外周血高遷移率族蛋白-1和NF-κB在腎病綜合征中的作用

賀曉莉，程延娜，劉　延

延安大學(xué)附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 716000

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*通信作者

外周血高遷移率族蛋白-1和NF-κB在腎病綜合征中的作用

賀曉莉*，程延娜，劉延

延安大學(xué)附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，陜西 716000

[摘要]目的分析原發(fā)性腎病綜合征患者血清中HMGB-1、NF-κB的關(guān)系，探討其在原發(fā)性腎病綜合征中的作用。方法2014年1月至2015年7月我院40例原發(fā)性腎病綜合征患者為觀察組，同時納入40例健康體檢者為對照組。采用ELISA法測定外周血清中HMGB-1、NF-κB的濃度，同時收集受試者尿蛋白、血脂等相關(guān)臨床資料。評價尿蛋白定量、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平、血清白蛋白水平、C-反應(yīng)蛋白水平及血清HMGB-1、NF-κB水平。采用Pearson相關(guān)性分析進(jìn)行變量之間的統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果觀察組HMGB-1和NF-κB的濃度均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，HMGB-1與尿蛋白定量(r=0.74，P<0.01)、TG(r=0.33，P<0.01)、TC(r=0.52，P<0.01)、LDL-C(r=0.26，P<0.01)、CRP(r=0.41，P<0.01)呈正相關(guān)，與白蛋白(r=-0.56，P<0.01)呈負(fù)相關(guān)。NF-κB與尿蛋白定量(r=0.62，P<0.01)、TG(r=0.28，P<0.01)、TC(r=0.43，P<0.01)、LDL-C(r=0.29，P<0.01)呈正相關(guān)，與白蛋白(r=-0.45，P<0.01)呈負(fù)相關(guān)。HMGB-1與NF-κB呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.84，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論原發(fā)性腎病綜合征患者血清中HMGB-1、NF-κB水平均升高，兩者呈正相關(guān)。HMGB-1在腎病綜合征的發(fā)病中可能通過NF-κB起作用。

[關(guān)鍵詞]腎病綜合征；高遷移率族蛋白-1；NF-κB

0引言

腎病綜合征是各種原因所致的大量蛋白尿(>3.5 g/d)、低白蛋白血癥(<30 g/L)，明顯水腫和(或)高脂血癥的臨床綜合征。腎病綜合征分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類，可由多種不同病理類型的腎小球疾病所引起，但具體發(fā)病機(jī)制仍不明確[1]。目前研究認(rèn)為，原發(fā)性腎病綜合征是一種免疫炎癥性疾病，多種炎癥因子和異常的免疫反應(yīng)在發(fā)病過程中起主要作用?；颊唧w內(nèi)的微炎癥狀態(tài)可以損害腎組織，加重腎小球病變，減少功能性腎單位的數(shù)量，最終導(dǎo)致腎小球疾病的發(fā)生，嚴(yán)重影響患者的臨床療效及預(yù)后[2]。高遷移率族蛋白-1(High mobility group box-1，HMGB-1)是普遍存在于真核生物體內(nèi)的一種新型炎癥因子，在急性腎功能損害、慢性腎功能不全、狼瘡性腎炎等多種腎臟疾病中發(fā)現(xiàn)其表達(dá)升高[3-6]。研究證實(shí)，HMGB-1可作用于Toll樣受體2和Toll樣受體4等，通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)最終活化核因子-κB(Nuclear factor-kappa B，NF-κB)導(dǎo)致炎癥過程的發(fā)生[7-8]。NF-κB作為免疫損傷機(jī)制中的中心調(diào)控因子，其在腎病綜合征發(fā)病中的作用已經(jīng)得到證實(shí)，但目前關(guān)于HMGB-1在原發(fā)性腎病綜合征患者中的作用及表達(dá)情況尚不明確。基于NF-κB可在炎癥通路中被HMGB-1激活，本研究擬分析HMGB-1與NF-κB間的關(guān)系，以探討HMGB-1在原發(fā)性腎病綜合征發(fā)病中的作用，旨在指導(dǎo)臨床治療及改善患者預(yù)后。

1資料與方法

1.1一般資料納入2014年1月至2015年7月在我院住院接受診治的原發(fā)性腎病綜合征患者40例(觀察組)，均符合全國腎臟病學(xué)術(shù)會議修訂的有關(guān)腎病綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)。同時選取40例與觀察組性別、年齡相匹配的健康體檢者作為對照組。所有受試者均排除精神疾病者、合并心肝腎等嚴(yán)重功能異常者、近期合并腫瘤者以及妊娠或哺乳期婦女，且在采血前1周內(nèi)未患感染性疾病，未使用糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑。觀察組40例，男26例，女14例，平均年齡(38.58±12.36)歲。對照組40例，男21例，女19例，平均年齡(36.32±11.83)歲。所有腎病綜合征患者在術(shù)前均簽署知情同意書，該研究獲倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2指標(biāo)檢測方法

1.2.1標(biāo)本收集所有受試者空腹抽取外周靜脈血，靜置離心，取上清，于-80 ℃條件下保存待測，待全部患者標(biāo)本收集完成后，測HMGB-1、NF-κB水平。

1.2.2血脂水平及尿蛋白檢測方法三酰甘油(Triglycerides，TG)、總膽固醇(Total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白(High-density lipoprotein，HDL-C)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein，LDL-C)采用全自動生化分析儀進(jìn)行檢測；用化學(xué)法測量計算24 h尿蛋白定量。

1.2.3血清HMGB-1、NF-κB檢測方法①從冰箱中取出ELISA試劑盒，室溫放置30 min；②對20倍濃縮洗滌液進(jìn)行稀釋處理成原倍；③將酶標(biāo)包被板固定在框架上，設(shè)空白對照孔、待測樣本孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔，在待測樣本孔中先加10 μL待測樣本，再加40 μL樣本稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品，對照孔不加；④恒溫箱30 min；⑤棄液，用洗滌板重復(fù)洗滌4次；⑥顯色：每孔先加50 μL顯色劑A，再加50 μL顯色劑B，混勻，37 ℃避光顯色15 min；⑦終止：取出酶標(biāo)板，于每孔加50 μL終止液，終止反應(yīng)，采用ELISA法檢測。

2結(jié)果

2.1兩組基本資料及生化指標(biāo)檢測結(jié)果比較觀察組、對照組的性別比(男/女)分別為26/14、21/19，兩組性別比、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.289，t=0.372，P>0.05)。觀察組的尿蛋白定量、TG、TC、LDL-C、CRP水平均高于對照組，血清白蛋白低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。兩組HDL-C比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　兩組基本資料和生化指標(biāo)比較

2.2兩組HMGB-1、NF-κB比較由表2可見，觀察組的HMGB-1、NF-κB濃度分別為(29.12±7.53)、(1 703.58±384.36)ng/L，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

表2　兩組HMGB-1、NF-κB濃度比較(ng/L)

2.3HMGB-1、NF-κB與生化指標(biāo)相關(guān)性分析由表3可見，HMGB-1與尿蛋白定量、TG、TC、LDL-C、CRP呈正相關(guān)(P<0.01)，與白蛋白呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。NF-κB與尿蛋白定量、TG、TC、LDL-C呈正相關(guān)(P<0.01)，與白蛋白呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。

2.4HMGB-1、NF-κB相關(guān)性分析Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，HMGB-1與NF-κB呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.84，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見圖1。

表3　HMGB-1、NF-κB與生化指標(biāo)相關(guān)性分析

圖1　HMGB-1、NF-κB相關(guān)性分析

3討論

原發(fā)性腎病綜合征是一種常見的免疫炎癥性疾病，炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)異常可促使白細(xì)胞炎癥發(fā)展，引起細(xì)胞因子逃逸，造成高因子綜合征，炎癥因子可參與腎小球、腎小管間質(zhì)的不同病理過程，促使腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化，最終進(jìn)展為終末期腎臟疾病。關(guān)于腎病綜合征患者淋巴細(xì)胞亞群的研究證實(shí)，細(xì)胞的免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)同時參與腎小球疾病的發(fā)生[9-10]。多數(shù)研究也發(fā)現(xiàn)，在腎病綜合征的發(fā)病過程中，免疫介導(dǎo)和炎癥損害起主要作用。各種致病因素的相互作用引起了促炎因子與抗炎因子關(guān)系紊亂，白介素、TNF-α、瘦素等均與腎病綜合征的發(fā)生有直接聯(lián)系，同時，單核細(xì)胞、腎臟固有細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等可以通過其分泌的細(xì)胞因子直接或間接促進(jìn)腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展。循環(huán)中炎癥因子的增加可以促進(jìn)腎功能損傷，與免疫調(diào)節(jié)之間存在密切聯(lián)系，其在腎臟疾病中的作用已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)。

NF-κB是一種能與免疫球蛋白к鏈基因的增強(qiáng)子κB序列發(fā)生特異性結(jié)合的核蛋白因子[11]，其在腎臟疾病中的作用已經(jīng)被廣泛研究[12-13]。研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB在腎病綜合征的發(fā)病中起作用，且其上升程度在不同病理類型中有所不同。與此一致，Salali等[14]發(fā)現(xiàn)，在微小病變型腎病中NF-κB水平上升。本研究顯示，觀察組患者外周血清NF-κB表達(dá)水平高于對照組，提示NF-κB可能與腎病綜合征的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。本研究對NF-κB與生化指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析，提示NF-κB與尿蛋白定量、TG、TC、LDL-C呈正相關(guān)，與白蛋白呈負(fù)相關(guān)。研究認(rèn)為，NF-κB可被大量蛋白尿誘導(dǎo)激活，以引起免疫調(diào)節(jié)紊亂和炎癥因子浸潤，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，最終引起腎組織損傷，進(jìn)一步支持本研究的結(jié)果。因此，阻斷NF-κB信號可能有助于保護(hù)腎功能，有望用于腎病綜合征的治療。

HMGB-1屬于HMG超家族的成員，可能作為一種新型炎性細(xì)胞因子參與膿毒癥的發(fā)病過程，其在多種疾病中的作用愈加受到重視[15-16]。HMGB-1是一種DNA結(jié)合蛋白，在腎臟病中的高水平表達(dá)提示其為重要的炎性因子，可以與多種細(xì)胞因子相互作用，不斷放大，促使瀑布式的炎癥效應(yīng)發(fā)生，在腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。本研究顯示，觀察組患者外周血清HMGB-1濃度高于對照組，提示其可能參與了腎病綜合征的發(fā)病過程。進(jìn)一步證實(shí)在腎臟相關(guān)疾病中，HMGB-1的高水平表達(dá)發(fā)揮了促炎因子的作用，可促進(jìn)疾病發(fā)生發(fā)展。NF-κB與生化指標(biāo)的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，NF-κB與尿蛋白定量、TG、TC、LDL-C呈正相關(guān)，與白蛋白呈負(fù)相關(guān)。與Zhu等[17]的研究發(fā)現(xiàn)一致，其通過動物實(shí)驗(yàn)研究表明，大量蛋白尿可以導(dǎo)致大鼠腎臟腎小球足細(xì)胞和腎小管間質(zhì)的損傷，巨噬細(xì)胞浸潤，在經(jīng)過藥物治療后，尿蛋白減少，細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的表達(dá)水平明顯下降。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，蛋白尿-細(xì)胞因子-細(xì)胞損傷免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的紊亂在原發(fā)性腎病綜合征中起重要作用。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提示HMGB-1在腎病綜合征患者發(fā)病中的重要作用，大量蛋白尿可能參與了疾病炎癥過程的發(fā)生。

基于以往研究已證實(shí)HMGB-1可通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑最終激活NF-κB，腎病綜合征患者高表達(dá)的NF-κB在發(fā)病過程中可對炎癥因子起調(diào)控作用，結(jié)合本研究中腎病綜合征患者血清HMGB-1、NF-κB水平均升高，且相關(guān)性分析結(jié)果提示兩者呈正相關(guān)，推測HMGB-1在腎病綜合征的發(fā)病中可能是通過NF-κB起作用的。

本實(shí)驗(yàn)僅為HMGB-1、NF-κB和腎病綜合征發(fā)病關(guān)系的初步探討，并未對其具體作用機(jī)制進(jìn)行詳細(xì)研究，仍需要進(jìn)行大樣本多中心的隨機(jī)對照研究驗(yàn)證結(jié)果，同時應(yīng)增加腎活檢和動物實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步探討HMGB-1、NF-κB在發(fā)病中的機(jī)制，期待其能為指導(dǎo)臨床治療提供可靠依據(jù)。

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Role of peripheral HMGB-1 and NF-κB in the pathogenesis of nephritic syndrome

HE Xiao-li*,CHENG Yan-na,LIU Yan

(Department of Nephrology,Yan′an University Affiliated Hospital,Shanxi 716000,China)

[Abstract]ObjectiveTo analyze the correlation between HMGB-1and NF-κB expressions in serum of patients with primary nephrotic syndrome and explore the role of HMGB-1 and NF-κB in the pathogenesis of primary nephrotic syndrome.MethodsForty patients diagnosed with primary nephrotic syndrome in our hospital from January 2014 to July 2015 were randomly selected as observation group,coupled with 40 cases of healthy volunteers as normal control group.The concentrations of HMGB-1and NF-κB in peripheral serum were identified by ELISA.The clinical data of two groups was collected,such as,gender,age,serum albumin,cholesterol,triglyceride,low density lipoprotein,high density lipoprotein,urinary protein and C-reactive protein.The correlation between variables was statistically evaluated by Pearson correlation analysis.ResultsThe concentration of HMGB-1 and NF-κB in observation group was higher than that of control group (P<0.01).Pearson correlation analysis showed that HMGB-1 was positively correlated with urinary protein (r=0.73,P<0.01),triglycerides (r=0.33,P<0.01),total cholesterol (r=0.52,P<0.01),low-density lipoprotein (r=0.26,P<0.01) and C-reactive protein (r=0.41,P<0.01),while it was correlated negatively with serum albumin (r=-0.56,P<0.01).NF-κB was correlated positively with urinary protein (r=-0.56,P<0.01),triglycerides (r=0.28,P<0.01),total cholesterol (r=0.43,P<0.01) and low-density lipoprotein (r=0.29,P<0.01),while it was correlated negatively with serum albumin (r=-0.45,P<0.01).Multivariate analysis showed that the concentration of HMGB-1 and NF-κB showed a positive correlation,the correlation coefficient being 0.837 (P<0.01).ConclusionThe levels of HMGB-1 and NF-κB increased in patients with nephritic syndrome,and there was a positive correlation between them.HMGB-1 may participate in the pathogenesis of primary nephritic syndrome by influencing NF-κB.

Key words：Nephritic syndrome;High mobility group box-1 (HMGB-1);Nuclear factor-kappa B (NF-κB)

收稿日期：2015-08-31

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201604019