參苓白術(shù)顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

邵維在，段治尚，萬(wàn)德生，劉必辭，闕玉玲（云南騰藥制藥股份有限公司研發(fā)部，云南騰沖　679100）

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參苓白術(shù)顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

邵維在，段治尚，萬(wàn)德生，劉必辭，闕玉玲
（云南騰藥制藥股份有限公司研發(fā)部，云南騰沖679100）

［摘要］目的：修訂提高參苓白術(shù)顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC法對(duì)制劑中的甘草、人參、白術(shù)進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC法對(duì)其人參中的人參皂苷Rg1、Re進(jìn)行定量分析。結(jié)果：用HPLC法測(cè)定人參皂苷Rg1、Re的含量，Rg1在0.353～1.764 μg范圍內(nèi)、Re在0.244～1.220 μg范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系，r=0.999 8和r=0.999 9；平均加樣回收率分別為98.61%和97.41%，RSD%=1.82%（n=6）和RSD%=1.02%（n=6）。結(jié)論：所建立的方法重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)，可控制該制劑的質(zhì)量。

［關(guān)鍵詞］參苓白術(shù)顆粒；薄層；高效液相色；甘草；白術(shù)；人參皂苷

［DOI］10. 3969/j. issn. 1672-2345. 2016. 02. 002

參苓白術(shù)顆粒為云南騰藥制藥股份有限公司的普藥品種，處方源于宋代《太平惠民和劑局方》，由人參、茯苓、白術(shù)、山藥、白扁豆、蓮子、薏苡仁、砂仁、桔梗和甘草共10味藥組成，具有益氣健脾之功效?，F(xiàn)行版標(biāo)準(zhǔn)載于《部頒標(biāo)準(zhǔn)》第二十冊(cè)〔1〕，但質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)偏低。為了控制其產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用薄層鑒別對(duì)方中甘草、人參、白術(shù)進(jìn)行定性鑒別〔2〕；采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)人參所含成分人參皂苷Rg1和Re進(jìn)行定量測(cè)定?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器三用紫外儀ZF-2型（上海市安亭電子儀器廠）；美國(guó)Agilent-1100液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；UV1700紫外分光光度計(jì)（島津蘇州有限公司）；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑Agi?lent TC-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；SK5200H型超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；電子分析天平AE240（梅特勒托利多儀器上海有限公司）；數(shù)顯恒溫水浴鍋DRHH-S4（上海雙捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2試藥甘草對(duì)照藥材（批號(hào)：120904-201016）；白術(shù)對(duì)照藥材（批號(hào)：120925-201109）；人參皂苷Rg1對(duì)照品（批號(hào)：110703-201128）；人參皂苷Re對(duì)照品（批號(hào)：110754-201324）；人參皂苷Rb1對(duì)照品（批號(hào)：110704-201223）；人參對(duì)照藥材（批號(hào)：120917-200608）。上述對(duì)照品均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。參苓白術(shù)顆粒（批號(hào)：130130、130131、130132）由云南騰藥制藥股份有限公司生產(chǎn)；HPLC用乙腈為色譜純，水為娃哈哈飲用純凈水（大理娃哈哈食品有限公司生產(chǎn)），其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1甘草的薄層鑒別取本品適量于乳缽中研細(xì)，稱取12 g置150 mL平底燒瓶中，加乙醇30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中用二氯甲烷提取3次，每次10 mL，收集水層，再用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次10 mL，合并正丁醇液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取不含甘草的陰性對(duì)照品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。再取甘草對(duì)照藥材0.5 g，加乙醇20 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一2%氫氧化鈉硅膠G板薄層板上，以二氯甲烷－甲醇－甲酸（20∶1∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱5 min，置紫外光燈（365 nm）下檢視〔3-4〕。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照品無(wú)干擾，具有專屬性，見(jiàn)圖1。

圖1　甘草紫外光燈（365 nm）TLC

2.2人參的薄層鑒別取本品適量于乳缽中研細(xì)，稱取4 g置250 mL三角燒瓶中，加三氯甲烷40 mL，加熱回流1 h，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水2 mL攪拌使充分濕潤(rùn)，加水飽和正丁醇20 mL，超聲處理30 min，吸取上清液加氨試液60 mL，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取不含人參陰性對(duì)照品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。再取人參皂苷Rb1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品及人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水（13∶7∶2）10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照品無(wú)干擾，具有專屬性〔3，5〕。見(jiàn)圖2。

2.3白術(shù)的薄層鑒別取本品適量于乳缽中研細(xì)，稱取20 g置250 mL平底燒瓶中，加水飽和的正丁醇30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液用水洗滌2次，每次20 mL，正丁醇液蒸干，殘?jiān)颖? mL使溶解，作為供試品溶液〔3，6〕。另取不含白術(shù)對(duì)照品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。再取白術(shù)對(duì)照藥材1.0 g，加水飽和的正丁醇30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液用水洗滌2次，每次20 mL，棄除水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)颖? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－丙酮（19∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，現(xiàn)相同的藍(lán)色斑點(diǎn)。陰性對(duì)照品無(wú)干擾，具有專屬性。見(jiàn)圖3。

圖2　人參TLC

圖3　白術(shù)紫外光燈（365 nm）TLC

2.4人參皂苷Rg1、Re的含量測(cè)定方法與結(jié)果

2.4.1色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性色譜柱：Agilent TC-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈－0.05%磷酸溶液（19∶81）為流動(dòng)相，流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm；柱溫：30℃。進(jìn)樣量：10 μL；理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000〔7〕。

色譜條件選擇：取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對(duì)照品溶液，在190～350 nm范圍內(nèi)做紫外掃描，從紫外光譜圖可以看出，在203 nm處人參皂苷Rg1和人參皂苷Re有較大吸收值（見(jiàn)圖4A、4B），參照中國(guó)藥典“人參”項(xiàng)下的條件，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm。

圖4　人參皂苷Rg1對(duì)照品紫外光譜圖

2.4.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL中人參皂苷Rg1含90 μg、人參皂苷Re含60 μg的混合溶液，搖勻，即得。

2.4.3供試品溶液的制備取本品15 g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取3 h，放置至室溫，再精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液50 mL，蒸干，殘?jiān)?0%氫氧化鈉溶液5 mL使溶解，加水25 mL，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取4次，每次30 mL，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次50 mL，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀? mL使溶解，通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱（內(nèi)徑1.5 cm，長(zhǎng)10 cm）上。先以水100 mL洗脫，棄去水液，再以70%乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，即得。同法制備人參藥材溶液。

2.4.4缺人參陰性樣品的制備按處方比例，稱取除人參外的其余藥材，制備缺人參陰性對(duì)照品，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制成缺人參的陰性對(duì)照溶液。在與人參皂苷Rg1、Re對(duì)照品色譜圖中相同的保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，表明陰性對(duì)照品無(wú)干擾，見(jiàn)圖5。

2.4.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及線性關(guān)系考察取人參皂苷Rg1對(duì)照品貯備液（每1 mL中人參皂苷Rg1含量0.441 mg）、人參皂苷Re對(duì)照品貯備液（每1 mL中人參皂苷Re含量0.305 mg），精密量取上述兩種溶液各0.4、0.8、1.2、1.6與2.0 mL，分別置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取10 μL，測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：人參皂苷Rg1的回歸方程為Y=1 306 952.098X+13 653.700，r=0.999 8，結(jié)果表明人參皂苷Rg1在0.353～1.764 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；人參皂苷Re的回歸方程為Y=1 092 065.164X-5 264.700，r=0.999 9；結(jié)果表明人參皂苷Re在0.244～1.220 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.6精密度試驗(yàn)取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對(duì)照品混合溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，分別測(cè)得人參皂苷Rg1、Re的峰面積，考察其精密度。結(jié)果：人參皂苷Rg1峰面積的RSD%=0.377%（n=6），人參皂苷Re峰面積的RSD%=0.525%（n=6），表明進(jìn)樣精密度良好。

圖5　高效液相色譜圖

2.4.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液（批號(hào)130130），分別于0、1、5、8、24 h按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣1次，測(cè)定峰面積。結(jié)果：人參皂苷Rg1峰面積的RSD%=0.315%；人參皂苷Re峰面積的RSD%=0.466%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

2.4.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（批號(hào)130130）適量，研細(xì)，取6份，每份約15 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，并按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定其人參皂苷Rg1、Re的含量。結(jié)果，人參皂苷Rg1含量的RSD%= 1.23%（n=6）；人參皂苷Re含量的RSD%=0.742% （n=6）；結(jié)果表明本方法重復(fù)性較好。

2.4.9加樣回收率試驗(yàn)取已測(cè)定含量的同一批樣品（批號(hào)130130，已測(cè)定含人參皂苷Rg1的含量為0.102 0 mg/g、人參皂苷Re的含量為0.090 7 mg/g） 9份，每份約7.5 g，精密稱定，精密加入人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液1.9 mL（每1mL中人參皂苷Rg1含量0.441 mg）、人參皂苷Re對(duì)照品溶液2.0 mL（每1 mL中人參皂Re含量0.327 mg），按“2.4.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，并按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，見(jiàn)表1、2。

表1　人參皂苷Rg1回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2　人參皂苷Re回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4.10樣品含量測(cè)定取參苓白術(shù)顆粒三批樣品（規(guī)格：6 g/袋），按“2.4.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，并按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件，依法測(cè)定，見(jiàn)表3。

表3　樣品測(cè)定結(jié)果

3　討論

參苓白術(shù)顆粒是我企業(yè)常年生產(chǎn)的品種，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較低，僅有一個(gè)甘草定性鑒別項(xiàng)，沒(méi)有其他定性或定量項(xiàng)。方中人參、白術(shù)、茯苓為君藥，人參益氣，白術(shù)健脾，茯苓滲濕；配伍山藥、蓮子、白扁豆、薏苡仁健脾益氣滲濕止瀉，內(nèi)助君藥增強(qiáng)藥效，均為臣藥；砂仁芳香滲濕、醒脾和胃，行氣化滯，是為佐藥；桔梗宣肺利氣，通調(diào)水道，炙甘草健脾和胃，調(diào)和諸藥為使藥〔8〕。結(jié)合該藥品組方的君臣佐使，全面的控制其質(zhì)量，我們保留原標(biāo)準(zhǔn)中甘草的定性鑒別，并進(jìn)行優(yōu)化；增加人參、白術(shù)兩味君藥定性鑒別；在含量測(cè)定方面，對(duì)君藥人參的成分Rg1、Re進(jìn)行定量控制。經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的方法學(xué)考察實(shí)驗(yàn)，定性、定量質(zhì)控方法成熟，專屬性強(qiáng)，納入標(biāo)準(zhǔn)。

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（責(zé)任編輯毛本勇）

Study on the Quality Standards of Shenglingbaizhu Granule

Shao Weizai, Duan Zhishang, Wan Desheng, Liu Bici, Que Yuling （Research and Development Department of Tengyao Pharmaceutical Company, Tengchong, Yunnan 679100, China）

〔Abstract〕Objective: To develop a method for revising and improving the quality standards of Shenlingbaizhu Granule. Methods: Glycyrrhiza, ginseng and atractylodes were identified by Thin-layer chromatography（TLC）method, Ginsenoside Rg1 and Re in ginseng were quantitatively analyzed by high performance liquid chromatography（HPLC）methed. Results: HPLC assay results showed good linear relationships of range 0.353～1.764 μg（r=0.999 8）for Rg1 and range 0.244～1.22 μg（r=0.999 9）for Re, respectively. The average recoveries（n=6）was 98.61%（RSD:1.82%）for Rg1 and 97.41%（RSD:1.02%）for Re. Conclusion: The established method has good reproducibility and specificity, which could be used as the quality control strandard of Shenlingbaizhu Granule.

〔Key words〕Shenlingbaizhu Granule; thin-layer; HPLC; glycyrrhiza; atractylodes; ginsenoside

［中圖分類號(hào)］R284.1

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A

［文章編號(hào)］1672-2345（2016）02-0005-05

［收稿日期］2015-06-16［修回日期］2015-10-10

［作者簡(jiǎn)介］邵維在，工程師，主要從事新產(chǎn)品研發(fā)、產(chǎn)品工藝優(yōu)化及中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.