蒙藥八味沉香散配伍不同動(dòng)物心臟時(shí)丁香酚藥代動(dòng)力學(xué)比較研究

肖云峰，高文軍，籍學(xué)偉，王玉華1,Δ

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 南開 300193；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)新藥安全評(píng)價(jià)研究中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110； 3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；4.內(nèi)蒙古自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

蒙藥八味沉香散配伍不同動(dòng)物心臟時(shí)丁香酚藥代動(dòng)力學(xué)比較研究

肖云峰1,2，高文軍3，籍學(xué)偉4，王玉華1,3Δ

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 南開 300193；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)新藥安全評(píng)價(jià)研究中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110； 3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；4.內(nèi)蒙古自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

目的 對(duì)牦牛心臟配伍和家豬心臟配伍八味沉香散的丁香酚藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行比較研究。方法 采用HPLC法測(cè)定大鼠血漿中丁香酚的含量。以3,4-二甲氧基苯乙烯為內(nèi)標(biāo)；使用ALLtima HP C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫為35 ℃；流動(dòng)相為乙腈和水，按梯度洗脫，流量為1.0 mL/min；檢測(cè)波長為280 nm。使用軟件DAS 2.0對(duì)灌胃配伍不同動(dòng)物心臟八味沉香散的大鼠體內(nèi)丁香酚平均血藥濃度-時(shí)間進(jìn)行隔室模型擬合。結(jié)果 以二室模型(權(quán)重為1/cc)計(jì)算血藥濃度與實(shí)測(cè)值契合度優(yōu)于其他模型。配伍牦牛心臟八味沉香散和配伍家豬心臟八味沉香散中丁香酚在大鼠體內(nèi)的最大峰質(zhì)量濃度(質(zhì)量分?jǐn)?shù))Cmax分別為16.21 mg/L和12.50 mg/L；達(dá)峰時(shí)間Tmax分別為21.67 min和19.17 min；分布半衰期T1/2α分別為20.03 min和42.34 min；消除半衰期T1/2β均為69.315 min。結(jié)論 在兩種不同動(dòng)物心臟配伍的八味沉香散中丁香酚代謝情況不相同。配伍牦牛心臟組方的代謝較好，其最大峰質(zhì)量濃度更高、體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)速率更快、吸收進(jìn)入血液循環(huán)總量更多。

八味沉香散；丁香酚；藥代動(dòng)力學(xué)；動(dòng)物心臟

蒙藥八味沉香散的處方由沉香、肉豆蔻、木香、廣棗、旋覆花、阿魏、丁香、動(dòng)物心臟八味藥材組成[1]。臨床主要用于祛“巴達(dá)干”，鎮(zhèn)“心赫依”，燥“協(xié)日烏素”[2]，也就是西醫(yī)臨床常見的心悸、氣短、心前區(qū)疼痛等癥狀。關(guān)于處方中的動(dòng)物心臟，蒙醫(yī)臨床使用比較混亂。臨床入藥的動(dòng)物心臟有牦牛心臟、野兔心臟、家豬心臟、黃牛心臟。蒙醫(yī)臨床醫(yī)生認(rèn)為牦牛心臟入藥最好。八味藥物之間有協(xié)同作用，且不同心臟入藥藥效確有差異。為尋找差異機(jī)制，本研究選取處方成分含量較高且與治療心血管疾病有關(guān)連的化學(xué)成分丁香酚[3]作為研究對(duì)象，在大鼠體內(nèi)進(jìn)行藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，為不同動(dòng)物心臟入藥的方劑藥效差異提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Wistar大鼠，24只，清潔級(jí)，雌雄各半，體重300±30 g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)SCXK(京) 2012-0001。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器：高相液相色譜儀(日本島津公司，型號(hào)LC-20A)；冷凍離心機(jī)(上海菲恰爾分析儀器有限公司，型號(hào)DL-5000)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海恒科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)DHG-9240A)；渦旋混合器(IKA，型號(hào)MS3)；氮吹儀(北京同泰聯(lián)科技發(fā)展有限公司，型號(hào)TTL-DCⅡ)；PH計(jì)(Sartoriμs AG，型號(hào)PB-21)；電子天平(上海菁海儀器有限公司，型號(hào)JA5003N)；電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司，型號(hào)AB135-S)。

1.1.3 試劑與藥品：八味沉香散(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院制備，批號(hào)20150109)；丁香酚對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)110725-201213，純度≥99.7%)；3，4-二甲氧基苯乙烯(BESTOWN-振翔公司，批號(hào)10-UPA-68-2，純度≥97%)；β-GLucuronidase (SIGMA試劑有限公司 HeLix pomatia，Type H-2，批號(hào)G0876)；乙腈(Fisher Scientific，批號(hào)L-17369 4090，色譜純)、甲醇(Fisher Scientific，批號(hào)L-21063 1078，色譜純)、正己烷(Fisher Scientific，批號(hào)L-212568 725，色譜純)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法[4-5]

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境適應(yīng)與飼喂：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于屏障環(huán)境中，喂以北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供的鼠維持飼料(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK(京)2009-0012，批號(hào)14083221)，自由攝水。在室溫19～25 ℃，濕度40 %～60 %的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，開始實(shí)驗(yàn)。

所有受試藥物均用0.5 % CMC-Na配制成所需濃度，使受試藥物均勻混懸。

1.2.2 樣品血漿制備：選取Wistar大鼠24只，按照數(shù)字隨機(jī)法將其隨機(jī)分為空白對(duì)照組、配伍牦牛心臟的八味沉香散組和配伍家豬心臟的八味沉香散組，每組8只。配伍不同心臟的八味沉香散中除心臟種屬不同外，其他七味藥材及含量完全相同。所有動(dòng)物均在實(shí)驗(yàn)前12 h禁食不禁水。空白對(duì)照組灌胃給予0.5 % CMC-Na 15 mL/kg，兩組配伍不同動(dòng)物心臟的八味沉香散組灌胃給予八味沉香散2.7 g/kg。于給藥后5、10、15、20、30、45、60、90、120、180、240、360、720 min，眼眶取血，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)約采集0.5 mL，置于含有肝素鈉的離心管中。血樣以5500 r/min離心5 min，取血漿于1 mL離心管中，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 溶液配制[6]

丁香酚對(duì)照品溶液的制備：稱取丁香酚對(duì)照品適量，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含丁香酚質(zhì)量濃度為113.7 μg/mL的儲(chǔ)備液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

內(nèi)標(biāo)溶液的制備：稱取3，4-二甲氧基苯乙烯對(duì)照品適量，精密稱定，置100 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含3，4-二甲氧基苯乙烯質(zhì)量濃度為104.8 μg/mL的溶液，作為內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，4 ℃保存?zhèn)溆茫褂脮r(shí)稀釋至10.48 μg/mL。

空白血漿的制備：空白對(duì)照組大鼠灌胃給予0.5 % CMC-Na 15 mL/kg，眼眶取血，置于含有肝素鈉的離心管中。5500 r/min離心5 min，取血漿于1 mL離心管中，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

供試品溶液的制備：精密吸取血漿100 μL于15 mL離心管中。加入100 μL 醋酸鈉緩沖溶液(pH4)，振搖。加入10 μL β-GLucuronidase酶，振搖，加蓋，37 ℃溫育1 h，取出放至室溫。分別加入100 μL內(nèi)標(biāo)溶液、100 μL甲醇溶液，振搖。再加入3 mL正己烷，渦旋振蕩1 min，4500 r/min離心3 min，取正己烷層。重復(fù)加樣2次，合并正己烷層，45 ℃氮?dú)獯抵两?，精密加?00 μL甲醇復(fù)溶，得到供試品溶液。

1.2.4 色譜條件：ALLtima HP C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，C18預(yù)柱；流動(dòng)相A為乙腈、B為水，流動(dòng)相梯度洗脫程序見表1；檢測(cè)波長為280 nm；柱溫為35 ℃；流速為1 mL/min；進(jìn)樣量為5 μL。

表1 流動(dòng)相洗脫程序

1.2.5 專屬性實(shí)驗(yàn) 取空白對(duì)照組血漿，按“1.2.3.4”方法處理，其中100 μL內(nèi)標(biāo)溶液用100 μL甲醇代替，其它操作方法相同，精密吸取5 μL注入高效液相色譜儀中，得到空白對(duì)照血漿HPLC圖；取空白對(duì)照血漿，按“1.2.3.4”方法處理，其中100 μL內(nèi)標(biāo)溶液用100 μL丁香酚對(duì)照品溶液替代，其它操作方法相同，精密吸取5 μL注入高效液相色譜儀中，得到空白對(duì)照血漿加丁香酚對(duì)照品HPLC圖；取空白對(duì)照血漿，按“1.2.3.4”方法處理，精密吸取5 μL注入高效液相色譜儀中，得到空白對(duì)照血漿加內(nèi)標(biāo)HPLC圖；取灌胃兩種不同配伍八味沉香散的大鼠血漿樣品，按“1.2.3.4”方法處理，精密吸取5 μL注入高效液相色譜儀中，得到給藥大鼠血漿樣品加內(nèi)標(biāo)HPLC色譜圖。

1.2.6線性范圍考察

精密吸取大鼠空白血漿100 μL，6份，置15 mL離心管中，加入100 μL 醋酸鈉緩沖溶液(pH4)，振搖。加入10 μL β-GLucuronidase酶，振搖，加蓋，37 ℃溫育1 h，取出放至室溫。分別加入系列丁香酚對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各100 μL，按“1.2.3.4”方法處理，使對(duì)照品在生物樣品中的質(zhì)量濃度分別為1.137、3.411、5.685、11.370、17.055、22.740 μg/mL，每個(gè)濃度點(diǎn)平行做2份，精密吸取5 μL，注入液相色譜儀中，記錄峰面積，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

1.2.7 精密度試驗(yàn)和準(zhǔn)確度試驗(yàn)：精密量取空白血漿100 μL，酶解之后，精密加入不同濃度的丁香酚對(duì)照品溶液適量，分別配制成低、中、高3 種濃度(3.411、11.370、17.055 μg/mL)的質(zhì)控(QC)樣品，按“1.2.6”方法處理。每一質(zhì)量濃度進(jìn)行6樣本分析，連續(xù)測(cè)定3 d，根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算QC樣品的測(cè)得質(zhì)量濃度。計(jì)算本法準(zhǔn)確度、日內(nèi)和日間精密度。

1.2.8 提取回收率試驗(yàn)：精密吸取大鼠空白血漿100 μL于離心管中，加入100 μL 醋酸鈉緩沖溶液(pH4)，振搖。加入10 μL β-GLμcμronidase酶，振搖，加蓋，37 ℃溫育1 h，取出放至室溫。分別加入丁香酚對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各100 μL，按“1.2.3.4”方法處理，使對(duì)照品在生物樣品中的質(zhì)量濃度分別為3.411、11.370、17.055 μg/mL，內(nèi)標(biāo)溶液濃度均為10.48 μg/mL，每個(gè)質(zhì)量濃度進(jìn)行6樣品分析，精密吸取5 μL，進(jìn)樣測(cè)定，記錄丁香酚峰面積S1、內(nèi)標(biāo)峰面積S2，另取質(zhì)量濃度為3.411、11.370、17.055 μg/mL的丁香酚對(duì)照品溶液和10.48 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液，進(jìn)樣5 μL測(cè)定，記錄丁香酚峰面積A1、內(nèi)標(biāo)峰面積A2，提取回收率=S/A×100%。

1.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)：給大鼠灌胃牦牛心臟配伍的八味沉香散后，分別取5、20、45 min的血樣作為低、高、中濃度的穩(wěn)定性樣品。

正常值的測(cè)定：得到血樣之后，立即按“1.2.3.4”方法處理，并在高效液相色譜儀進(jìn)樣分析，作為穩(wěn)定性高、中、低濃度的正常值。

穩(wěn)定性測(cè)定(25 ℃7 h)：血樣在室溫25 ℃放置 7 h后按“1.2.3.4”方法處理，并在高效液相色譜儀進(jìn)樣分析，以考察樣品在室溫條件下的穩(wěn)定性。

穩(wěn)定性測(cè)定(4 ℃24 h)：血樣在4 ℃冰箱中放置24 h，按“1.2.3.4”方法處理，并進(jìn)樣分析，考察樣品在冷藏條件下的穩(wěn)定性。

反復(fù)凍融3次穩(wěn)定性測(cè)定(-20 ℃24 h)：血樣在-20 ℃冰箱中放置24 h后，將血樣在室溫下自然融解。待血樣完全融化后，再置于-20 ℃冰箱中凍存24 h。如此重復(fù)3次后，將血樣按“1.2.3.4”方法處理，并進(jìn)樣分析，考察樣品在凍融條件下的穩(wěn)定性。

1.2.10 藥-時(shí)曲線測(cè)定及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算：精密吸取血漿樣品100 μL，按“1.2.3.4”方法處理，并在高效液相色譜儀進(jìn)樣分析，記錄對(duì)照品色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，代入回歸方程求得各時(shí)間點(diǎn)大鼠血漿中丁香酚的濃度(回歸方程以當(dāng)日測(cè)定為準(zhǔn))。將大鼠各時(shí)間點(diǎn)以及對(duì)應(yīng)的血漿中丁香酚的濃度，帶入到DAS 2.0 藥代動(dòng)力學(xué)智能分析軟件，并計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和房室模型。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 專屬性實(shí)驗(yàn) 取空白對(duì)照組血漿，按“1.2.3.4”方法處理，其中100 μL內(nèi)標(biāo)溶液用100 μL甲醇代替，其它操作方法相同，精密吸取5 μL注入高效液相色譜儀中，得到空白對(duì)照血漿HPLC圖，見圖1-A；取空白對(duì)照血漿，按“1.2.3.4”方法處理，其中100 μL內(nèi)標(biāo)溶液用100 μL丁香酚對(duì)照品溶液替代，其它操作方法相同，精密吸取5 μL注入高效液相色譜儀中，得到空白對(duì)照血漿加丁香酚對(duì)照品HPLC圖，見圖1-B；取空白對(duì)照血漿，按“1.2.3.4”方法處理，精密吸取5 μL注入高效液相色譜儀中，得到空白對(duì)照血漿加內(nèi)標(biāo)HPLC圖，見圖1-C；取灌胃兩種不同配伍八味沉香散的大鼠血漿樣品，按“1.2.3.4”方法處理，精密吸取5 μL注入高效液相色譜儀中，得到給藥大鼠血漿樣品加內(nèi)標(biāo)HPLC色譜圖，見圖1-D、圖1-E。

圖1 專屬性試驗(yàn)HPLC圖譜A.空白對(duì)照血漿；B.空白對(duì)照血漿加丁香酚對(duì)照品；C.空白對(duì)照血漿加內(nèi)標(biāo)；D.灌胃配伍牦牛心臟八味沉香散大鼠血漿樣品加內(nèi)標(biāo)；E. 灌胃配伍家豬心臟八味沉香散大鼠血漿樣品加內(nèi)標(biāo)；1.丁香酚； 2.內(nèi)標(biāo)Fig.1 The HPLC chromatogram for Specificity testA.blank plasma; B.blank plasma add eugenol reference substance;C. blank plasma add internal standard;D. The plasma samples from the rat gavage compatibility Baweichenxiang scattered with yak’s heart add internal standard;E. The plasma samples from the rat gavage compatibility Baweichenxiang scattered with pig’s heart add internal standard;1. eugenol;2. internal standard

圖1得到結(jié)果顯示，丁香酚對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)色譜峰峰形良好，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)測(cè)定無干擾，方法的專屬性好。

2.2 線性范圍考察 以對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)的峰面積比值Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo)(內(nèi)標(biāo)濃度默認(rèn)為1)，采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，回歸方程為Y=0.0434C+0.0071(r=0.9996)，血漿中丁香酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。丁香酚血漿濃度在1.137～22.740 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。按上述條件測(cè)得丁香酚在大鼠血漿中的最低檢測(cè)限為0.162 μg/mL。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2 Standard curve

2.3 精密度試驗(yàn)和準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密量取空白血漿100 μL，酶解之后，精密加入不同濃度的丁香酚對(duì)照品溶液適量，分別配制成低、中、高3 種濃度(3.411、11.370、17.055 μg/mL)的質(zhì)控(QC)樣品，按“1.2.6”方法處理。每一質(zhì)量濃度進(jìn)行6樣本分析，連續(xù)測(cè)定3 d，根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算QC樣品的測(cè)得質(zhì)量濃度。計(jì)算本法準(zhǔn)確度、日內(nèi)和日間精密度。結(jié)果詳見表2、表3。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

表3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果顯示，該方法分析血漿中的丁香酚濃度日內(nèi)和日間精密度及準(zhǔn)確度均符合生物樣品的分析要求。

2.4 提取回收率試驗(yàn) 精密吸取大鼠空白血漿100 μL于離心管中，加入100 μL 醋酸鈉緩沖溶液(pH 4)，振搖。加入10 μL β-GLμcμronidase酶，振搖，加蓋，37 ℃溫育1 h，取出放至室溫。分別加入丁香酚對(duì)照品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各100 μL，按“1.2.3.4”方法處理，使對(duì)照品在生物樣品中的質(zhì)量濃度分別為3.411、11.370、17.055 μg/mL，內(nèi)標(biāo)溶液濃度均為10.48 μg/mL，每個(gè)質(zhì)量濃度進(jìn)行6樣品分析，精密吸取5 μL，進(jìn)樣測(cè)定，記錄丁香酚峰面積S1、內(nèi)標(biāo)峰面積S2，另取質(zhì)量濃度為3.411、11.370、17.055 μg/mL的丁香酚對(duì)照品溶液和10.48 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液，進(jìn)樣5 μL測(cè)定，記錄丁香酚峰面積A1、內(nèi)標(biāo)峰面積A2，提取回收率=S/A×100%。結(jié)果見表4。

表4 提取回收率試驗(yàn)結(jié)果

表4的結(jié)果顯示，丁香酚的提取回收率分別為93.49%、99.57%、94.68%，其平均回收率大于95.91%；內(nèi)標(biāo)的提取回收率分別為87.81%、90.39%、90.26%，其平均回收率大于89.48%。測(cè)定結(jié)果符合藥物動(dòng)力學(xué)研究要求。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 給大鼠灌胃牦牛心臟配伍的八味沉香散后，分別取5、20、45 min的血樣作為低、高、中濃度的穩(wěn)定性樣品。

2.5.1 正常值的測(cè)定：得到血樣之后，立即按“供試品溶液的制備”方法處理，并在高效液相色譜儀進(jìn)樣分析，作為穩(wěn)定性高、中、低濃度的正常值。

2.5.2 穩(wěn)定性測(cè)定(25 ℃7 h)：血樣在室溫25 ℃放置7 h后按“供試品溶液的制備”方法處理，并在高效液相色譜儀進(jìn)樣分析，以考察樣品在室溫條件下的穩(wěn)定性。

2.5.3 穩(wěn)定性測(cè)定(4 ℃24 h)：血樣在4 ℃冰箱中放置24 h，按“供試品溶液的制備”方法處理，并進(jìn)樣分析，考察樣品在冷藏條件下的穩(wěn)定性。

2.5.4 反復(fù)凍融3次穩(wěn)定性測(cè)定(-20 ℃24 h)：血樣在-20 ℃冰箱中放置24 h后，將血樣在室溫下自然融解。待血樣完全融化后，再置于-20 ℃冰箱中凍存24 h。如此重復(fù)3次后，將血樣按“供試品溶液的制備”方法處理，并進(jìn)樣分析，考察樣品在凍融條件下的穩(wěn)定性。結(jié)果見表5。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丁香酚血漿給藥樣品的室溫穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性、4 ℃冷藏穩(wěn)定性的測(cè)定結(jié)果變化均在允許范圍內(nèi)(RSD<15%)。

2.6 丁香酚濃度-時(shí)間曲線 經(jīng)DAS 2.0 軟件擬合配伍牦牛心臟和家豬心臟的八味沉香散單次灌胃給藥后的數(shù)據(jù)，得到大鼠血漿各時(shí)間點(diǎn)平均血藥濃度-時(shí)間曲線。結(jié)果見表6和圖3。

表6 給藥八味沉香散后不同采血時(shí)間的血藥濃度±s)

圖3 血藥濃度-時(shí)間曲線圖Fig.3 Plasma concentration - time curve

表6和圖3的結(jié)果表明，給大鼠等劑量灌胃配伍不同動(dòng)物心臟的八味沉香散后，丁香酚的血藥濃度變化趨勢(shì)基本相同。隨時(shí)間變化丁香酚的血藥濃度呈現(xiàn)為先由小增大，再逐漸降低，后趨于代謝完全的規(guī)律，且血藥濃度與時(shí)間呈現(xiàn)雙指數(shù)函數(shù)曲線的關(guān)系。兩條曲線的達(dá)峰時(shí)間，均為給藥后20 min，但兩種配伍不同動(dòng)物心臟的八味沉香散達(dá)峰時(shí)血藥濃度不同，配伍牦牛心臟的八味沉香散丁香酚血藥濃度更高，相比配伍家豬心臟的八味沉香散高3.67 μg/mL，說明配伍牦牛心臟的八味沉香散生物利用度更高。

2.7 丁香酚藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算 給大鼠等劑量單次灌胃配伍不同動(dòng)物心臟的八味沉香散，不同時(shí)間點(diǎn)采血后，得到的平均血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)。將大鼠各時(shí)間點(diǎn)以及對(duì)應(yīng)血漿中丁香酚濃度，帶入到DAS 2.0藥代動(dòng)力學(xué)智能分析軟件，并計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和房室模型。丁香酚藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表7。

表7 丁香酚藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

采用DAS 2.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行隔室模型擬合，比較不同模型的AIC值。分別選用一室模型、二室模型、三室模型和不同權(quán)重對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行曲線擬合，得到結(jié)果為非靜脈注射二室模型(權(quán)重為1/cc)時(shí)血藥濃度與實(shí)測(cè)值契合度好，擬合模型的AIC值最小。

用軟件分析，得到Cmax(最大峰質(zhì)量濃度)、T1/2α(分布半衰期)、K12(從中央室向外周室轉(zhuǎn)運(yùn)的室間轉(zhuǎn)運(yùn)常數(shù))、K21(從外周室向中央室轉(zhuǎn)運(yùn)的室間轉(zhuǎn)運(yùn)常數(shù))和AUC(0→t)(血藥濃度-時(shí)間曲線下面積)等配伍不同動(dòng)物心臟的八味沉香散中所含丁香酚的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。表7中的所有參數(shù)均表明配伍牦牛心臟的八味沉香散要優(yōu)于配伍家豬心臟的八味沉香散。

配伍牦牛心臟的八味沉香散和配伍家豬心臟的八味沉香散比較，Cmax值分別為16.21 mg/L和12.50 mg/L，表明配伍牦牛心臟的八味沉香散中的丁香酚在相同時(shí)間內(nèi)進(jìn)入大鼠體內(nèi)量更多；T1/2α值分別為20.031 min和42.344 min，T1/2β值均為69.315 min，均大于t1/2α，表明配伍牦牛心臟八味沉香散中的丁香酚在大鼠體內(nèi)分布更快，而消除速率相同，使丁香酚在大鼠體內(nèi)存留時(shí)間更長；K12值分別為0.024 min-1和0.015 min-1，K21值分別為0.016 min-1和0.011 min-1，表明丁香酚從中央室向外周室的轉(zhuǎn)運(yùn)速率大于從外周室向中央室的轉(zhuǎn)運(yùn)速率，且配伍牦牛心臟八味沉香散轉(zhuǎn)運(yùn)速度更快。AUC(0→t)值分別為2780.282 μg/(L·min)和1939.449 μg/(L·min)，AUC(0→∞)值分別為3301.164 μg/(L·min)和2440.137 μg/(L·min)，表明從零時(shí)間到藥物達(dá)峰時(shí)間和從零時(shí)間到丁香酚全部消除這兩個(gè)時(shí)間段內(nèi)，配伍牦牛心臟八味沉香散中丁香酚的藥-時(shí)曲線下總面積更大，表明在達(dá)峰和整個(gè)代謝過程中配伍牦牛心臟八味沉香散中的丁香酚進(jìn)入血液循環(huán)的量更大。

3 討論

丁香酚為無色或微黃色液體，廣泛存在于丁香等植物中，主要具有抗菌[7]、健胃[8]、降血壓[9]等作用。蒙醫(yī)臨床常利用丁香的這些作用特點(diǎn)與肉豆蔻、廣棗等蒙藥材組成方劑用于心臟疾病的治療[10]。八味沉香散由丁香、肉豆蔻、廣棗、動(dòng)物心臟等八味藥材組成。關(guān)于方中的動(dòng)物心臟，蒙醫(yī)專家一致認(rèn)為牦牛心臟要比家豬心臟效果好，但沒有理論依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)通過比較研究蒙藥八味沉香散配伍不同動(dòng)物心臟時(shí)丁香酚的藥代動(dòng)力學(xué)曲線和參數(shù)，以驗(yàn)證蒙醫(yī)臨床用藥經(jīng)驗(yàn)。給大鼠等劑量單次灌胃配伍不同動(dòng)物心臟的八味沉香散得到的血藥濃度-時(shí)間曲線圖顯示，配伍不同動(dòng)物心臟的八味沉香散中丁香酚總體代謝確有不同，且差異較大。圖3和表6的數(shù)據(jù)顯示：配伍牦牛心臟的八味沉香散中所含的丁香酚在大鼠體內(nèi)具有更大的Cmax；T1/2β相等的前提下，T1/2α更小，分布更快，代謝更慢。不同動(dòng)物心臟配伍的八味沉香散所含丁香酚在房室間的運(yùn)轉(zhuǎn)和循環(huán)也有顯著性差異。相比而言，配伍牦牛心臟八味沉香散的丁香酚轉(zhuǎn)運(yùn)和循環(huán)的量更大，主要表現(xiàn)為K12要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于K21，比較從零時(shí)間到藥物達(dá)峰時(shí)間和從零時(shí)間到丁香酚全部消除這兩個(gè)時(shí)間段內(nèi)藥-時(shí)曲線下總面積的結(jié)果顯示，配伍牦牛心臟八味沉香散的面積更大，說明藥物進(jìn)入中央室和血液循環(huán)的量更多。

藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在給藥量相同的前提下，比較配伍兩種不同動(dòng)物心臟的八味沉香散時(shí)，配伍牦牛心臟比配伍家豬心臟的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)更利于臨床治療。

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(編校：譚玲)

Comparison research the pharmacokinetic of eugenol in Mongolian medicine Baweichenxiangsan with the different animal heart

XIAO Yun-feng1,2, GAO Wen-jun3, JI Xue-wei4, WANG Yu-hua1,3Δ

(1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China; 2.Evaluation Center for New Drug Safety of Inner Mongolia Medical University, Inner Mongolia Hohhot 010110, China; 3.Pharmacy College of Inner Mongolia Medical University, Inner Mongolia Hohhot 010110; 4. Inner Mongolia autonomous region food and drug inspection, Inner Mongolia Hohhot 010000, China)

ObjectiveTo compare the clove phenol pharmacokinetic in Baweichenxiangsan with yak’s and pig’s heart.MethodsBy HPLC determination of eugenol in rat plasma.3,4-dimethoxy styrene as internal standard; ALLtima HP C18 column(250 mm × 4.6 mm, 5 μm), column temperature was 35 ℃; mobile phase was acetonitrile and water, according to the gradient, flow was 1.0 mL/min; detection wavelength was 280 nm. Eugenol average plasma concentration-time for compartment model fit by software DAS 2.0, for gavage Baweichenxiangsan with different animal’s heart to rats.ResultsIn two-compartment model(weight of 1/cc) to calculate the plasma concentration and the measured value to fit better than other models. Compatibility yak’s heart and pig’s heart Baweichenxiang Powder eugenol maximum peak concentration in rats(mass fraction) Cmaxwere 16.21 mg/L and 12.50 mg/L; up peak time Tmaxwas 21.67 min and 19.17 min; distribution half-life T1 / 2αwere 20.03 min and 42.34 min; elimination half-life T1 / 2βwere 69.315 min.ConclusionIn both eugenol cardiac metabolism compatibility of different animals in different Baweichenxiangsan. Metabolic compatibility yak has better heart prescription, the maximum peak concentration of higher quality, faster internal transfer rates, the total amount absorbed into the blood circulation more.

Baweichenxiangsan; eugenol; pharmacokinetics; animal’s heart

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81360678)；內(nèi)蒙古自治區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(1405125)；內(nèi)蒙古自治區(qū)科技創(chuàng)新引導(dǎo)獎(jiǎng)勵(lì)資金項(xiàng)目(20121502)

肖云峰，男，助理研究員，博士在讀，研究方向：中蒙藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及藥理毒理學(xué)，E-mail：xiaoyunfeng0472@126.com；王玉華，通信作者，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中蒙藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制，E-mail：yuhuawang59@163.com。

R654.2

A

1005-1678(2016)02-0176-06