HPLC法測定丹參配方顆粒丹參酮ⅡA含量*

戴淑娟，韓玲玲

(1.安徽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，安徽 合肥 230061；2.安徽省食品藥品檢驗所，安徽 合肥 230051)

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HPLC法測定丹參配方顆粒丹參酮ⅡA含量*

戴淑娟1，韓玲玲2

(1.安徽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，安徽 合肥 230061；2.安徽省食品藥品檢驗所，安徽 合肥 230051)

摘要:目的：利用HPLC法對丹參配方顆粒中丹參酮ⅡA的實際含量進行精確測定.實驗條件：選用高效液相色譜法測定，分離條件為Agilent Zorbax SB-C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，甲醇-水(75：25)為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長為270nm.結(jié)果：丹參酮ⅡA的線性范圍為8.03～41.0 μg·mL-1(r=0.999 2)，平均加樣回收率為97.3%(RSD=1.04%).結(jié)論：HPLC法不僅便于操作、且靈敏度強，在調(diào)控丹參配方顆粒含量方面發(fā)揮相關(guān)作用.

關(guān)鍵詞:丹參配方顆粒；丹參酮ⅡA；含量

丹參又名赤參，紫丹參，紅根等.為雙子葉植物唇形科，干燥根極根莖.丹參具有祛瘀止痛、通經(jīng)止痛、清心除煩活血調(diào)經(jīng)、養(yǎng)血安神等功效[1-3]，其主要成分有丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮I、丹酚酸等.丹參配方顆粒主要具有三大優(yōu)點：一是生產(chǎn)自動程度高；二是制作條件穩(wěn)定；三是基本不受人為因素影響，當前在臨床實踐診治活動中，應(yīng)用度較高[4].現(xiàn)代研究證明：丹參酮ⅡA有抗血栓、降低血脂、改善微循環(huán)等心血管治療方面的突出作用.因此，在本研究課題中，擬通過比較先進成熟的HPLC法[5]對丹參配方顆粒中丹參酮ⅡA的實際含量進行精準度量.此測定方法不僅便于操作，且靈活性強，可在調(diào)控丹參配方顆粒含量方面發(fā)揮重要作用.

1儀器與試藥

1.1儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，ChemStation色譜工作站；CP225D電子天平(德國Sartorious公司)；DL-180型號的超聲波清洗器(產(chǎn)自上海之信電器公司).

1.2試藥

丹參酮ⅡA對照品(批號0786-200802，中國藥品生物制品檢定所)；丹參配方顆粒(廣東，批號1207021、1207023、1207017)；色譜甲醇.

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：甲醇-水(75：25)；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測波長：270nm；進樣量：10μL.

2.2對照品溶液的配制

精準稱定定量的丹參酮ⅡA對照品，將其放于容積為25mL的容量瓶內(nèi)，往容量瓶內(nèi)加入適量甲醇相溶，然后稀釋至所需濃度(41μg·mL-1)的標準品溶液.

2.3供試品溶液的制備

將丹參配方顆粒細細研磨至顆粒均勻，精準稱取一定質(zhì)量的粉末(約等同于1g飲片)，將其放于錐形瓶內(nèi)，然后立即注入25mL甲醇，密封稱重， 超聲20 min后冷卻處置，再添加適量甲醇以達到所需重量，輕輕搖勻之后進行過濾.將續(xù)濾液通過0.45μm標準的微孔濾膜仔細過濾，方可獲取供試品溶液.

2.4線性關(guān)系考察

分別精準量取0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1.0mL的參照品溶液置放在容量為5mL的容量瓶內(nèi)，然后向瓶內(nèi)注入甲醇，并定容于標準刻度，輕輕搖勻，最后，成功獲取5個不同濃度的混合的對照品溶液.根據(jù)色譜條件及要求，用所測色譜峰的峰面積(A)向?qū)Υ郎y物濃度(C)進行線性回歸處理，進而獲取丹參酮ⅡA的回歸方程為A=86.03C-49.43，r=0.9992，線性范圍：8.03～41.0μg·mL-1.

2.5精密度試驗

將1份供試品溶液進行5次進樣，并記錄待測組分色譜峰的峰面積，測得丹參酮ⅡA的峰面積RSD為0.83%，這表示該色譜設(shè)備具有較佳的精密性.

2.6穩(wěn)定性試驗

將1份供試品溶液，存放于同等溫度環(huán)境中，于5個不同時段(0h，2h，4h，8h，24 h)分5次進樣，其峰面積(A)的RSD是1.89%，表示于24h內(nèi)，供試品溶液性質(zhì)平穩(wěn).

2.7重復(fù)性試驗

取同一批丹參配方顆粒粉末平均分成5份，每份適量，制成供試品溶液，測得丹參酮ⅡA的峰面積(A)的RSD為1.61%，說明同一批丹參配方顆粒粉末具有較好的重復(fù)性.

2.8加樣回收率試驗

按照要求精密稱取6份已測定含量的丹參配方顆粒，根據(jù)1:1的比例標準，遵照操作流程添加丹參酮ⅡA對照品.然后根據(jù)本實驗中供試品溶液的要求配制供試品溶液，并在完成產(chǎn)品總量測定的基礎(chǔ)上計算具體回收率.具體詳見表1.丹參酮ⅡA的回收率為97.3%(RSD=1.04%).

表1　加樣回收率實驗(n=6)

表2　丹參酮ⅡA的含量測定結(jié)果(n=3)

2.9樣品含量測定

精密稱定三批丹參配方顆粒粉末，按照上述色譜條件和溶液配制方法制備供試品溶液，測定峰面積的，通過外標法對丹參酮ⅡA成分的具體含量進行計算，其色譜圖信息可參見圖1，含量測定結(jié)果見表2.由表2可知，三批配方顆粒丹參酮ⅡA的平均含量為0.012 mg·g-1，相當于原藥材含量的0.001%.

圖1　丹參配方顆粒HPLC色譜圖

3討論

依據(jù)2010年版中國藥典，按丹參藥材換算，原藥料含丹參酮ⅡA不得少于0.20%，而本實驗三批供試品均未達到要求，表明脂溶性成分在提取過程中嚴重丟失，后續(xù)的實驗中我們將對此問題進行進一步研究.

在色譜條件篩選實驗中，本文對樣品的提取方法、提取時間、流動相比例流速、檢測波長等多方面進行考察，結(jié)果表明甲醇超聲提取樣品30min，甲醇-水(75：25)為流動相，流速1.0mL/min,檢測波長為270nm.得到的色譜峰峰型、各峰分離度均較理想.

本實驗建立了一種丹參配方顆粒中丹參酮ⅡA的定量分析方法.此方法不僅操作簡單，重現(xiàn)性良好且擁有比較理想的精密度，為嚴格管理藥品相關(guān)成分的質(zhì)量提供了有效手段，為臨床實踐診治活動提供一定的方法指導(dǎo).

參考文獻：

[1]張克良，王繼者.丹參的作用與用途[J].新中醫(yī)，1983：11.

[2]陳向榮，陸京伯，等.丹參的藥理作用研究新進展[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2001(1)：97..

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部) [S]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社, 2010:70.

[4]姚煥英,趙寧霞,等.配方顆粒臨床利弊點滴談[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥, 2010,26(1):26.

[5]謝勝新.HPLC法測定丹參和丹參配方顆粒中丹參酮ⅡA的含量的研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2004，38(12)：52-53.

(責(zé)任編輯:王海波)

Determination of Tanshinone IIA in Salvia Miltiorrhiza Granules by HPLC

DAI Shu-juan1,HAN Ling-ling2

(1.AnhuiMedicalCollege,Hefei,Anhui230031,China;2.AnhuiInstituteforDrugControl,Hefei,Anhui230031,China)

Abstract:Objective:In order to establish an accurate and practical HPLC method for determinating the math of Tanshinone IIA in Salvia Miltiorrhiza Granules the HPLC methocl is used．Methods：Chromatographic separation was operated on an Agilent Zorbax SB-Cl8 column(250mm×4.6mm，5μm)with mobile phase of methanol(It's ratio IS 75:25),water solution at a flow rate of 1.0 mL/min and a column temperature of 22℃．The eluted analytes were detected by on-1ine UV detector whose wavelength was set at 270 nm．Results：The calibration curves of Tanshinone IIA was linear over the ranges of 8.03～41.0 μg/mL-1(r=0.999 2)，and the average recoveries was 97.3%(RSD=1.41%)．Conclusion：The established method is simple，rapid，reliable and can be used for drug contro1．It is meaningful for using in Clinical practice.

Key words:Salvia Miltiorrhiza Granules; Tanshinone IIA; Content

DOI:10.13877/j.cnki.cn22-1284.2016.06.007

*收稿日期：2016-05-04

基金項目：安徽省高等學(xué)校省級自然科學(xué)研究項目“牡丹皮配方顆粒制備方法及質(zhì)量控制”(KJ2012Z204)

作者簡介：戴淑娟，碩士研究生，講師.

中圖分類號：R-33

文獻標志碼：A

文章編號：1008-7974(2016)03-0018-03