)務(wù)部(李曉云,孫延榮),消化科(于曉輝,王維,武承鳳),統(tǒng)計室(戴飛)

    【摘要】目的探討肝細(xì)胞肝癌(HCC)外周血中T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞含量的變化,進(jìn)一步了解HCC患者的免疫功能狀況。方法收集181例HCC患者作為試驗組,其中小HCC 39例、中等HCC 64例、大HCC 46例、巨塊型HCC 32例;有肝硬化基礎(chǔ)的HCC 150例,其中乙型肝炎肝硬化96例、丙型肝炎肝硬化49例、酒精性肝硬化3例、自身免疫性肝硬化2例。無肝硬化基礎(chǔ)的HCC 31例,其中乙型肝炎病毒感染20例、丙型肝炎病毒感染8例、無原因的3例。對150例有肝硬化基礎(chǔ)的患者按Child-Pugh分成A、B、C三級,其中A級37例、B級47例、C級66例。選擇46名健康人群作為正常對照組。采用流式細(xì)胞儀檢測兩組患者血清中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量。結(jié)果隨著HCC體積的增大,外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量明顯降低,而CD8+T細(xì)胞含量升高,與正常對照組比較,其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);有肝硬化基礎(chǔ)的HCC患者,隨著Child-Pugh分級的增加, CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量也明顯降低,而CD8+T細(xì)胞含量升高,與正常對照組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論HCC患者的T細(xì)胞和NK細(xì)胞的變化不但與腫瘤大小相關(guān),還與HCC的肝硬化背景及分級相關(guān)。HCC患者機(jī)體免疫狀況的變化,對判斷HCC患者的免疫功能、病情及預(yù)后具有重要的臨床意義。

    【關(guān)鍵詞】肝細(xì)胞肝癌;CD3+T細(xì)胞;CD4+T細(xì)胞;CD8+T細(xì)胞;NK細(xì)胞

    肝細(xì)胞肝癌(HCC)在我國是惡性腫瘤導(dǎo)致死亡的主要疾病之一。HCC多有病毒性肝炎背景,而病毒性肝炎患者多存在免疫功能紊亂等狀況,如T淋巴細(xì)胞亞群比例失調(diào),容易并發(fā)嚴(yán)重的繼發(fā)感染,加重肝功能損害易導(dǎo)致病情惡化或死亡。本研究就針對181例HCC患者外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量進(jìn)行檢測,從而進(jìn)一步了解HCC的大小、肝硬化背景與患者機(jī)體免疫狀況的關(guān)系,對指導(dǎo)臨床治療、病情評估及預(yù)后具有重要參考價值。

    資料和方法

    一、一般資料

    全部病例來源于2005年11月-2015年11月蘭州軍區(qū)蘭州總醫(yī)院消化科、肝膽外科及腫瘤科的住院患者,收集181例HCC患者作為試驗組,其中小HCC 39例、中等HCC 64例、大HCC 46例、巨塊型HCC 32例。有肝硬化基礎(chǔ)的HCC 150例,其中乙型肝炎肝硬化96例、丙型肝炎肝硬化49例、酒精性肝硬化3例、自身免疫性肝硬化2例。無肝硬化基礎(chǔ)的31例,其中乙型肝炎病毒感染20例、丙型肝炎病毒感染8例、無原因的3例。對150例有肝硬化基礎(chǔ)的患者按Child-Pugh分成A、B、C三級,其中A級37例、B級47例、C級66例。試驗組男101例,女39例,年齡25~79歲,平均年齡(50.0±7.5)歲。選擇46名健康人群作為正常對照組,男38例,女8例,年齡20~61歲,平均年齡(48.0±6.3)歲。所有患者均排除患有其他疾病,如糖尿病、腎病、硬皮病等;對照組系在消化科工作的醫(yī)護(hù)人員志愿者,均無心、肝、腎等重要臟器疾患,無肝炎、血吸蟲病史。

    二、儀器

    FACS Cali bur 流式細(xì)胞儀為美國Becton- Kickin-son (BD) 公司生產(chǎn),激發(fā)波長188 nm。

    三、試劑

    鼠IgG1-FITC/Ig GPE (陰性對照),CD4-FITC/CD8-PE,CD3-FLTC,pH7.2磷酸鹽緩沖溶液(PBS),均為北京中衫金橋公司產(chǎn)品。

    四、方法

    所有患者均在晨起空腹抽取靜脈血5 mL 管,以EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二鈉) 抗凝,利用 FACS Calibur流式細(xì)胞儀及 Cell Quest 軟件(均由 BD 公司提供)對血樣進(jìn)行測定和分析。

    五、統(tǒng)計學(xué)處理

    結(jié)果

    隨著HCC體積增大及Child-Pugh分級增加,外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量明顯降低,而CD8+T細(xì)胞含量升高,與正常對照組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。但小HCC和Child-Pugh A級患者外周淋巴細(xì)胞含量與正常對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1和表2。

    討論

    HCC占原發(fā)性肝癌的90%以上, 其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)居第6位,而死亡率高居第3 位[1]。我國HCC的發(fā)病人數(shù)約占全球的50%以上[2]。HCC起病隱匿、早期臨床癥狀不顯著,大部分HCC確診時已進(jìn)展至中晚期,已失去根治性手術(shù)治療時機(jī),多選擇微創(chuàng)介入或保守性病灶切除聯(lián)合化療、放療等姑息性治療措施,以期能夠提高生存率,改善患者預(yù)后。在患者病程中有較多因素可影響預(yù)后,如肝臟原發(fā)病灶大小、肝功能Child-Pugh分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及血管浸潤,同時機(jī)體免疫狀況變化對HCC的療效和預(yù)后也有重要影響[3]。

    正常情況下,機(jī)體的免疫監(jiān)控機(jī)制可消滅大多數(shù)異常的細(xì)胞。而HCC在生長過程中會釋放多種細(xì)胞因子,這些細(xì)胞因子能夠減弱或阻斷機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的免疫識別、清除,獲得免疫逃逸能力,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長、增殖,腫瘤細(xì)胞增殖進(jìn)而分泌更多的細(xì)胞因子影響機(jī)體免疫功能,通過多種手段調(diào)控機(jī)體的免疫應(yīng)答[4]。淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成成分,在免疫反應(yīng)過程中各司其職,維持正常的免疫功能,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中既有殺傷型免疫細(xì)胞,如NK 細(xì)胞、CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞能直接或通過分泌細(xì)胞因子殺傷腫瘤細(xì)胞,抑制腫瘤生長;也有某些抑制型免疫細(xì)胞,如CD8+T細(xì)胞不但不能清除腫瘤細(xì)胞,反而在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中抑制其他效應(yīng)細(xì)胞的抗腫瘤作用[5]。研究表明HCC患者外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量明顯減低,CD8+T細(xì)胞的數(shù)量卻顯著升高,經(jīng)射頻消融或手術(shù)治療后檢測發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞的數(shù)量較治療前有所增加,CD8+T細(xì)胞的數(shù)量減低,CD4+T/CD8+T也有升高[6]。同樣,臨床研究[7-11]顯示在肺癌、乳腺癌、卵巢癌患者外周血及胃腸腫瘤患者腹水中CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞增加與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān),CD8+T細(xì)胞減少也與病情相關(guān),在治療過程中監(jiān)測可發(fā)現(xiàn)CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量逐漸升高,而CD8+T細(xì)胞數(shù)量減少。研究表明[12-13],特異性阻斷CD8+T細(xì)胞表達(dá)可增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫能力,提示CD8+T細(xì)胞可作為腫瘤免疫治療的新靶點。

    表1 HCC患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的檢測結(jié)果(±s)

    注:*P<0.05,▲P>0.05 (*表示中等、大及巨塊HCC與正常對照組比較,▲表示小HCC與正常對照組比較)

    表2 Child-Pugh分級的HCC患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的檢測結(jié)果(±s)

    注:*P<0.05,▲P>0.05 (*表示Child-Pugh B、C級肝硬化與正常對照組比較,▲表示Child-Pugh A級肝硬化與正常對照組比較)

    本研究顯示隨著HCC病灶的增大及Child-Pugh分級的增加,外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的含量明顯降低,而CD8+T細(xì)胞含量升高,與正常對照組比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。但小HCC和Child-Pugh A級患者外周淋巴細(xì)胞含量與正常對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。HCC病灶越大腫瘤細(xì)胞數(shù)量更大,分泌更多的細(xì)胞因子影響機(jī)體免疫調(diào)控,使得CD4+T細(xì)胞和NK細(xì)胞數(shù)量減低,而CD8+T細(xì)胞含量升高,進(jìn)一步加劇了機(jī)體失調(diào)的免疫調(diào)控機(jī)制,加重免疫損傷,進(jìn)而可能促進(jìn)病情進(jìn)展。Child-Pugh分級B、C級患者肝功能差,機(jī)體免疫力低下,免疫功能紊亂表現(xiàn)更為顯著,CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞數(shù)量發(fā)生改變,也能發(fā)揮免疫逃逸作用,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長、增殖。而通過調(diào)節(jié)免疫功能的輔助治療在一定程度上有助于減輕HCC患者肝臟免疫損傷,改善肝功能,進(jìn)而可能提高其治療有效率、生存率,改善預(yù)后等。因此除外目前手術(shù)、介入、化療及放療等治療方法,免疫治療也是一種重要的輔助治療手段。

    綜上所述,HCC的發(fā)生、發(fā)展、治療及預(yù)后均與機(jī)體免疫調(diào)控密切相關(guān),消除HCC患者體內(nèi)抑制性T細(xì)胞如CD8+T細(xì)胞在腫瘤患者的異常增殖,消除其抗腫瘤免疫作用將成為免疫治療領(lǐng)域的重要研究方向,免疫治療的重要性不可忽視,因此需要開展進(jìn)一步實踐與研究,以期獲得更為確切及規(guī)范的治療,為 HCC患者生存及預(yù)后提供更多保障。

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    (本文編輯:賴榮陶)

    通信作者:于曉輝,Email: yuxiaohui528@126.com

    (收稿日期:2014-12-10)

    ·臨床與基礎(chǔ)研究·

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