凍融周期移植不同時間囊胚的新生兒結(jié)局比較

王雪，甄璟然，孫正怡，郁琦，鄧成艷，周遠(yuǎn)征，王含必，何方方

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科生殖中心 北京　100730)

凍融周期移植不同時間囊胚的新生兒結(jié)局比較

王雪，甄璟然，孫正怡*，郁琦，鄧成艷，周遠(yuǎn)征，王含必，何方方

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科生殖中心 北京100730)

【摘要】目的比較D5和D6的凍融囊胚移植后的新生兒結(jié)局，進(jìn)一步為復(fù)蘇囊胚的選擇提供指導(dǎo)。方法回顧性分析2005年1月至2012年12月在北京協(xié)和醫(yī)院輔助生育中心進(jìn)行復(fù)蘇囊胚移植并已分娩的515例患者資料。按照冷凍前形成囊胚的時間D5或D6進(jìn)行分組，比較兩組的新生兒出生結(jié)局；并根據(jù)分娩胎數(shù)將患者分為單胎組和雙胎組，分別比較單胎組和雙胎組的新生兒結(jié)局。結(jié)果(1)單胎組：D5組的孕齡、出生體重和出生身長分別為(266.5±14.5)d、(3 387.4±584.8)g和(50.1±2.7)cm，與D6組[分別為(268.5±12.6)d、(3 379.7±540.8)g和(50.1±2.1)cm]相比均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；D5組男女性別比略高于D6組(1.21 vs. 1.08)，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。(2)雙胎組：D5組新生兒的孕齡、出生體重和出生身長與D6組相比亦均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但D5組新生兒的出生體重[(2 531.0±505.4) g]略低于D6組[(2 601.8±503.0) g]；D5組的低體重新生兒發(fā)生率(42.3%)高于D6組(31.4%)，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；D5組的男女性別比(1.20)高于D6組(0.92)，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論在單胎組或雙胎組，D5與D6的囊胚凍融移植后出生的新生兒孕周、出生體重和體長均無統(tǒng)計學(xué)差異，但是呈現(xiàn)出D6組新生兒體重偏大的趨勢；D5組的男女性別比高于D6組，但由于例數(shù)所限，未出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異，還有待于進(jìn)一步研究。

【關(guān)鍵詞】凍融胚胎移植；囊胚；發(fā)育速度；出生結(jié)局

Methods： The data of 515 patients with frozen-thawed blastocysts transfer cycles and delivered in our reproductive center from January 2005 to December 2012 were retrospectively analyzed. The patients were grouped by the day of blastocyst formation (Day 5 or Day 6). Furthermore，the patients were divided into the single-and twins-birth groups according to the numbers of fetus.

Results： In the single birth group，there were no differences in gestational age [(266.5±14.5) days vs. (268.5±12.6) days]，birth weight [(3 387.4±584.8) g vs. (3 379.7±540.8) g] and birth length [(50.1±2.7) cm vs. (50.1±2.1) cm] between Day 5 and Day 6 blastocyst transfer groups (P>0.05，respectively). The ratio between male and female baby in Day 5 group was slightly higher than that in Day 6 group，but not significant (P>0.05). In the twins-birth group，there were also no differences in gestational age，birth weight and birth length between the Day 5 and Day 6 blastocyst transfer groups (P>0.05，respectively). The birth weight in Day 5 group was slightly lower than that in Day 6 group [ (2 531.0±505.4) g vs. (2 601.8±503.0) g]. The rate of low birth weight was lower (42.3% vs. 31.4%) and ratio between male and female baby (1.20 vs. 0.92) was higher in Day 5 group than those in Day 6 group，but not significant (P>0.05).

Conclusions： No matter single-birth or twins-birth，there were no differences in gestational age，birth weight and birth length between Day 5 and Day 6 blastocyst transfer group. But the birth weight in Day 6 group trend to be heavier，and the sex ratio in the Day 5 group was slightly higher than that in Day 6 group. However，it does not appear significant difference due to the limited number of cases，which needs further investigation.

(JReprodMed2016，25(6)：511-516)

輔助生育技術(shù)已經(jīng)成為治療不孕癥的重要手段，經(jīng)典的IVF治療是將體外受精后第3天(D3)形成的卵裂期胚胎移植入患者宮腔內(nèi)。近年來隨著胚胎體外培養(yǎng)系統(tǒng)的不斷完善，囊胚培養(yǎng)得到廣泛應(yīng)用。理論上囊胚移植有很多優(yōu)點，囊胚經(jīng)過了一個再篩選的過程，囊胚移植后的種植率更高，從而活產(chǎn)率增加。另外有研究顯示，移植囊胚階段胚胎可以避免多胎妊娠及相關(guān)并發(fā)癥，也可以提高每周期的妊娠率[1]。

在人早期胚胎的體外發(fā)育過程中，囊胚的發(fā)育速度并不一致，多數(shù)會在體外受精后第5天(D5)或第6天(D6)形成。目前在評估囊胚質(zhì)量時，多數(shù)采用Gardner評分系統(tǒng)對囊胚進(jìn)行形態(tài)學(xué)評價[2]。目前認(rèn)為囊胚的發(fā)育速度也是一個重要參考因素，通常認(rèn)為囊胚的發(fā)育速度越快，發(fā)育潛能越高。但目前關(guān)于囊胚復(fù)蘇移植后的臨床結(jié)局的研究結(jié)論并不一致，有報道認(rèn)為D5囊胚凍融移植后臨床妊娠率、種植率和出生率都顯著高于D6囊胚[3]，但也有研究發(fā)現(xiàn)D5和D6囊胚凍融移植的臨床結(jié)局無明顯差異[4]。在我們之前的研究中也發(fā)現(xiàn)D5組的囊胚種植率要明顯高于D6囊胚[5]，但是僅僅種植率的差異并不能全面代表D5或D6囊胚的發(fā)育潛能，還要考慮到著床后的流產(chǎn)率和新生兒的出生結(jié)局。有研究顯示囊胚移植后新生兒發(fā)生早產(chǎn)和低體重的機率增加[6-8]，也有研究顯示冷凍復(fù)蘇的囊胚移植后發(fā)生巨大兒的比例增加[9]，還有研究顯示延長培養(yǎng)至囊胚階段并不影響新生兒結(jié)局[10-11]。然而這些都是將囊胚與卵裂期胚胎進(jìn)行的比較，目前尚無研究來比較D5和D6的囊胚凍融移植后的新生兒出生結(jié)局。

因此，本研究按照冷凍前形成囊胚的時間(D5或D6)進(jìn)行分組，比較D5或D6兩組的新生兒出生結(jié)局。為了避免多胎對結(jié)果的影響，我們根據(jù)分娩胎數(shù)分為單胎組和雙胎組，分別在單胎組和雙胎組分別比較D5和D6兩組新生兒的出生結(jié)局。進(jìn)一步為復(fù)蘇日囊胚的選擇提供指導(dǎo)。

對象與方法

一、研究對象及分組

收集2005年1月至2012年12月在我院生殖中心進(jìn)行囊胚復(fù)蘇移植并已分娩的患者資料，共納入515例，進(jìn)行回顧性分析。所有囊胚均采用玻璃化法進(jìn)行冷凍和復(fù)蘇。

根據(jù)冷凍前形成囊胚的時間(D5或D6)分組：在受精后第5天形成囊胚者，定義為D5組；在受精后第6天形成囊胚者，定義為D6組。剔除在一個復(fù)蘇周期中同時行D5和D6凍融囊胚移植的患者。并根據(jù)分娩胎數(shù)將患者分為單胎組和雙胎組。

二、研究方法

1.囊胚培養(yǎng)：獲卵后常規(guī)體外受精或卵胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)授精。獲卵后第1天觀察卵母細(xì)胞受精情況，獲卵后第3天挑選優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)行卵裂期胚胎移植；移植后的剩余胚胎經(jīng)患者知情同意全部進(jìn)行囊胚培養(yǎng)，在受精后第5天或第6天分別觀察囊胚形成情況及形態(tài)，采用Gardner評分系統(tǒng)對囊胚進(jìn)行評分[2]。

2. 胚胎冷凍和復(fù)蘇：本中心全部采用玻璃化冷凍方法進(jìn)行胚胎冷凍。囊胚冷凍方法參照以前文獻(xiàn)所述[5，12-13]。囊胚冷凍之前進(jìn)行人工皺縮，然后將囊胚放入預(yù)平衡液中平衡2 min，之后將胚胎轉(zhuǎn)移入玻璃化冷凍液中平衡30 s，將胚胎轉(zhuǎn)移至冷凍環(huán)(cryoloop環(huán))上，直接浸入液氮保存。囊胚復(fù)蘇在移植當(dāng)天進(jìn)行：將含有囊胚的冷凍環(huán)從液氮中取出后將胚胎浸入復(fù)蘇液中，復(fù)蘇后的囊胚全部進(jìn)行激光輔助孵化；將復(fù)蘇囊胚移入提前準(zhǔn)備好的囊胚培養(yǎng)液(G2，Vitrolife，瑞典)中，放入37℃、6% CO2和5% O2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2 h。移植前評估胚胎的存活情況，囊胚腔重新擴張判斷為囊胚存活。

3.子宮內(nèi)膜準(zhǔn)備及胚胎移植：子宮內(nèi)膜準(zhǔn)備方法如之前文章所述[5，12]：(1)自然周期法：排卵前注射HCG(艾澤，雪蘭諾，瑞士)2 000 U，之后超聲監(jiān)測到卵泡破裂后開始給予黃體支持(肌注黃體酮20～40 mg/d)，在排卵后第6天移植胚胎；(2)人工周期法：月經(jīng)第2～4天常規(guī)B超檢查，口服戊酸雌二醇(補佳樂，先靈，德國)。B超監(jiān)測內(nèi)膜，當(dāng)內(nèi)膜厚度達(dá)到8 mm時肌注黃體酮(20 mg×2 d、40 mg×2 d、20～40 mg×1 d)，第6天進(jìn)行囊胚復(fù)蘇移植。胚胎移植均在B超引導(dǎo)下進(jìn)行，每周期移植1～2個胚胎。移植后常規(guī)采用肌注黃體酮進(jìn)行黃體支持。

4. 隨訪：所有產(chǎn)婦于分娩后1～3個月進(jìn)行電話隨訪。內(nèi)容包括產(chǎn)科并發(fā)癥、新生兒的出生日期、分娩方式、孕齡、新生兒性別、出生體重、體長、出生時的Apar評分、出生缺陷等。

三、分析指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

移植后第7日測血清HCG>5 U/L則判斷為生化妊娠，若移植后4周超聲檢查見胎心和胎囊則判斷為臨床妊娠。

孕齡是指末次月經(jīng)第1天起至分娩時為止的一段時間；足月兒是指孕齡滿37周(259 d)而未滿42周(294 d)的新生兒；早產(chǎn)兒是指孕齡滿28周(196 d)而未滿37周(259 d)的新生兒；正常出生體重是指出生體重在2 500～4 000 g之間者；低出生體重兒(LBW)是指出生體重<2 500 g者，其中體重不足1 500 g者稱為極低體重兒(VLBW)；巨大兒是指出生體重≥4 000 g者。Apar評分滿10分者為正常新生兒，評分7分以下的新生兒考慮患有輕度窒息，評分在4分以下考慮患有重度窒息。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，對計量資料進(jìn)行t檢驗，對分類變量資料采用卡方檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

一、D5和D6囊胚復(fù)蘇移植的出生結(jié)局比較

D5組的孕齡為(258.8±17.2)d，顯著低于D6組(262.6±14.7)d，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。但是D5的雙胎發(fā)生率也顯著高于D6組(P<0.05)，因此孕齡的差異與D5組和D6組的雙胎發(fā)生率差異有關(guān)(表1)。

盡管D5組新生兒的出生體重[(2 976.2±695.2)g]和出生身長[(48.8±3.2)cm]，均低于D6組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。兩組的剖宮產(chǎn)率都非常高(91.9% vs. 92.8%)，但組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。D5組低出生體重的發(fā)生率(23.2%)高于D6組(15.1%)，而D5組巨大兒的發(fā)生率(6.4%)略低于D6組(7.8%)，但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(表1)。

D5組共出生406個新生兒，其中男孩222個，女孩184個，男女性別比為1.21；而D6組分娩258個新生兒，男女性別比為1.01(130∶128)，組間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(表1)。

二、單胎新生兒出生結(jié)局比較

為了排除D5組和D6組雙胎發(fā)生率對出生結(jié)局的影響，我們將單胎和雙胎分娩的出生結(jié)局分別加以統(tǒng)計分析。

所有單胎分娩的患者平均年齡為(31.7±4.0)歲，共分娩新生兒366個，孕齡、出生體重和出生身長分別為(267.3±13.7)d、(3 384.1±565.7)g和(50.1±2.5)cm。其中D5組分娩210個新生兒，孕齡、出生體重和出生身長分別為(266.5±14.5)d、(3 387.4±584.8)g和(50.1±2.7)cm，與D6組[分別為(268.5±12.6)d、(3 379.7±540.8)g和(50.1±2.1)cm)]相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(表2)。

表1　D5與D6組新生兒情況比較[(x-±s)，%]

注：與D6組比較，*P<0.05

D6組未出生極低出生體重兒，D5組的低出生體重率略高于D6組，D5組的巨大兒發(fā)生率略低于D6組，但兩組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)(表2)。

D5組的男女性別比(1.21)略高于D6組(1.08)，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。另外，在D5組發(fā)生1例出生缺陷為動脈導(dǎo)管未閉合并腦積水，發(fā)生2例輕度新生兒窒息(Apar評分為7分)，1例新生兒死亡；在D6組發(fā)生1例新生兒窒息(表2)。

表2　D5與D6組單胎新生兒情況比較[(x-±s)，%]

三、雙胎新生兒出生結(jié)局比較

雙胎分娩的患者平均年齡為(31.8±4.1)歲，149例患者共分娩298個新生兒，孕齡、出生體重和出生身長分別為(251.6±15.3)d、(2 555.1±504.9)g和(47.3±2.9)cm。其中D5組分娩196個新生兒，新生兒的孕齡、出生體重和出生身長與D6組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但是D5組新生兒的出生體重(2 531.0±505.4)g略低于D6組的(2 601.8±503.0)g(表3)。

兩組均未出生巨大兒，D5組的低出生體重兒發(fā)生率(42.3%)高于D6組(31.4%)，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。D5組的男女性別比(1.20)高于D6組(0.92)，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。另外，在D5組發(fā)生2例輕度新生兒窒息(Apar評分為7分)，D6組發(fā)生1例出生缺陷為雙側(cè)睪丸未降(表3)。

表3　D5和D6組雙胎新生兒情況比較[(x-±s)，%]

討論

在胚胎的體外發(fā)育過程中，卵裂期胚胎發(fā)育至囊胚階段時，經(jīng)過再選擇，發(fā)育潛能差的胚胎會被淘汰，因此認(rèn)為進(jìn)行囊胚移植更符合自然形態(tài)，更有利于胚胎著床，從而獲得更好的臨床結(jié)局。多數(shù)胚胎會在受精后D5或D6形成囊胚。我們將形成的囊胚進(jìn)行玻璃化冷凍保存，之后再進(jìn)行復(fù)蘇移植。在前面的研究中我們發(fā)現(xiàn)D5的囊胚移植后的種植率、臨床妊娠率和活產(chǎn)率均高于D6組囊胚[5]，這與很多學(xué)者的研究結(jié)論相似[14-16]。但是，關(guān)于D5和D6的囊胚復(fù)蘇移植后的新生兒出生結(jié)局分析的研究極少。因此本文對兩組胚胎的出生結(jié)局進(jìn)行了比較。

在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)D5組的孕齡為(258.8±17.2)d，顯著低于D6組的(262.6±14.7)d，而且D5組新生兒的出生體重(2 976.2±695.2)g和出生身長(48.8±3.2)cm也均低于D6組的(3 075.8±648.5)g和(49.2±2.6)cm，但無統(tǒng)計學(xué)差異。分析原因可能與D5組的雙胎發(fā)生率較高有關(guān)。因此，為了避免胎兒數(shù)對我們的結(jié)果產(chǎn)生混雜影響，我們根據(jù)患者分娩的胎數(shù)分為單胎和雙胎分別分析。我們發(fā)現(xiàn)，在單胎患者中，D5組的孕齡(266.5±14.5)d略低于D6組的(268.5±12.6)d，而且在D5組低出生體重的比例略高于D6組；在雙胎分娩的患者，D5的孕齡(250.6±16.1)d略低于D6組的(253.6±13.4)d，D5組低出生體重兒的比例高于D6組，而且我們發(fā)現(xiàn)D5組出生體重略低于D6組。雖然這些差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，但是我們看到似乎存在這樣一個趨勢：在體外培養(yǎng)時間越長，移植懷孕后的孕周越長，而且出生體重越重。這與M?kinen等[9]的研究結(jié)論相似，他們發(fā)現(xiàn)移植D5或D6的胚胎后發(fā)生大于孕齡兒(LGA)的OR值明顯高于移植D2的胚胎，因此認(rèn)為體外培養(yǎng)時間越長，越容易發(fā)生大于孕齡兒。另外，在瑞典最近的兩項研究中，也發(fā)現(xiàn)隨著胚胎在體外培養(yǎng)時間的延長，發(fā)生小于孕齡兒(SGA)的比例降低(從3.2%下降至2.5%)，盡管無統(tǒng)計學(xué)差異[17-18]。但是也有不同的研究結(jié)論。最近一項大型研究發(fā)現(xiàn)，不論胚胎在體外培養(yǎng)3 d、5 d或6 d，出生LGA或SGA嬰兒的比例無明顯差別[10]。這與Hiraoka等[4]的研究結(jié)論相似，他們比較了D5、D6和D7三組囊胚凍融移植后的出生結(jié)局，發(fā)現(xiàn)三組的孕周、早產(chǎn)率和平均出生體重沒有顯著差異，認(rèn)為不論哪天形成的囊胚移植后都有相似的發(fā)育潛能。

胎兒的孕周、身長和出生體重受多種因素的影響，具體原因尚不清楚。有動物研究發(fā)現(xiàn)，在囊胚形成時，滋養(yǎng)外胚層和內(nèi)細(xì)胞團細(xì)胞分布的改變會影響胎兒的大小，當(dāng)滋養(yǎng)層細(xì)胞多時，胎盤體積會增加，反之，當(dāng)內(nèi)細(xì)胞團細(xì)胞數(shù)增加時，胎兒會增大[19-20]。也有動物研究顯示體外培養(yǎng)方法和體外培養(yǎng)基的成分會誘導(dǎo)發(fā)生大胎兒綜合征[21]。最近有關(guān)于人類胚胎的隨機研究發(fā)現(xiàn)，新生兒的出生體重會受不同胚胎培養(yǎng)基的影響，但是孕周不受培養(yǎng)基的影響[21-22]?？傊绊懶律鷥撼錾w重的因素眾多，如父母的遺傳因素、母親的年齡和母親的營養(yǎng)等，因此D5和D6的囊胚凍融移植后新生兒的出生體重是否有差異還有待于進(jìn)一步研究。

在我們的研究中，D5組囊胚凍融移植后出生的新生兒的男女性別比高于D6組，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在分為單胎組和雙胎組后，D5組男女性別比仍然高于D6組，且雙胎組差異更明顯。在小鼠、牛和豬等動物中的研究提示，雄性胚胎比雌性胚胎發(fā)育更快[23-24]。在人類胚胎的體外培養(yǎng)中，也認(rèn)為細(xì)胞分裂速度越快、細(xì)胞數(shù)越多的胚胎其遺傳物質(zhì)為男性的可能性越大，適當(dāng)延長體外培養(yǎng)時間更容易選擇出男性胚胎，囊胚階段胚胎移植時的男女性別比要高于卵裂期胚胎，而且凍融囊胚移植后的男女性別比高于新鮮囊胚移植[25-27]。有研究發(fā)現(xiàn)，與同發(fā)育時期的女性胚胎相比，男性胚胎的形態(tài)學(xué)評分會更好，如72%的5期或6期囊胚是男性胚胎，而60%的3期囊胚為女性胚胎[25]。我們在胚胎培養(yǎng)至D5時，優(yōu)先挑選內(nèi)細(xì)胞團和滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)目多而且排列緊密的優(yōu)質(zhì)囊胚進(jìn)行冷凍保存，在復(fù)蘇移植時優(yōu)先挑選冷凍的優(yōu)質(zhì)囊胚復(fù)蘇移植，因此D5的囊胚中男性比例大一些。雖然在男性胚胎和女性胚胎之間存在的胚胎評分差異不能反映胚胎的活性差異，但是研究提示，與女性胚胎相比，男性胚胎能夠趨于以最快的速度達(dá)到最終囊胚階段[24]。其具體作用機制尚不清楚，但越來越多的證據(jù)顯示，Y染色體上的某些生長因子對胚胎的發(fā)育有提速作用，而存在于女性而非男性胚胎的第二條X染色體有阻擋卵裂期胚胎向桑葚胚階段發(fā)育的作用，所以男性胚胎和女性胚胎對體外培養(yǎng)條件的應(yīng)答不同[28]。這只是一些初步猜測，還有待于進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果提示，在單胎組或雙胎組，D5與D6的囊胚凍融移植后出生的新生兒的孕周、出生體重和體長均無統(tǒng)計學(xué)差異，D5組的男女性別比高于D6組，但由于例數(shù)所限，未出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異。因此，D5和D6凍融囊胚的出生結(jié)局是否有差異還有待于進(jìn)一步大樣本量的隨訪研究。

【參考文獻(xiàn)】

[1]Glujovsky D，Blake D，F(xiàn)arquhar C，et al. Cleavage stage versus blastocyst stage embryo transfer in assisted reproductive technology[J/CD]. Cochrane Database Syst Rev，2012，7：CD002118.

[2]Gardner DK，Lane M，Stevens J，et al. Blastocyst score affects implantation and pregnancy outcome：towards a single blastocyst transfer[J]. Fertil Steril，2000，73：1155-1158.

[3]Kovalevsky G，Carney SM，Morrison LS，et al. Should embryos developing to blastocysts on day 7 be cryopreserved and transferred：an analysis of pregnancy and implantation rates[J]. Fertil Steril，2013，100：1008-1012.

[4]Hiraoka K，Hiraoka K，Miyazaki M，et al. Perinatal outcomes following transfer of human blastocysts vitrified at day 5，6 and 7[J]. J Exp Clin Assist Reprod，2009，6：4.

[5]王雪，甄璟然，孫正怡，等. 囊胚發(fā)育速度對凍融移植結(jié)局的影響[J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2014，23：356-360.

[6]Kalra SK，Ratcliffe SJ，Barnhart KT，et al. Extended embryo culture and an increased risk of preterm delivery[J]. Obstet Gynecol，2012，120：69-75.

[7]Dar S，Joanne G，Librach CL. Reply：Extended culture and the risk of preterm delivery in singletons：confounding by indication?[J]. Hum Reprod，2013，28：2021-2022.

[8]Dar S，Librach CL，Gunby J，et al. Increased risk of preterm birth in singleton pregnancies after blastocyst versus Day 3 embryo transfer：Canadian ART Register (CARTR) analysis[J]. Hum Reprod，2013，28：924-928.

[9]M?kinen S，S?derstr?m-Anttila V，Vainio J，et al. Does long in vitro culture promote large for gestational age babies?[J]. Hum Reprod，2013，28：828-834.

[10]Fernando D，Halliday JL，Breheny S，et al. Outcomes of singleton births after blastocyst versus nonblastocyst transfer in assisted reproductive technology[J]. Fertil Steril，2012，97：579-584.

[11]Oron G，Sokal-Arnon T，Son WY，et al. Extended embryo culture is not associated with increased adverse obstetric or perinatal outcome[J]. Am J Obstet Gynecol，2014，211：165.e1-7.

[12]王雪，甄璟然，孫正怡，等. 囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞評分與移植后第7日血β-HCG和妊娠結(jié)局的關(guān)系[J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2015，24：707-712.

[13]甄璟然，孫正怡，鄧成艷，等. 玻璃化冷凍囊胚復(fù)蘇移植與新鮮胚胎移植的圍產(chǎn)期狀況比較[J]. 生殖醫(yī)學(xué)雜志，2009，18：86-89.

[14]Levens ED，Whitcomb BW，Hennessy S，et al. Blastocyst development rate impacts outcome in cryopreserved blastocyst transfer cycles[J]. Fertil Steril，2008，90：2138-2143.

[15]Liebermann J. Vitrification of human blastocysts：an update[J/OL]. Reprod Biomed Online，2009，19(Suppl 4)：4328.

[16]Kato K，Ueno S，Yabuuchi A，et al. Women’s age and embryo developmental speed accurately predict clinical pregnancy after single vitrified-warmed blastocyst transfer[J/OL]. Reprod Biomed Online，2014，29：411-416.

[17]K?llén B，F(xiàn)innstr?m O，Lindam A，et al. Blastocyst versus cleavage stage transfer in in vitro fertilization：differences in neonatal outcome?[J]. Fertil Steril，2010，94：1680-1683.

[18]Sazonova A，K?llen K，Thurin-Kjellberg A，et al. Obstetric outcome after in vitro fertilization with single or double embryo transfer[J]. Hum Reprod，2011，26：442-450.

[19]Leese HJ，Donnay I，Thompson JG. Human assisted conception：a cautionary tale. Lessons from domestic animals[J]. Hum Reprod，1998，13(Suppl 4)：184-202.

[20]Walker SK，Hartwich KM，Robinson JS. Long-term effects on offspring of exposure of oocytes and embryos to chemical and physical agents[J]. Hum Reprod Update，2000，6：564-577.

[21]Young LE，Sinclair KD，Wilmut I. Large offspring syndrome in cattle and sheep[J]. Rev Reprod，1998，3：155-163.

[22]Nelissen EC，Van Montfoort AP，Coonen E，et al. Further evidence that culture media affect perinatal outcome：findings after transfer of fresh and cryopreserved embryos[J]. Hum Reprod，2012，27：1966-1976.

[23]Burgoyne PS. A Y-chromosomal effect on blastocyst cell number in mice[J]. Development，1993，117：341-345.

[24]Mittwoch U. Blastocysts prepare for the race to be male[J]. Hum Reprod，1993，8：1550-1555.

[25]Alfarawati S，F(xiàn)ragouli E，Colls P，et al. The relationship between blastocyst morphology，chromosomal abnormality，and embryo gender[J]. Fertil Steril，2011，95：520-524.

[26]Bu Z，Chen ZJ，Huang G，et al. Live birth sex ratio after in vitro fertilization and embryo transfer in China--an analysis of 121，247 babies from 18 centers[J/OL]. PLoS One，2014，9：e113522.

[27]Maalouf WE，Mincheva MN，Campbell BK，et al. Effects of assisted reproductive technologies on human sex ratio at birth[J]. Fertil Steril，2014，101：1321-1325.

[28]Gutiérrez-Adán A，Oter M，Martínez-Madrid B，et al. Differential expression of two genes located on the X chromosome between male and female in vitro-produced bovine embryos at the blastocyst stage[J]. Mol Reprod Dev，2000，55：146-151.

[編輯：羅宏志]

Effect of blastocyst formation time on neonatal outcomes in frozen-thawed blastocyst transfer cycles

WANG Xue，ZHEN Jing-ran，SUN Zheng-yi*，YU Qi，DENG Cheng-yan，ZHOU Yuan-zheng，WANG Han-bi，HE Fang-fang

DepartmentofObstetrics&Gynecology，PekingUnionMedicalCollegeHospital，PekingUnionMedicalCollege/ChineseAcademyofMedicalSciences，Beijing100730

【Abstract】Objective： To compare the neonatal outcomes of transplantation of frozen-thawed blastocyst on Day 5 or Day 6.

Key words：Frozen-thawed embryo transfer；Blastocyst；Development rate；Birth outcome

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.06.006

【收稿日期】2016-02-24；【修回日期】2016-03-30

【作者簡介】王雪，女，山東濰坊人，博士，實習(xí)研究員，婦科內(nèi)分泌專業(yè).(*通訊作者)