植骨聯(lián)合烤瓷夾板修復(fù)末端松動基牙齦下牙周致病菌的分析

王　毅，胡　楊，杜　軍，何惠宇

(新疆醫(yī)科大學(xué)1附屬中醫(yī)醫(yī)院口腔科，烏魯木齊　830000; 2第一附屬醫(yī)院口腔修復(fù)科，烏魯木齊　830054)

植骨聯(lián)合烤瓷夾板修復(fù)末端松動基牙齦下牙周致病菌的分析

王毅1，胡楊2，杜軍1，何惠宇2

(新疆醫(yī)科大學(xué)1附屬中醫(yī)醫(yī)院口腔科，烏魯木齊830000;2第一附屬醫(yī)院口腔修復(fù)科，烏魯木齊830054)

摘要：目的通過對基牙齦下牙周可疑致病菌進行動態(tài)監(jiān)測及定量分析，探討在保留KennedyⅢ末端松動基牙后，應(yīng)用牙周植骨術(shù)聯(lián)合夾板式金屬烤瓷冠橋的方法，觀察齦下牙周致病菌的變化。方法選取20例伴有牙周病骨缺損的KennedyⅢ末端基牙松動的患者，試驗組為10例行植骨術(shù)聯(lián)合夾板式金屬烤瓷冠橋修復(fù)，對照組為單純10例行夾板式金屬烤瓷冠橋修復(fù)。在修復(fù)后0、3、6個月行完善的牙周相關(guān)檢查并收集齦溝液，菌落計數(shù)，并采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法，檢測伴放線放線桿菌(Aa)、牙齦卟啉單胞菌(Pg)、中間普氏菌(Pi)、具核梭桿菌(Fn)4種慢性牙周炎相關(guān)致病菌。結(jié)果試驗組與對照組的菌落計數(shù)結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義；與對照組相比，兩組間4種牙周可疑致病菌的檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。兩組的CAL值、PD基線情況比較無統(tǒng)計學(xué)差異；治療后0、3、6個月植骨組牙周指標(biāo)結(jié)果：CAL、PD在3、6個月均顯著下降，而非植骨組牙周指標(biāo)較前無統(tǒng)計學(xué)差異；X線片顯示兩組病例基牙牙槽骨無進一步吸收，并且植骨組術(shù)后牙槽骨量有一定程度增加。結(jié)論對于KennedyⅢ牙列缺損末端松動基牙，牙周植骨術(shù)聯(lián)合夾板式金屬烤瓷冠橋修復(fù)，較單純的牙周植骨術(shù)或夾板式金屬烤瓷冠橋的修復(fù)方法更利于保持患牙的健康，可獲得較滿意的近期臨床療效；與試驗組與對照組的細(xì)菌分析結(jié)果相較，同時比較植骨組與非植骨組的臨床療效，發(fā)現(xiàn)牙周植骨術(shù)聯(lián)合夾板式烤瓷聯(lián)冠固定可有效促進牙周骨缺損基牙牙周組織的修復(fù)重建。

關(guān)鍵詞：夾板式固定橋修復(fù)； 牙周植骨術(shù)； 牙周可疑致病菌

KennedyⅢ伴有末端傾斜松動基牙的修復(fù)治療，在臨床中仍以固定義齒修復(fù)居多，夾板固定可以顯著減輕松動基牙的負(fù)擔(dān)，有利于牙周組織恢復(fù)健康[1]。然而，單純的夾板固定，可以使根周牙槽骨停止吸收，然而對于已經(jīng)吸收的牙槽骨，卻難以修復(fù)。近年來，多項研究證明[2-4]：牙周植骨術(shù)對于新附著的再生有一定的積極作用。對于有牙槽骨吸收的末端松動牙的修復(fù)治療，將夾板式金屬烤瓷冠橋與牙周植骨術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，在去除創(chuàng)傷的前提下可以促進牙周骨組織再生，去除深的牙周袋，消除炎癥，穩(wěn)定末端松動基牙，提高了修復(fù)效果[5]。本研究通過觀察修復(fù)治療后0、3、6個月兩種修復(fù)治療方法的牙周致病菌的變化，為牙周植骨術(shù)聯(lián)合夾板式金屬烤瓷橋保留末端松動基牙的修復(fù)治療手段，從微生物學(xué)方面提供相關(guān)的理論依據(jù)及參考。

1材料與方法

1.1研究對象2009年12月-2011年3月，在新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔修復(fù)科門診就診，并符合納入、排除標(biāo)準(zhǔn)的患者20例。隨機分為試驗組和對照組，每組10例。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)診斷為慢性牙周炎輕、中度伴牙列缺損的患者，第一磨牙缺失，遠(yuǎn)端孤立松動牙，X線片顯示：牙槽骨吸收達(dá)根中1/3～1/ 2，松動度為Ⅰ～Ⅱ度； 余留牙≥20 顆，余留牙情況較好，可以滿足固定義齒修復(fù)條件； 具有良好的依從性，按時復(fù)診。維護期主動進行菌斑控制；治療前3 個月內(nèi)未接受系統(tǒng)牙周治療； 能夠簽署知情同意書。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)同時伴有高血壓、糖尿病或遺傳病史等全身系統(tǒng)性疾病的病人； 有金屬過敏史的患者。

實驗材料：人工骨粉、Bio-Gide、高純度鈀銀合金、Vita95瓷粉、Chelex-100、蛋白酶K液、Taq酶、dNTPs、硫乙醇酸鹽傳送培養(yǎng)基、CDC厭氧血瓊脂培養(yǎng)基、特異性引物、標(biāo)準(zhǔn)菌株。

1.4方法

1.4.1牙周植骨術(shù)(1)切開：改良Widman′s法沿牙齦緣切開，對于術(shù)野難以暴露的患牙，選擇縱切口或橫切口。(2)翻瓣：翻開黏骨膜瓣，骨缺損處行根面平整術(shù)、袋壁刮治術(shù)，盡量保留牙齦組織，鄰面的牙齦組織沿切口處翻開，避免牙齦瓣損傷。(3)植骨：骨缺損區(qū)植入適量的羥基磷灰石骨粉，骨下袋則將人工骨植入袋底，塑形，適當(dāng)加壓。實驗中，一壁骨袋、二壁骨袋采用生物膜(Bio-Gide)覆蓋于植入骨外側(cè)，根方超過牙槽骨2～3 mm，并在釉牙骨質(zhì)界水平與根面緊貼，以防止植入骨粉顆粒溢出和上皮及結(jié)締組織長入。(4)牙齦冠向復(fù)位：在黏骨膜瓣的根方鈍性分離，適當(dāng)上提，使其冠方達(dá)到或接近正常的頸緣位置，覆蓋于膜的外側(cè)。(5)縫合：褥式、8字縫合，牙齦覆蓋植入材料，壓迫止血后敷塞滯劑。(6)戴入臨時冠：術(shù)后即刻戴入臨時冠，以對敷用的塞滯劑起到保護的作用，同時對基牙起到的固定作用。(7)術(shù)后維護：術(shù)后7～10 d拆線，繼續(xù)戴用臨時義齒，術(shù)后1～2 w應(yīng)用抗生素預(yù)防感染。漱口水連續(xù)含漱4～6周，控制菌斑，防止感染。前2個月每1～2周復(fù)查一次，局部潔治，消除菌斑。術(shù)后1 w軟毛牙刷刷牙。術(shù)后2～3 w后可恢復(fù)正常刷牙和牙間清潔措施，并定期復(fù)診進行牙周維護。術(shù)后3、6個月拍攝X線片，觀察植骨后骨缺損處骨組織恢復(fù)情況。

1.4.2樣本的收集和輸送早晨11∶00—13∶00，采集前囑患者20 mL清水漱口，隔濕干燥，用已高溫消毒滅菌的40#吸潮紙尖插入修復(fù)體基牙唇、舌側(cè)齦下或者牙周袋內(nèi)停留15 s，取尖端2 mm，置于盛有2 mL硫乙醇酸鹽的Ep管中，0℃下，盡快送至實驗室，用振蕩器充分震蕩混勻30 s，取1 mL原液用于細(xì)菌培養(yǎng)，剩余原液-80℃低溫保存。

1.4.3細(xì)菌培養(yǎng)取原液100 bL，用布氏肉湯增菌液稀釋至10-4濃度。接種CDC厭氧血瓊脂培養(yǎng)基上。將CDC厭氧血瓊脂培養(yǎng)基置于10%CO2、10%H2、80%N2的氣體環(huán)境中，37℃培養(yǎng)48 h。

1.4.4聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測細(xì)菌DNA提取及檢測：(1)將EP管的凍存標(biāo)本置于室溫下自然解凍5 min，加無菌去離子水1 mL，晃動均勻，盡量讓菌斑溶解充分和均勻。(2)將EP管放入低溫高速離心機，調(diào)至溫度：15℃，轉(zhuǎn)速：12 000 r/min，開始離心4 min，結(jié)束后去除上清液。(3)將去除上清液的EP管加入5%的Chelex-100液 150 μL、20 mg/mL的蛋白酶K溶液4 μL，混合均勻。(4)把EP管放入渦旋振蕩器，振蕩頻率調(diào)至2 500～3 000次/min，充分振蕩25 min。(5)將EP管放入電熱恒溫水槽，溫度調(diào)至55℃，水浴3 h，將樣本冷卻至常溫。(6)將自來水煮沸，放入樣本，使水始終保持在沸騰狀態(tài)10 min。(7)將低溫高速離心機調(diào)至12 000 r/min，4℃，放入EP管，離心4 min，吸取上清液，編號，-20℃保存。(8)用分光光度計檢測已提取的細(xì)菌DNA的純度。

1.4.4.1引物4種牙周致病菌的16SrRNA特異性引物序列見表1。

表1　4種牙周致病菌引物序列、退火溫度及片段長度

1.4.4.2PCR反應(yīng)體系及反應(yīng)條件擴增體系25 μL，依次加入 10 mmol/LdNTPs0.5 μL，10 X Buffer 2.5 μL，25 mmol/L MgCl 2 2.5 μL，上下游引物均為(10 pmol/μL)各0.5μL,，DNA模板5 μL，2UTaqDNA聚合酶，無菌去離子水補足；參照此反應(yīng)體系配制4種牙周致病菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株的PCR反應(yīng)體系，同等條件下進行PCR擴增。 反應(yīng)條件為：預(yù)變性95℃5 min，變性95℃30 s，每種細(xì)菌的退火溫度(表1)，延伸72℃1 min，經(jīng)35個循環(huán)后，延伸72℃7 min，4℃保存。

1.4.4.3設(shè)置對照和PCR擴增產(chǎn)物的檢測設(shè)置對照：牙齦單胞菌(Pg ATCC 33277)、伴放線放線桿菌(Aa ATCC 29523)、具核梭桿菌(Fn ATCC25586)、中間普氏菌(Pi ATCC 25611)的標(biāo)準(zhǔn)菌株的擴增產(chǎn)物做陽性對照，以蒸餾水代替DNA模板，其它成分不變的為空白對照。PCR擴增產(chǎn)物檢測：吸取提取細(xì)菌的擴增產(chǎn)物6 μL，與大約1 μL DNA Loading Buffer混合均勻，加在點樣孔內(nèi)，依次按順序點完所有樣，包括陽性對照(標(biāo)準(zhǔn)菌株的PCR產(chǎn)物)及空白對照，最后點5 μL Marker(2000Ladder)；接通電源，調(diào)整電壓為100 V，電流100 mA，30 min后根據(jù)目的片段大小通過凝膠成像儀觀察并記錄結(jié)果。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析；對各組研究對象的檢出率進行比較，應(yīng)用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05； 4種制病菌的數(shù)量用菌落數(shù)表示，菌落數(shù)應(yīng)用菌落形成單位(CFU/mL)的對數(shù)值表示，進行重復(fù)測量方差分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.116SrDNA PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果齦下細(xì)菌標(biāo)本中Pg、Aa、Fn和Pi的PCR擴增產(chǎn)物電泳鑒定結(jié)果見圖1～4。

2.24種牙周致病菌在試驗組與對照組患者齦下細(xì)菌中的陽性例數(shù)的檢測結(jié)果在試驗組中，Pg、Aa、Fn、Pi的陽性檢出率分別為57%、30%、53%、73%；在對照組中Pg、Aa、Fn、Pi的陽性檢出率分別為83%、43%、73%、87%。4種牙周致病菌(Pg、Aa、Fn、Pi)的檢出例數(shù)及檢出率見表2。在試驗組及對照組中4種牙周致病菌在0、3、6個月的都有檢出的情況，并隨時間的推移檢出數(shù)量有增多趨勢，而增多趨勢在對照組較試驗組明顯，結(jié)果見表3。4種牙周致病菌在試驗組0、3、6個月菌落數(shù)量基本趨于穩(wěn)定，而在對照組則呈現(xiàn)明顯上升趨勢，結(jié)果見表4。

注： M: marker； 0: 空白對照； S: 陽性對照； 1-10: 齦下細(xì)菌擴增產(chǎn)物圖1 牙齦卟啉單胞菌(Pg)PCR 檢測電泳圖

圖2　伴放線放線桿菌(Aa)PCR 檢測電泳圖

注： M: marker； 0: 空白對照； S: 陽性對照； 1-10: 齦下細(xì)菌擴增產(chǎn)物圖3　核梭桿菌(Fn)PCR 檢測電泳圖

圖4　中間普氏菌(Pi)PCR 檢測電泳圖

表24種牙周致病菌在試驗組與對照組患者齦下細(xì)菌中的陽性/例數(shù)(%)

牙周致病菌試驗組對照組χ2值P值牙齦卟啉單胞菌(Pg)17(57)25(83)1.8370.258伴放線放線桿菌(Aa)9(30)13(43)0.7400.216具核梭桿菌(Fn)16(53)22(73)1.1570.294中間普氏菌(Pi)22(73)26(87)0.0430.865

表3試驗組、對照組中0、3、6個月4種牙周致病菌的檢出例數(shù)

牙周致病菌24h3個月6個月試驗組 牙齦卟啉單胞菌(Pg)566 伴放線放線桿菌(Aa)333 具核梭桿菌(Fn)565 中間普氏菌(Pi)688對照組 牙齦卟啉單胞菌(Pg)6910 伴放線放線桿菌(Aa)256 具核梭桿菌(Fn)4711 中間普氏菌(Pi)899

2.3試驗組與對照組PD值的分析結(jié)果經(jīng)檢驗，樣本數(shù)據(jù)方差齊且滿足協(xié)方差陣球形性，遂進行重復(fù)測量方差分析檢測。實驗組與對照組0、3、6個月時間點比較(F=1.256，P<0.05; F=51.217，P>0.05)，試驗組與對照組之間PD值存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)(表5)。同一組別不同時間點間比較試驗組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(表6)。

牙周致病菌0個月3個月6個月實驗組 牙齦卟啉單胞菌(Pg)6.22±0.126.24±0.126.24±0.12 伴放線放線桿菌(Aa)5.90±0.235.97±0.226.00±0.18 具核梭桿菌(Fn)5.54±0.225.70±0.175.69±0.20 中間普氏菌(Pi)5.92±0.186.01±0.155.97±0.20對照組 牙齦卟啉單胞菌(Pg)6.13±0.066.20±0.076.36±0.06 伴放線放線桿菌(Aa)5.77±0.145.93±0.156.17±0.14 具核梭桿菌(Fn)5.67±0.205.78±0.185.93±0.37 中間普氏菌(Pi)6.03±0.196.23±0.176.43±0.33

表5　PD值重復(fù)測量實驗結(jié)果方差分析表

時間試驗組對照組0個月6.60±1.515.30±1.493個月2.90±0.884.70±1.256個月1.60±0.704.50±1.08

2.4試驗組與對照組CAL值分析結(jié)果試驗組與對照組之間CAL值存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)(表7)。同一組別不同時間點間比較試驗組有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(表8)。試驗組基牙CAL值在第0、3、6個月隨著時間的延長呈顯著下降趨勢，且在相同時間點比較試驗組與對照組基牙CAL值有下降的趨勢，試驗組明顯優(yōu)于對照組。提示患牙牙周植骨后牙周骨組織高度得到恢復(fù)，使組織達(dá)到理想的牙周新附著，使炎癥因素得到了更加有效的控制。

表7　CAL值重復(fù)測量實驗結(jié)果方差分析表

時間試驗組對照組0個月4.80±1.035.10±1.203個月2.70±0.684.60±1.356個月1.30±0.484.40±1.43

3討論

牙周病引起牙槽骨吸收是牙齒松動最主要的原因之一，牙槽骨一旦被破壞吸收，很難自行重建[6]。牙周植骨術(shù)是一種采用骨或骨的替代品來修復(fù)牙周炎癥造成的牙槽骨缺損的方法[7]。屬再生性牙周手術(shù)，目的在于通過移植材料促進新骨形成，修復(fù)骨缺損，恢復(fù)牙槽骨的解剖形態(tài)，以達(dá)到理想的骨再生或新附著性愈合[8]。固定橋式夾板固定就是將多個患牙和健康牙連接成一個“多根巨牙”，組成一個新的咀嚼單位[9]。通過這樣的方法，使咀嚼力通過夾板傳遞到更多牙上，減輕患牙負(fù)擔(dān)，同時使夾板中每個牙的牙周膜得到充分的生理刺激，促進牙周組織健康[10]。本研究4種致病菌菌落計數(shù)進行比較，結(jié)果表明差異無統(tǒng)計學(xué)意義。試驗組菌落計數(shù)，組內(nèi)差異無統(tǒng)計學(xué)意義；但對照組菌落計數(shù)，組內(nèi)差異卻有統(tǒng)計學(xué)意義。分析本實驗結(jié)果，4種慢性牙周相關(guān)致病菌試驗組與對照組的菌落計數(shù)，統(tǒng)計學(xué)進行重復(fù)測量方差分析后，結(jié)果4種慢性牙周相關(guān)致病菌的菌落計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。雖然臨床口腔牙周檢查結(jié)果提示，試驗組的臨床表現(xiàn)明顯優(yōu)于對照組，但是細(xì)菌菌落計數(shù)沒有明顯差異，PCR法的檢出率也無明顯差異。由于口腔內(nèi)環(huán)境比較復(fù)雜，加之唾液的流動等因素，盡管試驗組植骨術(shù)去除了基牙牙周袋，改善了局部基牙的牙周情況，但是和整體比較，局部的改善并不會對整體有較為明顯的影響。統(tǒng)計學(xué)顯示，試驗組菌落計數(shù)，組內(nèi)差異無統(tǒng)計學(xué)意義；但是，對照組菌落計數(shù)，組內(nèi)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。試驗組，主要是由于修復(fù)治療過程中牙周植骨術(shù)的成功把原有的深的牙周袋消除，消除了松動因素，穩(wěn)定了松動基牙。消滅了細(xì)菌滯留的空間。牙周炎癥得以消除或者緩解，修復(fù)橋體穩(wěn)定了植骨術(shù)，而植骨術(shù)又穩(wěn)定了松動基牙，從而穩(wěn)定了牙周病的發(fā)展，局部基牙牙周細(xì)菌定植生長受到抑制。3個時間點對比，菌落計數(shù)差異不大。而對照組因為沒有完全去除局部基牙的牙周隱患，所以造成局部牙周厭氧菌的菌落計數(shù)有增高的趨勢。前后時間點菌落計數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

從試驗組數(shù)據(jù)可知，夾板式金屬烤瓷冠橋聯(lián)合牙周植骨術(shù)在修復(fù)牙周炎伴牙列缺損的同時可達(dá)到促進患牙牙周骨缺損修復(fù)，引導(dǎo)骨組織再生，使得新生骨組織的量和骨高度均有所增加，促使牙周生理環(huán)境得到一定程度的恢復(fù)和改善，炎癥因子得到有效控制的目的。試驗組經(jīng)過聯(lián)合治療后術(shù)牙PD和CAL的均有所下降，不同時點測量結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異。分析認(rèn)為PD和CAL減少可能是由于聯(lián)合治療后基牙創(chuàng)傷去除，牙周炎癥消除，牙周組織再生的結(jié)果。對照組基牙PD、CAL在0、3、6個月無統(tǒng)計學(xué)差異，提示由于前期的牙周基礎(chǔ)治療使得基牙炎癥消除，且修復(fù)體安裝后未對基牙造成牙周損傷，牙周骨組織也未進一步破壞、吸收，這是夾板治療后基牙的牙周潛力調(diào)動的結(jié)果。

通過本研究，筆者積累了有關(guān)牙周病修復(fù)治療的實踐經(jīng)驗，為后續(xù)研究提供了寶貴的臨床資料及數(shù)據(jù)，有利于進一步研究的深入。其次，牙周炎的治療是系統(tǒng)性的，牙周炎伴牙列缺損的修復(fù)治療則是口腔多學(xué)科密切配合方能順利完成的，通過本研究，我們積累了多學(xué)科積極配合進行牙周系統(tǒng)治療的經(jīng)驗，減少了患者的就診次數(shù)，解決了患者的口腔難題，獲得了患者的好評。

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(本文編輯張巧蓮)

The preliminary analysis of the bacterial effect of main subgingival microbial on bone graft in combination with splint-like PFM bridge

WANG Yi1，HU Yang2，DU Jun1，HE Huiyu2

(1Department of Presthodontics, Traditional Chinese Medical Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, China;2Department of Presthodontics, the First Affiliated Hospitai of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054，China)

Abstract:ObjectiveTo explore the effect of main subgingival microbial flora in microbial bacteriology aspect by dynamic monitoring and quantitative analysis, before and after the bone graft in combination with splint-like PFM bridge treatment on conserving loosened distal abutment of Kennedy Ⅲ periodontic bone defect. Methods20 patients with the loosened distal abutment of Kennedy Ⅲ periodontic bone defect were divided into 2 groups. 10 patients loosened distal teeth were treated by bone graft in combination with splint-like PFM bridge in the treatment group, while the other 10 patients loosened distal teeth were treated with splint-like PFM bridge alone in the control group. Before and after treatment, the fluid of gingival sulous were collected and cultured during 24 hours, 4 weeks and 12 weeks. Porphyromonas gingivalis (Pg), Actinobacillus actinomycetemcomitans (Aa), Fusobacterium ncleatum (Fn) and Preuotella intermedia (Pi) were detected by PCR. ResultsThe differences of colony count of the four subgingival microbial flora between the treatment group and the control group were not statistically significant; the differences of the base line of the value of PD and CAL between the two groups were also not statistically significant. PD and CAL values were reduced in the treatment group after 3 and 6 month. X-ray showed that all cases had no further alveolar bone absorption, and the amount of alveolar bone after treatment were increased with certain degree. ConclusionCompared with splint-like PFM bridge alone, the subgingival microbial flora of patients treated with bone graft in combination with splint-like PFM bridge were declined obviously. In comparison of bacterial analysis between treatment group and control group, we found that bone graft in combination with splint-like PFM bridge could promote the reconstruction of periodontal tissue of loosened distal teeth.

Keywords:bone graft; splint-like PFM bridge; subgingival bacteria

基金項目：烏魯木齊市科學(xué)技術(shù)計劃項目(Y09131002)

作者簡介：王毅(1982-)，男，住院醫(yī)師，研究方向：口腔修復(fù)及種植治療。 通信作者：何惠宇，女，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：口腔修復(fù)及種植，E-mail：wangyi_wy007@163.com。

中圖分類號：R78

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1009-5551(2016)07-0879-06

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2016.07.017

[收稿日期：2015-12-27]