雷珠單抗對(duì)新生血管性青光眼患者血清、房水IL-6及VEGF水平的影響

張怡，蔣姝樂(lè)，柳婷，杜爾罡

(1.浙江省中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院 眼科，浙江 杭州 310006；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 醫(yī)學(xué)系，廣西 南寧 530200)

雷珠單抗對(duì)新生血管性青光眼患者血清、房水IL-6及VEGF水平的影響

張怡1Δ，蔣姝樂(lè)1，柳婷2，杜爾罡1

(1.浙江省中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院 眼科，浙江 杭州 310006；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 醫(yī)學(xué)系，廣西 南寧 530200)

目的 雷珠單抗對(duì)新生血管性青光眼患者血清、房水白細(xì)胞介素-6(IL-6)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)水平影響。方法 收集浙江省中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科新生血管性青光眼患者66例，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，各33例。對(duì)照組局部給予阿托品、糖皮質(zhì)激素等常規(guī)治療，采用全視網(wǎng)膜光凝術(shù)(panretina/photocoagulation，PRP)；實(shí)驗(yàn)組在對(duì)照組基礎(chǔ)上給予雷珠單抗注射液，2組均治療4次。比較治療前后2組患者血清及房水IL-6、VEGF及眼壓變化。結(jié)果 治療后2組患者的血清及房水IL-6、VEGF水平降低，眼壓降低(P<0.05)，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組血清及房水IL-6、VEGF水平較低，眼壓較低(P<0.05)。結(jié)論 雷珠單抗能夠有效治療新生血管性青光眼，降低眼壓，推測(cè)其機(jī)制可能與降低新生血管性青光眼患者血清及房水IL-6、VEGF水平有關(guān)。

雷珠單抗；新生血管性青光眼； IL-6；VEGF

新生血管性青光眼 (neovascular glaucoma,NVG)是一種常見(jiàn)的繼發(fā)性青光眼,常繼發(fā)于糖尿病性視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞和視網(wǎng)膜缺血綜合征[1]。本病臨床上可分為3期，即虹膜紅變期、開(kāi)角型青光眼期及閉角型青光眼期，其中虹膜新生血管化的進(jìn)展變化最大，可在幾天之內(nèi)完全粘閉房角，也可數(shù)年之內(nèi)保持穩(wěn)定不累及房角，病情發(fā)展不可預(yù)測(cè)。目前臨床上醫(yī)者多采用全視網(wǎng)膜光凝(panretina/photocoagulation，PRP)術(shù)進(jìn)行治療[2]。但常規(guī)藥物和手術(shù)的成功率較低，效果不理想[3]。雷珠單抗(ranibizumab)是第2代人源化抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)重組鼠單克隆抗體片段,能與所有活性形式的VEGF-A結(jié)合,防止其與VEGFR1及VEGFR2結(jié)合[4]，能有效抑制血管生成。本研究通過(guò)觀察雷珠單抗對(duì)新生血管性青光眼患者血清白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)，VEGF水平及眼壓的影響，以期為雷珠單抗治療新生血管性青光眼提供可靠的臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2014年1月～2015年7月于浙江省中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科確診為新生血管性青光眼的患者66例，其中男性38例，女性28例，年齡34～70歲，病程1～3個(gè)月。按照患者就診的先后順序分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組33例，男性16例，女性17例，年齡37～65歲，平均年齡(48.23±5.96)歲；對(duì)照組33例，男性22例，女性11例，年齡34～70歲，平均年齡(52.01±5.90)歲。2組患者在年齡、性別、病程等一般情況上比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)眼科學(xué)分會(huì)青光眼學(xué)組《中國(guó)青光眼臨床工作指南》中關(guān)于新生血管性青光眼的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②對(duì)研究中使用的藥物無(wú)過(guò)敏史且患者非過(guò)敏體質(zhì)；③患者年齡在34～70歲之間；④于治療前的1個(gè)月內(nèi)未使用過(guò)治療新生血管性青光眼的藥物；⑤患者自愿參加本次研究，了解手術(shù)危險(xiǎn)，簽署知情同意書(shū)，并獲得本院倫理協(xié)會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者依從性差，不配合治療者；②處于青光眼晚期需采取摘除法；③合并嚴(yán)重的心、腦血管疾病、肝腎功能衰竭及其他的眼科疾病等；④合并其他嚴(yán)重的血液系統(tǒng)疾?。虎莶溉榛蛉焉锲趮D女及嬰兒；⑥對(duì)研究中所涉及藥物過(guò)敏；⑦患者存在玻璃體及房前出血等情況。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：所有患者均給予戒煙、戒酒、糾正電解質(zhì)與酸堿平衡、低脂飲食、限制鈉鹽及水分?jǐn)z入等常規(guī)治療，2組患者均隔2周治療1次，總治療4次。對(duì)照組采用全視網(wǎng)膜光凝術(shù)，患眼首先用復(fù)方托品酰胺(別名復(fù)方托吡卡胺滴眼液，北京雙鶴現(xiàn)代醫(yī)藥技術(shù)有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H11021793)散瞳，鹽酸丙美卡因滴眼液(蘇州工業(yè)園區(qū)天龍制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20084062)麻醉后置于裂隙燈前，調(diào)整患部位置，放置全視網(wǎng)膜鏡，設(shè)置波長(zhǎng)532 nm，能量330 mW，曝光時(shí)間0.2 s，近黃斑血管弓的后極部光斑直徑200 μm，中周邊部300 μm，光斑強(qiáng)度3級(jí),光凝范圍為視盤(pán)上、下、鼻側(cè)1 PD以外，顳側(cè)上、下血管弓及黃斑中心凹顳側(cè)2 PD以外至赤道部區(qū)域，以出現(xiàn)明顯灰白色的Ⅲ級(jí)輕中度光斑為準(zhǔn)，每2個(gè)光斑之間間隔1個(gè)光斑直徑，每次光凝400～500點(diǎn)，術(shù)后雙氯芬酸鈉滴眼液(江蘇祥瑞藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20067166)滴眼，每天4次，連續(xù)4 d(美國(guó)科醫(yī)人Lumenis spectra 激光機(jī))。實(shí)驗(yàn)組在對(duì)照組治療的基礎(chǔ)上，患者玻璃體內(nèi)加注雷珠單抗注射液(Novartis Pharma Schweiz AG，注冊(cè)證號(hào)：S20110085)0.05mL(1.25 mg)，每天4次，連續(xù)4 d。

1.2.2 觀察指標(biāo)及方法：所有患者均于治療前后采集清晨空腹靜脈血2 mL，加入肝素抗凝后立即低溫離心后取得血清。IL-6測(cè)定采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELASA)法，試劑盒由上海北諾生物科技有限公司生產(chǎn)，所用儀器為FX-6MG酶聯(lián)免疫光譜分析儀； VEGF測(cè)定采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELASA)法，試劑盒由北京健平金星生物科技有限公司生產(chǎn)。檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，并嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程操作和質(zhì)控。眼壓檢測(cè)方法：所有患者均運(yùn)用非接觸式眼壓計(jì)測(cè)量眼壓，囑患者雙眼同時(shí)注視前方，睜大眼睛注視儀器內(nèi)紅色指示點(diǎn)，并告知測(cè)量時(shí)有輕微氣流噴出，避免瞬目及后退，根據(jù)患者高度調(diào)節(jié)電動(dòng)桌適當(dāng)高度，調(diào)整患者眼角約與額頭架旁標(biāo)示同一高度，檢查者調(diào)整儀器操縱桿并對(duì)焦，按測(cè)量鍵進(jìn)行測(cè)量，連續(xù)3次取平均值，測(cè)量結(jié)束后，打印結(jié)果。房水樣本采集：開(kāi)瞼后，以無(wú)菌1 mL一次性塑料針管接9號(hào)針頭，在角膜緣內(nèi)1 mm前房穿刺，2～5 s內(nèi)從中央瞳孔區(qū)抽吸，不觸及虹膜、晶狀體及角膜內(nèi)皮，獲得未稀釋前的房水0.2 mL，標(biāo)本移至已消毒并硅化的0.5 mL Eppendorf管，放入液氮中，然后放到-80 ℃的冰箱中。

2 結(jié)果

2.1 治療前后2組患者血清及房水IL-6水平比較 治療后2組患者的血清及房水IL-6水平與治療前相比均降低(P<0.05)，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的血清及房水IL-6水平較低(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 治療前后2組患者血清及房水IL-6水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 治療前后2組患者血清及房水VEGF水平比較 治療后2組患者的血清及房水VEGF水平與治療前相比均降低(P<0.05)，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的血清及房水VEGF水平較低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 治療前后2組患者血清及房水VEGF水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 治療前后2組患者的眼壓比較 治療后2組患者的眼壓與治療前相比均降低(P<0.05)，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的眼壓較低(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 治療前后2組患者的眼壓比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

新生血管性青光眼最常繼發(fā)于視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞、糖尿病視網(wǎng)膜病變等視網(wǎng)膜缺氧性疾病某些引起視網(wǎng)膜缺氧的疾病[6]，本病用一般的抗青光眼藥物及濾過(guò)性手術(shù)治療，效果不理想。IL-6作為一種多功能細(xì)胞因子，主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等分泌，具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答[7]、促進(jìn)造血功能的作用。IL-6等炎性分子可由低氧所誘導(dǎo)，作為血管生成因子參與了新生血管免疫球蛋白的形成，人體血液中的氧主要以2種方式存在,一種是氧合血紅蛋白,另一種是血液中的溶解氧，增加組織供氧量,最終減少缺血缺氧,使紅細(xì)胞的活性增高[8]，新生血管性青光眼是一種難治性青光眼,其主要由于視網(wǎng)膜的廣泛缺血所致[9]，缺血進(jìn)而會(huì)引起相對(duì)性缺氧，造成局部低氧環(huán)境。雷珠單抗是針對(duì)VEGF所有亞型的人源化全長(zhǎng)單克隆抗體[10]，能有效降低血管通透性以及抑制血管生成，有較好的穿透力，能夠直達(dá)患處，在玻璃體中的利用率較高，對(duì)于新生血管性青光眼的治療具有良好的效果。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組患者的血清及房水IL-6水平較低(P<0.05)，證明了雷珠單抗可以有效抑制新生血管性青光眼患者的炎癥反應(yīng)，并抑制新生血管的生成。

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)治療后實(shí)驗(yàn)組患者的血清及房水VEGF水平更低，證實(shí)了雷珠單抗能夠抑制新生血管的生成[10]。VEGF又稱(chēng)血管通透因子[11]，是一種特異性作用于內(nèi)皮細(xì)胞的血小板源性蛋白，也是血管發(fā)生和血管生成過(guò)程中重要的調(diào)控因子，具有促血管增生和增強(qiáng)血管通透的功能，為目前研究較多的血管因子，也是所知功能最強(qiáng)、作用最直接的血管形成促進(jìn)因子。有動(dòng)物研究表明[12]，大鼠在低氧環(huán)境中飼養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生視網(wǎng)膜新生血管，VEGF mRNA 和蛋白的表達(dá)在新生血管發(fā)生前升高，在新生血管退行后下降，說(shuō)明了VEGF與新生血管性青光眼血管的新生存在較為密切的相關(guān)性，可作為判定藥物療效的標(biāo)準(zhǔn)之一。

眼壓是眼內(nèi)容物對(duì)眼球壁施加的均衡壓力，正常人的眼壓穩(wěn)定在一定范圍內(nèi)，保證屈光間質(zhì)發(fā)揮最大光學(xué)性能的同時(shí)維持了眼球的正常形態(tài)，正常眼壓的范圍為10～21 mmHg(1.47～2.79kPa)[13]。眼壓是診斷青光眼的重要依據(jù)，在一般情況下，房水生成率，房水排出率及眼內(nèi)容物的體積三者保持著一種動(dòng)態(tài)平衡，但青光眼可以使房水通道受阻，導(dǎo)致眼壓升高。本研究結(jié)果顯示，在治療后，2組患者的眼壓均有所下降(P<0.05)，說(shuō)明治療均有效果，但與對(duì)照組患者相比，實(shí)驗(yàn)組患者下降的更明顯(P<0.05)，證明了雷珠單抗臨床療效更為顯著。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)66例新生血管性青光眼患者血清及房水IL-6、VEGF以及眼壓水平的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，證實(shí)了雷珠單抗能夠顯著降低新生血管性青光眼患者的臨床療效。在下一步研究中，本課題組將進(jìn)行分子機(jī)制方面研究，為本實(shí)驗(yàn)所反映的現(xiàn)象做出進(jìn)一步論證和分析。

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(編校：王儼儼)

Effect of ranibizumab on serum and aqueous humor levels of IL-6 and VEGF in neovascular glaucoma patients

ZHANG Yi1Δ, JIANG Shu-le1, LIU Ting2, DU Er-gang1

(1. Department of Ophthalmology, The First Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310006, China; 2. School of Medicine, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310006, China)

ObjectiveTo investigate the effect of ranibizumab on the serum and aqueous humor levels of IL-6 and VEGF in neovascular glaucoma patients.Methods66 neovascular glaucoma patients from our hospital were selected and randomly divided into the control group and experimental group with 33 cases in each group. The control group were treated by atropine, glucocorticoid and panretina/photocoagulation (PRP). The experimental group were treated on the basis of the control group with monoclonal antibody injection. Two groups were treated for four times. The aqueous IL-6, VEGF and intraocular pressure were tested and compared pre-and post-treatment.ResultsCompared with pre-treatment in two groups, the IL-6 and VEGF levels in serum and aqueous humor were lower (P<0.05), the intraocular pressure were lower(P<0.05). Compared with the control group post-treatment,the IL-6 and VEGF levels in serum and aqueous humor were lower(P<0.05),the intraocular pressure were lower(P<0.05).ConclusionThe results suggest that the mechanism may be related to the decrease of serum levels of IL-6 and VEGF in the serum and aqueous humor of the neovascular glaucoma patients.

ranibizumab; neovascular glaucoma; IL-6; VEGF

浙江省中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015ZA086)

張怡，通信作者，女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：白內(nèi)障、眼底病等，E-mail：zhangyihz000@163.com。

R775

A

1005-1678(2016)02-0151-03