抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸對糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的保護作用

陳　玲，張小玲，郝　揚，史　強，王　靜，張富軍，王寶英

(1. 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼科，陜西西安　710061；2. 西安市兒童醫(yī)院眼科，陜西西安　710004；3. 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部，陜西西安　710061)

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◇基礎(chǔ)研究◇

抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸對糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的保護作用

陳玲1,2，張小玲1，郝?lián)P1，史強1，王靜1，張富軍3，王寶英3

(1. 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院眼科，陜西西安710061；2. 西安市兒童醫(yī)院眼科，陜西西安710004；3. 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部，陜西西安710061)

摘要：目的探討抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(N- acetylcysteine, NAC)對糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的保護作用。方法選用健康成年Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠(2月齡)60只，體質(zhì)量180～220 g。隨機分組為正常對照組(CON組，20只)和糖尿病組(DM組，40只)。采用腹腔注射10 g/L的鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)溶液(60 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型，血糖≥16.7 mmol/L者視為糖尿病大鼠動物模型成功(32只)，CON組注射等量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液。將糖尿病大鼠模型隨機分為糖尿病1月組和糖尿病2月組，每組16只。每只糖尿病模型大鼠左眼設(shè)定為糖尿病對照組(D組)，右眼設(shè)定為NAC治療組(NAC組)。糖尿病大鼠病程2周時，NAC組玻璃體腔注射4 μL(1.6 μg/μL)NAC，其余糖尿病大鼠玻璃體腔注射4 μL 0.01 mmol/L的PBS。HE染色觀察視網(wǎng)膜外核層厚度變化；透射電鏡觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的超微結(jié)構(gòu)變化；免疫熒光法檢測視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的數(shù)量。結(jié)果在不同的時間點上NAC組較D組視網(wǎng)膜外核層厚度增加(P<0.01)；而NAC組與CON組視網(wǎng)膜外核層厚度沒有明顯差異(P>0.05)。透射電鏡下NAC組較D組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞中細胞器多，細胞質(zhì)電子密度高，線粒體腫脹較輕；而NAC組與CON組相比視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞超微結(jié)構(gòu)無明顯差異。在不同的時間點上NAC組較D組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量增加(P<0.01)；而NAC組與CON組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量沒有明顯差異(P>0.05)。結(jié)論抗氧化劑NAC對糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜神經(jīng)組織有保護作用。

關(guān)鍵詞：抗氧化劑；N-乙酰半胱氨酸；糖尿?。灰暰W(wǎng)膜神經(jīng)組織；大鼠

糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病最為常見和嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，已經(jīng)成為全球性四大主要致盲原因之一，預(yù)計到2030年全球約有3億DR患者[1]。長期以來，人們認(rèn)為DR的主要病理改變?yōu)槲⒀軗p害，并把糖尿病血管損害作為其特征性表現(xiàn)[2-3]。近年來，隨著研究的進一步深入和技術(shù)水平的不斷提高，發(fā)現(xiàn)除了微血管損害外，DR還是一種神經(jīng)組織的慢性退行性病變，并且在糖尿病初期即可發(fā)生，早于視網(wǎng)膜微血管病變。糖尿病早期，視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的損害主要表現(xiàn)在視網(wǎng)膜神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的功能損害。當(dāng)出現(xiàn)上述改變時，視網(wǎng)膜微血管超微結(jié)構(gòu)無變化，提示視網(wǎng)膜神經(jīng)損害發(fā)生在微血管損害之前[4-5]。KERN[6]等認(rèn)為糖尿病大鼠在發(fā)病8周時可以加速視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的減少?？寡趸瘎㎞-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)具有抑制糖尿病視網(wǎng)膜新生血管生成的作用[7]。然而，NAC對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)組織的作用則鮮有報道。本實驗通過建立糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜神經(jīng)組織損傷的模型，探討NAC對糖尿病大鼠早期視神經(jīng)組織的保護作用。

1材料與方法

1.1實驗動物及分組選用健康成年Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠(2月齡)60只，體質(zhì)量180～220 g，購自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心。根據(jù)隨機分組的原則，分為正常對照組(CON組，20只)和糖尿病組(DM組，40只)。DM組大鼠禁食12 h后，一次性左下腹腔注射10 g/L的鏈脲佐菌素(streptozotocin, STZ)溶液(60 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型，72 h后，斷尾取血，檢測血糖，血糖≥16.7 mmol/L者視為糖尿病大鼠動物模型成功，成模率為80%(32只)。CON組腹腔注射等量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液。將糖尿病模型大鼠隨機分為糖尿病1月組(DM1)和糖尿病2月組(DM2)，每組16只，將每一只糖尿病模型大鼠左眼設(shè)定為糖尿病對照組(D組)，右眼設(shè)定為NAC治療組(NAC組)。糖尿病大鼠病程2周時，對NAC組大鼠玻璃體腔注射NAC 4 μL(1.6 μg/μL)，D組大鼠則給予玻璃體腔注射等量0.01 mmol/L的PBS，每周1次，連續(xù)注射2次。不限飲食、飲水，分組喂養(yǎng)。糖尿病病程1月及2月時，每組各取8只大鼠(8只眼)，以100 g/L水合氯醛腹腔注射麻醉處死大鼠，摘除眼球，制備標(biāo)本。

1.2樣本處理和HE染色將眼球角膜距角鞏緣0.5 mm針刺定位，固定脫水后常規(guī)包埋，根據(jù)針刺定位點過視神經(jīng)垂直于子午線平面切成5 μm厚的切片。每只眼選擇5張切片，進行形態(tài)學(xué)觀察；同時每張切片分別于視盤上緣2.5個視盤直徑處選取2個視野，隨后每隔270 μm選取一個視野，每張切片共選取5個視野，測量視網(wǎng)膜外核層厚度，取平均值。

1.3透射電鏡標(biāo)本的制備將摘取的標(biāo)本置于預(yù)冷的25 g/L戊二醛固定液中，于4 ℃固定2 h后，沿角膜緣剪開眼球，去除眼前節(jié)及玻璃體，僅剩眼杯后復(fù)置于固定液中固定過夜。次日取出復(fù)置于25 g/L戊二醛固定液中2 h，0.1 mol/L磷酸緩沖液浸洗30 min，10 g/L四氧化鋨固定液4 ℃后固定2 h。0.1 mol/L磷酸緩沖液浸洗10 min，乙醇梯度脫水，環(huán)氧丙烷置換10 min。環(huán)氧樹脂EPON812浸透、包埋，聚合后作半超薄切片1～2 μm。日本日立H-600透射式電子顯微鏡下觀察、拍照。

1.4視網(wǎng)膜組織Thy-1.1表達的測定采用免疫熒光法檢測，按照說明書操作。兔抗大鼠Thy-1.1(CD90)多克隆抗體購于北京博奧森，工作濃度1∶50；FITC標(biāo)記山羊抗兔IgG購于北京博奧森，工作濃度1∶200。

2結(jié)果

2.1大鼠體質(zhì)量及血糖的變化糖尿病病程1、2月時，分別測量大鼠體質(zhì)量及血糖。與對照組相比，糖尿病病程1、2月時，糖尿病組體質(zhì)量明顯減輕、血糖明顯升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，表1)。

表1各組大鼠體質(zhì)量及血糖比較

Tab.1Comparison of the weight and blood glucose among the groups

組別n體質(zhì)量(g)血糖(mmol/L)CON18347.63±4.756.04±0.29DM18268.63±26.73*24.42±2.86*CON28403.38±10.786.04±0.29DM28335.63±29.17*26.94±2.15*

與同時間點對照組比較，*P<0.01。CON：對照組；DM：糖尿病組；1、2分別為1月、2月。

2.2視網(wǎng)膜外核層的厚度正常對照1月、2月組大鼠視網(wǎng)膜視桿細胞內(nèi)外節(jié)排列規(guī)則，視網(wǎng)膜外核層(the outer nuclear layer of retina, ONL)厚度分別為(50.28±1.20)μm、(49.41±1.24)μm，細胞排列緊密，數(shù)目較多，內(nèi)外核層界限清楚。NAC 1月、2月組大鼠視網(wǎng)膜視桿細胞內(nèi)外節(jié)排列也較規(guī)則，ONL厚度分別為(51.52±2.99)μm、(48.83±3.54)μm。D 1月、2月組大鼠視網(wǎng)膜視桿細胞內(nèi)外節(jié)較同一時間點正常組、NAC組排列稍紊亂，ONL排列稍紊亂且厚度變薄，分別為(39.05±2.85)μm、(34.18±3.33)μm，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，圖1、圖2)。

圖1各組不同時間點視網(wǎng)膜ONL平均厚度的比較

Fig.1 Comparison of mean ONL thickness among the groups

與同一時間點正常對照組比較，*P<0.01；與同一時間點D組比較，#P<0.01。

圖2各組不同時間點視網(wǎng)膜組織的形態(tài)學(xué)改變

Fig.2 Morphological changes of retina tissues at different time points in each group (×40)

A：正常對照1月組；B：NAC 1月組；C：糖尿病對照1月組；D：正常對照2月組；E：NAC 2月組；F：糖尿病對照2月 組。GCL：神經(jīng)節(jié)細胞層；IPL：內(nèi)網(wǎng)層；INL：內(nèi)核層；OPL：外網(wǎng)層；ONL：外核層。

2.3視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞超微結(jié)構(gòu)的變化正常對照1月組及2月組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的超微結(jié)構(gòu)類似，電鏡下可見神經(jīng)節(jié)細胞中正常的細胞質(zhì)、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，細胞器數(shù)量較多，胞質(zhì)的電子密度高，線粒體結(jié)構(gòu)正常、無腫脹，可見線粒體嵴(圖3、圖4A、B、C)。而糖尿病1月組電鏡下可見神經(jīng)節(jié)細胞中細胞質(zhì)小片溶解區(qū)，胞質(zhì)電子密度低，線粒體腫脹，線粒體嵴模糊不清、變短、(圖3 D、E、F)。糖尿病2月組電鏡下可見神經(jīng)節(jié)細胞胞質(zhì)大片溶解區(qū)，空泡變性，胞質(zhì)纖維化，電子密度更低，細胞器減少明顯，線粒體更加腫脹且腫脹的線粒體數(shù)目增多，線粒體嵴更加模糊不清、甚至消失(圖4D、E、F)。NAC1、2月組電鏡下結(jié)構(gòu)與正常對照組相似，可看到正常的細胞器結(jié)構(gòu)及大量的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，線粒體無腫脹，線粒體嵴清晰可見(圖3、圖4G、H、I)。

圖3各組病程1月時視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的超微結(jié)構(gòu)的變化

Fig.3 Changes of retinal ganglion cell ultrastructure in rats at one month of diabetes (A, D, G: ×5 000; B, E, H: ×20 000; C, F, I: ×30 000)

A、B、C：正常對照1月組；D、E、F：糖尿病1月組；G、H、I：NAC 1月組。

2.4視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量的變化正常對照組1月、2月大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞排列規(guī)則、緊密，數(shù)量較多，分別為(25.50±4.18)個、(24.00±1.60)個。NAC組1月、2月大鼠視網(wǎng)膜視桿細胞內(nèi)外節(jié)排列也較規(guī)則、緊密，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量分別為(22.88±3.56)個、(23.25±3.84)個。D組1月、2月大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量較同一時間點正常對照組、NAC組排列稍紊亂，數(shù)量減少，分別為(8.00±2.00)個、(4.50±1.60)個，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，圖5、圖6)。

3討論

長期以來，人們認(rèn)為糖尿病的主要病理改變?yōu)槲⒀軗p害，對糖尿病的病理損害的研究主要集中在視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞和周細胞組成的微血管損害上。近年來研究發(fā)現(xiàn)，DR發(fā)生在糖尿病初期，主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的功能損害。大量研究顯示，NAC抗氧化應(yīng)激對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜血管具有保護作用[7]。然而NAC對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的作用尚不清楚。

本實驗采用STZ誘導(dǎo)建立糖尿病大鼠模型，應(yīng)用HE染色、透射電鏡、免疫熒光的方法從形態(tài)學(xué)觀察糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的變化。HE染色發(fā)現(xiàn)，糖尿病1月時，視網(wǎng)膜神經(jīng)組織已經(jīng)發(fā)生病理變化，主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜外核層變薄、排列疏松；而正常對照組與NAC組視網(wǎng)膜外核層厚度無明顯變化。提示NAC對早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)組織有保護作用。透射電鏡下觀察到糖尿病病程1個月時，與正常對照組及NAC組相比，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)生了比較明顯的變化，主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞胞質(zhì)減少，胞質(zhì)電子密度減低，細胞器減少，尤以線粒體減少明顯，線粒體腫脹，線粒體嵴開始變短、模糊不清。糖尿病病程2個月時與正常對照組及NAC組相比，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞超微結(jié)構(gòu)的改變更加明顯，在病程1個月的基礎(chǔ)上又出現(xiàn)了視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞胞質(zhì)大片溶解區(qū)，胞質(zhì)纖維化，細胞器大量減少，線粒體腫脹，線粒體嵴消失。上述變化與文獻報道一致[8]。MOORE等[9]在研究糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞時，也發(fā)現(xiàn)在糖尿病1月時大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞已發(fā)生損傷，與本實驗研究結(jié)果一致。NAC 1、2月組與正常對照1、2月組相比視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的超微結(jié)構(gòu)無明顯變化，提示NAC對糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞具有保護作用。Thy-1.1是存在于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞胞膜或胞體上的一種特異性的糖蛋白。BARNSTABLE等[10]研究發(fā)現(xiàn)Thy-1.1(CD90)是嚙齒動物視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的特異性標(biāo)記物。本研究結(jié)果顯示，糖尿病大鼠1、2月時，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞較正常對照組分別減少約60%、80%，而NAC 1、2月組與正常對照組相比均沒有差異。同樣LIU等[11]在研究糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞中也得出相似的結(jié)果。提示NAC的抗氧化應(yīng)激對糖尿病大鼠早期視網(wǎng)膜神經(jīng)組織具有保護作用。

圖4各組病程2月時視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的超微結(jié)構(gòu)改變

Fig.4 Changes of retinal ganglion cell ultrastructure in rats at two months of diabetes (A, D, G: ×5 000; B, E, H: ×20 000; C, F, I: ×30 000)

A、B、C：正常對照2月組；D、E、F：糖尿病2月組；G、H、I：NAC 2月組。

糖尿病引起的視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的病變，除了高血糖的影響外，視神經(jīng)周圍血管的低灌注以及缺血缺氧引起的神經(jīng)營養(yǎng)因子供給減少等原因可能是其發(fā)生發(fā)展的主要原因之一。在用高糖培養(yǎng)的視網(wǎng)膜細胞中及糖尿病動物模型、糖尿病患者的血液中均可檢測到活性氧量的增多，而在正常情況下，體內(nèi)的活性氧可以被一些抗氧化的防御系統(tǒng)所清除[12-13]。糖尿病時，由于體內(nèi)血糖的增高，這些抗氧化酶類活性減低、抗氧化防御系統(tǒng)崩潰，加劇了氧化應(yīng)激對機體組織的損傷。NAC是一種含巰基的抗氧化劑，具有干擾自由基生成，清除自由基，調(diào)節(jié)細胞代謝活性和細胞凋亡程序等作用。體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)NAC能提高紅細胞、肝臟組織和肺組織中細胞內(nèi)的谷胱甘肽水平[14]。體外實驗亦發(fā)現(xiàn)細胞在含有NAC的生長介質(zhì)中具有很強的攝取NAC的能力，并可利用它進行谷胱甘肽合成[15]。

圖5免疫熒光法檢測各組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞

Fig.5 The retinal ganglion cells measured by immunofluorescence (×40)

圖中箭頭所指為顯色的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的胞膜及樹突。A、D：正常對照1、2月組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞熒光強，且排列規(guī)則、緊密、整齊，數(shù)量多；B、E：NAC 1月組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞熒光強度及細胞數(shù)量、排列規(guī)則及緊密程度與正常對照組相似；C、F：糖尿病1、2月組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞熒光強度較同時間點正常對照組及NAC組弱，且細胞排列疏松、不規(guī)則、不緊密。

圖6各組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞(GCL)數(shù)量的比較

Fig.6 Comparison of the counts of retinal ganglion cells among the groups

與同時間點正常對照組比較，*P<0.01；與同時間點D組比較，#P<0.01。

本研究結(jié)果顯示糖尿病大鼠早期，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)量減少，視網(wǎng)膜外核層厚度變薄，外核層細胞排列疏松且不規(guī)則，并隨病程的延長呈現(xiàn)加劇的變化趨勢。給予NAC，外源性補充抗氧化物質(zhì)對內(nèi)源性的視網(wǎng)膜抗氧化系統(tǒng)也有加強保護作用，使糖尿病引起的視網(wǎng)膜神經(jīng)組織氧化損傷減輕，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞及視網(wǎng)膜外核層細胞丟失減少，從而對視網(wǎng)膜神經(jīng)組織起到保護的作用。其作用機制可能是：①具有清除視網(wǎng)膜組織中活性氧并且抵御氧化應(yīng)激的作用；②降低血管內(nèi)皮生長因子等在視網(wǎng)膜組織中過量的表達；③提高機體內(nèi)谷胱甘肽的含量，有效地清除體內(nèi)多余的活性氧,對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞起保護作用；④NAC通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因的變化達到抑制細胞凋亡的目的，從而對視網(wǎng)膜神經(jīng)組織起到保護作用[16]。當(dāng)然，NAC除了具有清除活性氧自由基、抵抗氧化應(yīng)激外，還有廣泛的生物學(xué)作用。因此NAC發(fā)揮視網(wǎng)膜神經(jīng)組織的保護作用可能還涉及其他相關(guān)機制，有待進一步深入研究。

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(編輯邱芬)

收稿日期：2015-08-31修回日期：2016-03-29

基金項目：陜西省科技計劃項目資助(No.S2012SF2511)

通訊作者：張小玲. E-mail:zhangxle@mail.xjtu.edu.cn

中圖分類號：R774.1

文獻標(biāo)志碼：A

DOI:10.7652/jdyxb201604010

Protective effect of antioxidant N-acetylcysteine on the retinal nerve tissue of early diabetic rats

CHEN Ling1,2, ZHANG Xiao-ling1, HAO Yang1, SHI Qiang1,WANG Jing1, ZHANG Fu-jun3, WANG Bao-ying3

(1. Department of Ophthalmology, the First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University,Xi’an 710061; 2. Department of Ophthalmology, Xi’an Children’s Hospital, Xi’an 710004;3. Xi’an Jiaotong University Health Science Center, Xi’an 710061, China)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the protective effect of the antioxidant N-acetylcysteine (NAC) on the retinal nerve tissue of early diabetic rats. MethodsWe randomly divided 60 healthy adult Sprague-Dawley (SD) rats weighing between 180 g and 220 g into 2 groups: normal control (CON, n=20) and diabetic (DM, n=40). By intraperitoneal injection of streptozotocin (60 mg/kg), the model of diabetic rats was established. The rats were considered diabetic only when they had hyperglycemia (set at ≥16.7 mmol/L) (32). The CON group was injected with the same amount of citric acid and sodium citrate buffer solution. After successful model establishment, the diabetic rats were randomly divided into 1-month diabetes group and 2-month diabetes group, with 16 rats in each group. The left eye of each experimental diabetic rat was set for diabetes control group (D) while the right eye was set as NAC treatment group (NAC). At 2 weeks of diabetes, 4 μL (1.6 μg/μL) of NAC was injected into the vitreous chamber of NAC group and 4 μL (0.01 mmol/L) of PBS was injected into the vitreous chamber of the other diabetic rats. The thickness changes of outer nuclear layer retina was observed by HE, ultrastructural changes of retinal ganglion cells were observed under the transmission electron microscope, and the number of retinal ganglion cells was detected by immunofluorescence method. ResultsAt different time points, retina outer nuclear layer in NAC group was thicker than in D group (P<0.01). However, the NAC group and the CON group did not differ (P>0.05). Under the transmission electron microscope, NAC group had more retinal ganglion cell organelles, higher electron density of the cytoplasm, and milder mitochondria swelling than D group. The NAC group did not differ from CON group in the ultrastructure of retinal ganglion cells. NAC group had an increased number of retinal ganglion cells at different time points compared with the D group (P<0.01), but the NAC and CON groups did not differ in the number of retinal ganglion cells (P>0.05). ConclusionThe antioxidant N-acetylcysteine has a protective effect on the retinal nerve tissue of early diabetic rats.

KEY WORDS:antioxidant; N-acetylcysteine; diabetes; retinal nerve tissue; rat

Supported by the Science and Technology Plan Project of Shaanxi Province (No.S2012SF2511)

優(yōu)先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20160615.0910.012.html(2016-06-15)