芩榆散治療雞人工感染大腸桿菌病試驗(yàn)

朱廣雙，季慕寅，蕭　晟，王本忠，張海燕(蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院　生物工程學(xué)院，安徽　蕪湖　241003)

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芩榆散治療雞人工感染大腸桿菌病試驗(yàn)

朱廣雙，季慕寅，蕭晟，王本忠，張海燕
(蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，安徽蕪湖241003)

摘要:目的:探討芩榆散對雞人工感染大腸桿菌病的治療效果。方法:選取200羽14日齡羅曼公雞，其中40只為空白對照組，治療試驗(yàn)選取160羽接種大腸桿菌O1造病，次日將發(fā)病雞隨機(jī)分為4組，其中第1 －3組分別為高、中、低劑量的藥物治療試驗(yàn)組，分別在飼料中添加3.0%、1.5%和0.75%的芩榆散，第4組為陽性對照組，不用藥，第5組為空白對照組，各組連續(xù)處理5 d，第6 d統(tǒng)計(jì)各組的有效率。結(jié)果:高劑量組芩榆散的痊愈率(67.5%)和有效率(85%)最高，均顯著高于陽性對照組。結(jié)論:該散劑可用于雞大腸桿菌病的治療。

關(guān)鍵詞:雞;人工感染;大腸桿菌病;芩榆散;痊愈率;有效率

雞大腸桿菌病是由致病性血清型大腸桿菌引起的各種疾病的總稱，其主要的病型有胚胎和幼雛的死亡、敗血癥、氣囊炎、心包炎、輸卵管炎、腸炎、腹膜炎和大腸桿菌性肉芽腫等［1］。由于該病常和霉形體病合并感染，又常繼發(fā)其他傳染病(如新城疫、禽流感惑、傳染性支氣管炎、巴氏桿菌病等)，故該病治療十分困難。目前本病已成為危害養(yǎng)禽業(yè)的重要傳染病，常造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，應(yīng)引起人們對雞大腸桿菌病的足夠重視。抗生素的應(yīng)用對本病的治療雖然起到了一定作用，但使得大腸桿菌對其產(chǎn)生了抗藥性，抗生素的敏感性下降，同時，也產(chǎn)生了藥物殘留問題，直接影響肉雞產(chǎn)品安全衛(wèi)生與出口貿(mào)易［2］。

目前，人們開始重新重視傳統(tǒng)中藥，中藥具有殘毒低，能夠調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫機(jī)能和不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)［3］，在畜禽傳染病防治中，發(fā)揮著越來越為重要的作用。清熱燥濕、澀腸止瀉的中藥種類繁多，可以組方治療雞大腸桿菌病，來取代目前以抗生素為主的治療雞大腸桿菌的辦法，解決抗生素藥物殘留和抗藥性的問題，生產(chǎn)無公害、綠色農(nóng)產(chǎn)品。本試驗(yàn)通過人工誘發(fā)雞大腸桿菌病，然后用芩榆散進(jìn)行治療，旨在確認(rèn)該藥對雞大腸桿菌病的療效，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)藥物

黃芩、地榆、老鸛草和地錦草四味中藥，由蕪湖同仁堂藥房購入，按照比例粉碎、混合，加工制備，而得芩榆散方劑。

雞大腸桿菌O1分離株，由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)教研室提供。將菌種接種普通營養(yǎng)平板，37℃培養(yǎng)24 h復(fù)壯后，挑選典型生長菌落接種于普通液體培養(yǎng)基，37℃搖動培養(yǎng)8 h。通過麥?zhǔn)媳葷岱y定菌液A610的OD吸光度值和預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，確定攻毒的菌液濃度為1×107CFU/mL。

1.3方法

1日齡羅曼公雞(購自南京湯泉農(nóng)墾種雞場) 200羽，常規(guī)飼養(yǎng)至14日齡時，隨機(jī)分為5組，每組40羽。第1～4組均用大腸桿菌O1攻毒，每羽口服、肌肉注射各0.5 ml菌液、第二天雞群普遍出現(xiàn)癥狀時，第1～3組為用藥高、中、低劑量組，分別在日糧中添加3.0%、1.5%、0.75%芩榆散;第4組為陽性對照組，人工造病，且日糧不添加藥物;第5組為空白對照組，隔離飼養(yǎng)，不攻毒，日糧也不添加藥物［4］。各組連續(xù)處理5 d，第6 d統(tǒng)計(jì)療效。

1.4觀察指標(biāo)

每天觀察雞的臨床癥狀表現(xiàn)，記錄死亡只數(shù);剖檢死亡病雞，取病料進(jìn)行病原分離培養(yǎng)、鑒定。病死雞用0.1%新潔爾滅溶液浸泡后，無菌術(shù)打開腹腔，采集肝臟、心包液等病料接種普通營養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)24 h后，接種麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)18～24 h，挑取可疑菌落涂片，革蘭氏染色，鏡檢，接種營養(yǎng)肉湯進(jìn)行純培養(yǎng)，24 h后轉(zhuǎn)接普通營養(yǎng)瓊脂斜面，進(jìn)一步接種伊紅美藍(lán)瓊脂、SS瓊脂和三糖鐵斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，取純培養(yǎng)物分別作硫化氫試驗(yàn)、M－R試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、V－P試驗(yàn)、枸櫞酸鹽試驗(yàn)、動力試驗(yàn)［5］;并接種葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇等生化管進(jìn)行生化鑒定。

1.5藥效判定

按如下標(biāo)準(zhǔn)判定療效:

痊愈:雞只精神活潑，飲食完全正常。

顯效:雞只存活，但有臨床癥狀，精神及飲食未完全正常。

成都市幾年前率先開始在中小學(xué)推廣“中華經(jīng)典誦讀”活動，按照“重在潛移默化，貴在扎實(shí)持久”的原則，將誦讀活動逐步融入中小學(xué)生的日常學(xué)習(xí)生活中。在此基礎(chǔ)上，成都市把圖書配備、電子圖書館建設(shè)等作為工作重點(diǎn)之一，各學(xué)校也加強(qiáng)班級圖書角、學(xué)校圖書室的建設(shè)，帶動市級、縣級尤其是社區(qū)圖書館的開放利用。這些措施，為建設(shè)書香成都、書香校園提供了基本的保障。

無效:雞只死亡，剖檢呈典型的雞大腸桿菌病病變。

保護(hù)率或有效率=存活羽數(shù)÷試驗(yàn)樣本數(shù)，痊愈率=痊愈羽數(shù)÷試驗(yàn)樣本數(shù)，顯效率=顯效羽數(shù)÷試驗(yàn)樣本數(shù)，無效率=無效羽數(shù)÷試驗(yàn)樣本數(shù)。

1.6數(shù)據(jù)處理

用生物學(xué)統(tǒng)計(jì)方法檢驗(yàn)、比較各組有效率的差異顯著性。

2　結(jié)果與分析

2.1造模結(jié)果

雞群在接種大腸桿菌13 h后開始出現(xiàn)癥狀，主要表現(xiàn)為精神沉郁，食欲下降或廢絕，羽毛蓬松，兩翼下垂，頭頸縮入，閉眼昏睡，不愿活動，嚴(yán)重者臥地不起，大部分雞只排白色水樣稀糞，24 h后普遍出現(xiàn)上述癥狀，28 h后開始出現(xiàn)死亡，剖檢的病變特征為脾腫大、肝充血腫大、質(zhì)脆易碎、漿膜增厚、有大量滲出物，心包腔中有大量纖維素性滲出物，腸系膜出血。

分離菌株在營養(yǎng)瓊脂上形成圓形凸起、光滑、濕潤、半透明灰白色菌落;在麥康凱瓊脂上形成紅色菌落;在伊紅美藍(lán)瓊脂上產(chǎn)生黑色金屬閃光的菌落;在SS瓊脂上生長較差，呈紅色;三糖鐵培養(yǎng)基產(chǎn)酸產(chǎn)氣，初步鑒定是大腸桿菌。鑒別試驗(yàn)結(jié)果見表1，生化試驗(yàn)均呈陽性;硫化氫試驗(yàn)出現(xiàn)黑色沉淀，呈陰性; MR試驗(yàn)呈陽性;吲哚試驗(yàn)呈陽性;甲基紅試驗(yàn)呈陽性; V－P試驗(yàn)呈陰性;枸櫞酸鹽試驗(yàn)呈陰性;動力試驗(yàn)呈陽性，表明分離菌株為大腸桿菌［6］。

表1　分離菌株的生化試驗(yàn)結(jié)果Table 1　 Biochemical test results of isolated strains

表1分離菌株生化試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)臨床癥狀、剖檢變化和細(xì)菌分離鑒定，證明雞人工感染大腸桿菌病造模試驗(yàn)成功。

2.2治療結(jié)果

芩榆散治療試驗(yàn)雞大腸桿菌病效果詳見表2。結(jié)果顯示，與陽性對照組相比，藥物試驗(yàn)組雞群的臨床癥狀均呈現(xiàn)不同程度的減輕，僅有部分雞只出現(xiàn)典型臨床癥狀和死亡。芩榆散高劑量組的有效率(85.0%)、痊愈率(67.5%)為最高，其次為芩榆散中劑量組(77.5%)、(62.5%)，這2組的有效率顯著高于芩榆散低劑量組(65.0%) (P＜0.05) ;各組之間的顯效率差異不顯著(P＞0.05)。

表2　芩榆散治療試驗(yàn)性雞大腸桿菌病效果Table 2　 The curative effect of Qinxian powerd to control chicken E.coil

3　結(jié)論與討論

雞大腸桿菌病是由埃希氏大腸桿菌引起的一種常見疾病，常呈急性敗血癥，發(fā)病率和死亡率均較高，對養(yǎng)禽業(yè)危害嚴(yán)重。氟苯尼考、恩諾沙星是目前臨床上(除頭孢類抗生素)防治禽源大腸桿菌的主要抗菌藥，但對氟苯尼考、恩諾沙星的相關(guān)研究相對較少［7］，耐藥性調(diào)查［8］結(jié)果表明隨著這2種藥物在臨床上的大量使用，大腸桿菌對氟苯尼考、恩諾沙星的耐藥性逐年增加，這2種藥物的療效已大大降低。抗生素的廣泛使用及濫用很容易使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，細(xì)菌耐藥株的產(chǎn)生對于疾病的防治造成了極大的困難。

中獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為，雞大腸桿菌病按中獸醫(yī)理論類屬于濕熱壅積腸道的里熱證、泄瀉證，大多由外感暑濕、疫毒之邪，或飲食不潔，濕熱郁結(jié)腸內(nèi)，胃腸受損，運(yùn)化失常，濕熱內(nèi)生，致使氣血阻滯，濕郁熱蒸，腸胃氣化被阻，氣血與暑濕熱毒博結(jié)，造成濕熱泄瀉，治宜健脾補(bǔ)中，清熱解毒，燥濕止?。?］。芩榆散是依據(jù)中獸醫(yī)學(xué)理論，同時結(jié)合腹瀉病的特點(diǎn)，以治本、治標(biāo)、扶正祛邪為原則，芩榆散由黃芩、地榆、老鸛草和地錦草等四味中藥制成。設(shè)計(jì)以清熱燥濕的黃芩為主藥、以涼血止血、澀腸止瀉的地錦草、地榆、老鸛草等為佐藥，方中黃芩［10］、地錦草［11］對大腸桿菌均有較好的抑制效果;地錦草［11］、老鸛草［12］和地榆［13］，涼血止血、澀腸止瀉，可以修復(fù)胃腸道損傷、潰瘍，常用于腸炎的治療。以上各味單方藥合用組方，具有清熱燥濕、收斂止瀉功效和較強(qiáng)的抗菌作用，抗菌機(jī)理與抗生素治療類似，干擾細(xì)菌細(xì)胞壁合成，抑制細(xì)菌核酸合成，抑制細(xì)菌生長［14］，可以用于治療雞大腸桿菌病。

據(jù)報(bào)道［15］，對黃芩抗菌作用的研究大多局限于體外試驗(yàn)法，體外試驗(yàn)采用平皿內(nèi)試驗(yàn)物稀釋法。本試驗(yàn)采用體內(nèi)試驗(yàn)方法研究了芩榆散的抗菌作用，治療試驗(yàn)中芩榆散高劑量組的保護(hù)率為最高，將攻毒量的致病菌注入雛雞體內(nèi)，再將藥物以高中低三組不同劑量拌料投給已感染的雛雞，觀察其保護(hù)情況，結(jié)果表明高劑量組的治療效果最好，說明芩榆散可以用于治療禽病。本試驗(yàn)研究為生產(chǎn)無公害、綠色禽產(chǎn)品提供條件，在治療雞大腸桿菌病方面具有較好的推廣價值。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，芩榆散可有效降低人工誘發(fā)的雞大腸桿菌病的死亡率，高劑量組的治療效果最好，略高于中劑量組，顯著高于低劑量組和感染對照組。芩榆散中劑量組也有顯著的治療效果，與高劑量組差異不顯著，結(jié)合生產(chǎn)成本和飼料營養(yǎng)結(jié)構(gòu)考慮，可選用中劑量治療雞大腸桿菌病。

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(責(zé)任編輯:馬世堂)

Experiments of Treating Artificial Infection of Escherichia Coli with Qinyu Powder in Chickens

ZHU Guang－shuang，JI Mu－yin，XIAO Sheng，WANG Ben－zhong，ZHANG Hai－yan
(College of Bioengineering，Wuhu Institute of Technology，Wuhu 241003，China)

Abstract:The objective of the experiment is to study the effect of Qinyu San powder on chicken injected by Escherichia coli.Method: Two hundred 14－age chickens were divided into 5 groups.After injected by Escherichia coli，chicken in group 1－4 were fed diets including 3.0%，1.5%，0.7% and 0% Qinyu San，respectively.Group 5 was the control group which was not injected by bacteria.Result: The cure rate and efficacy in the 3.0% Qinyu San group was significantly higher than that of the 0% group.Conclusion: Qinyu San powder might be an strategy for controlling chicken colibacillosis.

Key words:Qinyu San powder; Chicken; Escherichia coli; Infection

中圖分類號:S831.7

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

文章編號:1673－8772(2016) 02－0006－04

收稿日期:2016－01－07

基金項(xiàng)目:安徽省質(zhì)量工程項(xiàng)目食品技術(shù)人才實(shí)訓(xùn)中心校企合作實(shí)踐教育基地項(xiàng)目(2013sjjd036)。

作者簡介:朱廣雙(1975－)，男，安徽省蕪湖市人，碩士，講師，主要從事中獸醫(yī)學(xué)研究。