芪味理肺湯方劑與糖皮質(zhì)激素協(xié)同治療哮喘小鼠氣道炎癥的研究

朱唯芳 顧道蘭 顧娟 楊宇

【摘要】目的：利用小鼠支氣管哮喘模型探討中藥芪味理肺湯方劑（簡稱芪肺湯）的療效及其與糖皮質(zhì)激素聯(lián)用的協(xié)同作用機制。方法：雄性BALB/c小鼠隨機分組后建立支氣管哮喘模型，分別采用地塞米松、芪肺湯、地塞米松+芪肺湯聯(lián)用進行胃飼給藥治療，并設立相關對照組。處理1周后，通過肺組織病理染色、支氣管肺泡灌洗液（BALF）細胞分類計數(shù)評價炎癥治療效果，通過ELISA檢測BALF細胞因子的表達。結(jié)果：對比哮喘對照組，三個治療組均出現(xiàn)肺部炎癥部分減輕及BALF細胞計數(shù)的減少，其中聯(lián)用組表現(xiàn)為中性粒細胞及嗜酸性細胞計數(shù)的共同下降。結(jié)論：芪味理肺湯方劑與糖皮質(zhì)激素聯(lián)合運用能協(xié)同抑制嗜酸性細胞及中性粒細胞激活，對激素非敏感哮喘治療可能具有較大意義。

【關鍵詞】芪味理肺湯；哮喘；氣道炎癥；中性粒細胞；糖皮質(zhì)激素

Abstract：Objective： To investigate the synergistic therapeutic effect of Qiweileifeitang （Qi） with glucocorticoid for allergic inflammation in bronchial asthma mouse models. Methods： 50 mice were randomly divided into for 5 groups for dexamethasone or Qi or combined treatment，the pathological changes of lung tissue and cell counts in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） were used to evaluate the therapeutic efficacy. Results： The lung pathological changes and cell counts in BALF most significantly decreased in the combined group comparing to other control groups. Conclusion： Combination of Qi and glucocorticoid may be a better strategy for glucocorticoid insensitive asthma therapy as it can both inhibit neutrophils and eosinophils activation.

Keywords：Qiweilifeitang；asthma；airway inflammation；neutrophils；glucocorticoid

【中圖分類號】R4 【文獻標識碼】A 【文章編號】1671-8801（2016）03-0005-02

支氣管哮喘（asthma，簡稱哮喘）形成的經(jīng)典病理機制是由氣道的炎性因子和炎性細胞的活化 [1]。目前研究證實，糖皮質(zhì)激素可以有效地影響Th2相關的嗜酸性細胞的分化及功能，但是仍然存在部分患者對糖皮質(zhì)激素治療不敏感，影響臨床療效[2]。近期研究證實了Th17細胞及中性粒細胞相關的炎癥反應在哮喘氣道炎癥中具有重要作用，并可能是部分哮喘患者糖皮質(zhì)激素不敏感的重要機制[3]。圍繞Th17細胞調(diào)控進行的哮喘治療可能是當前糖皮質(zhì)激素療法的有益補充。芪味理肺湯方劑是依據(jù)多年哮喘治療臨床經(jīng)驗形成的中藥復方，此前研究報道，芪味理肺湯對支氣管哮喘模型大鼠血清清除氧自由基能力具有較大影響 [4]，但其機制尚未完全闡明，尤其是其對于糖皮質(zhì)激素非敏感性哮喘的作用尚未明確報道。

1. 材料和方法

1.1 動物 SPF級雄性BALB/c小鼠50只，6-8周齡，將小鼠隨機分成5組， 每組10只， 分別為正常對照組（A組）、哮喘造模+鹽水胃飼組（B組）、地塞米松治療組（C組）、芪肺湯治療組（D組）及地塞米松+芪肺湯治療組（E組），第二軍醫(yī)大學動物中心提供，SPF級常規(guī)喂養(yǎng)。

1.2 藥品試劑 卵蛋白干粉（OVA），Alfa公司，批號：A16951；氫氧化鋁，美國Sigma公司，批號：A4682；芪味理肺湯；地塞米松粉劑，Sigma公司，批號：D4902。

1.3 哮喘動物模型制備及給藥 根據(jù)文獻制備支氣管哮喘模型小鼠[2] 。芪肺湯按20ml/kg體重每天1次胃飼，每ml含有1g生藥，其他組給予胃飼等量生理鹽水作為對照。地塞米松給藥為胃飼，藥物濃度為150μg/mL，3mL/d。各組均為造模成功后連續(xù)給藥7天。

1.4 取材 第29天放血處死小鼠，切開氣管， 用生理鹽水1ml灌洗小鼠肺組織， 收集支氣管肺泡灌洗液（BALF）， 分離的上清液-80℃保存待測。取4%多聚甲醛固定的右肺中葉進行病理切片觀察。

1.5 病理切片觀察 采用石蠟包埋及HE染色法進行組織切片，并行圖像觀察。

1.6 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)用（ x±s）表示， 采用SPSS19.0版統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，所有定量數(shù)據(jù)經(jīng)過方差齊性檢驗和正態(tài)性檢驗后，對多組數(shù)據(jù)進行方差分析，對兩組比較采用t檢驗， 以P<0.01為差異有顯著性。

2. 結(jié)果

2.1 一般情況 正常組無陽性癥狀，哮喘造模+鹽水胃飼組（以下簡稱哮喘組）小鼠外觀可出現(xiàn)呼吸急促、咳嗽喘息、排尿排便增多、煩躁不安等癥狀，嚴重者反應遲鈍、可聞及痰鳴音。各治療組哮喘癥狀均有所改善，尤其呼吸急促改善明顯，地塞米松+芪肺湯組改善最為明顯。

2.2 肺組織病理結(jié)果 如圖1，正常組未見炎性細胞浸潤，肺泡、支氣管黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整清晰，支氣管無痙攣；與正常組比較，哮喘組肺組織炎性細胞浸潤，支氣管黏膜上皮細胞排列紊亂，肺泡間隔增厚等典型支氣管哮喘病理表現(xiàn)，治療后芪肺湯組和地塞米松組與哮喘組比較，支氣管黏膜上皮細胞排列較為整齊，炎性細胞浸潤減輕，地塞米松+芪肺湯組明顯優(yōu)于其他治療組。

2.3 BALF細胞總數(shù)及分類計數(shù)結(jié)果 如圖2所示，與正常組相比，哮喘組BALF涂片細胞總計數(shù)及淋巴細胞（Lym）總數(shù)顯著升高（P<0.01）；而三種治療組中相比哮喘組均出現(xiàn)明顯降低。與正常組相比，哮喘組BALF涂片嗜酸性粒細胞（Eos）計數(shù)顯著升高（P<0.01）；而三種治療方案中，地塞米松治療組及地塞米松+芪肺湯聯(lián)合治療組Eos均明顯低于哮喘組（P<0.01），芪肺湯下降較為不明顯。與正常組相比，哮喘組BALF涂片中性粒細胞（Neu）計數(shù)顯著升高（P<0.01）；而相對哮喘組，地塞米松治療組Neu變化不顯著，而芪肺湯治療組BALF中Neu計數(shù)顯著低于哮喘組（P<0.01），而且，地塞米松+芪肺湯聯(lián)合治療組中Neu計數(shù)顯著低于地塞米松治療組（P<0.01）。

3. 討論

此前哮喘常用的糖皮質(zhì)激素療法主要針對嗜酸性粒細胞相關反應進行改善，但是對中性粒細胞干預不明顯，這也是文獻中報道的糖皮質(zhì)激素難治性哮喘的主要病理原因之一。本研究證實了芪味理肺湯可以改善支氣管哮喘的氣道炎癥和中性粒細胞激活，減低了相關的炎癥反應。而芪味理肺湯與糖皮質(zhì)激素聯(lián)合應用可以同時抑制嗜酸性粒細胞及中性粒細胞激活，從而更好地消除和調(diào)控氣道炎癥反應，因此可能在治療機理上具有協(xié)同作用，其臨床價值值得在實踐中進行深入研究。

參考文獻

[1] 于宗學， 李強， 胡東明. 中醫(yī)治療在支氣管哮喘治療中的應用概述[J]. 中國中醫(yī)急癥， 2014， 23（3）：489-490.

[2] 彭芬， 黃華， 錢煒. 糖皮質(zhì)激素對哮喘患兒的臨床療效及作用機制研究[J]. 中國臨床藥理學雜志， 2016， 32（1）：3-5.

[3] 王彥， 王斌， 陳華萍，等. 中性粒細胞性哮喘臨床特征分析[J]. 中國呼吸與危重監(jiān)護雜志， 2011， 10（4）：317-320.

[4] 李春雷， 史琦， 閻玥， 李四維， 張玲，孔艷華等.芪味理肺湯對哮喘大鼠血清清除氧自由基能力的影響[J]. 中華中醫(yī)藥雜志， 2015（5）：1644-1647.

通訊作者：朱唯芳