高效液相色譜測定金銀花中科羅索酸的含量*

陳賀佳祁春雷姚德坤

（1.大興安嶺林格貝寒帶生物科技股份有限公司，大興安嶺　165012；2.黑龍江省寒帶森林植物生物工程技術中心，大興安嶺　165012）

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高效液相色譜測定金銀花中科羅索酸的含量*

陳賀佳1，2祁春雷1，2姚德坤1**

（1.大興安嶺林格貝寒帶生物科技股份有限公司，大興安嶺165012；2.黑龍江省寒帶森林植物生物工程技術中心，大興安嶺165012）

摘要：采用高效液相色譜測定金銀花中科羅索酸含量的結(jié)果表明：科羅索酸進樣濃度為0.20～1.01mg/mL時，與峰面積呈良好的線性關系；通過重復性試驗、穩(wěn)定性試驗和回收率對該方法的精確度和準確度進行驗證表明：該方法精確度和準確度良好，可用于金銀花中科羅索酸含量的測定。

關鍵詞：金銀花；高效液相色譜法；科羅索酸

*“十二五”國家科技支撐計劃農(nóng)業(yè)領域研究任務（任務編號：2011BAD08B0303）

金銀花為忍冬科植物忍冬、毛花或者山銀花忍冬的初開或干燥花蕾，目前國內(nèi)外大量研究表明，金銀花中主要含有揮發(fā)油、黃酮類、三萜皂苷、有機酸等有效成分［1-3］，但尚未見到從金銀花中檢測并提取分離科羅索酸的報道。本文通過建立一種測定金銀花中科羅索酸含量的高效液相色譜法，為分離提取金銀花中科羅索酸的研究提供重要的科學依據(jù)。

1儀器與藥品

1.1儀器

戴安高效液相色譜儀、UVD170U型紫外檢測器、安捷倫TC-C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱。

1.2藥品

科羅索酸標準品98.5％、金銀花提取物、甲醇（色譜純）、冰醋酸（色譜純）、超純水。

2試驗方法

2.1標準溶液的制備

準確稱取干燥至恒重的科羅索酸標準品50.6mg，置于25mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min使其溶解，冷卻至室溫，再用甲醇定容，搖勻后用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得每1mL含科羅索酸1mg的標準溶液。

2.2樣品溶液的制備

準確稱取金銀花提取物0.451g置于25mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理10 min使其溶解，冷卻至室溫，再用甲醇定容，搖勻后用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得樣品溶液。

2.3色譜條件

色譜柱為TC-C18（250mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇∶水∶冰醋酸=82∶18∶0.2，流速1.0mL/min，檢測波長205nm，柱溫30℃。

2.4線性和范圍

黨務工作的生命力源于創(chuàng)新、興于創(chuàng)新。每個基層單位的生產(chǎn)內(nèi)容、工作性質(zhì)、人員結(jié)構(gòu)都各不相同，因此，基層黨務工作不能生搬硬套，必須堅持貼近本部門、本單位的生產(chǎn)實際，積極尋找適合自己的工作方法，始終堅持以創(chuàng)新性的思維來開展黨務工作。

準確吸取標準溶液0.5、1.0、1.5、2、2.5mL，分別置于5mL容量瓶中加入甲醇定容，即得到不同濃度的標準溶液，然后分別精密吸取10 μL注入液相色譜儀中，按色譜條件測定并記錄峰面積。

2.5精確度試驗

重復性試驗分別精確吸取6份樣品溶液10 μL注入液相色譜儀中，按色譜條件進行測定，然后根據(jù)線性方程計算樣品中科羅索酸含量。

穩(wěn)定性試驗將樣品溶液分別在放置0、1、2、3、4、5h時按色譜條件進行測定并記錄峰面積，然后計算科羅索酸含量。

2.6準確度試驗

分別精確吸取6份樣品溶液，按樣品溶液中科羅索酸含量的100％加入標準溶液進行測定并記錄峰面積，然后計算回收率。

3結(jié)果與分析

通過線性試驗得到標準溶液濃度和科羅索酸峰面積（表1），以科羅索酸峰面積（Y）為縱坐標，標準溶液濃度（X）為橫坐標繪制標準曲線（圖1），得到線性方程：Y=8.130 9X-8.098 6（r=0.999 6）。表明進樣量為10 μL時，科羅索酸進樣濃度在0.20～1.01mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系。

表1　線性試驗測定數(shù)據(jù)

圖1　科羅索酸標準曲線

3.2精確度試驗

3.2.1重復性試驗

通過重復性試驗（圖2，表2）可知：樣品溶液中科羅索酸平均含量（n=6）為3.38％，RSD為0.907％，表明本方法重復性好。

圖2　科羅索酸標準溶液及樣品溶液高效液相色譜圖

3.2.2穩(wěn)定性試驗

通過穩(wěn)定性試驗可知：樣品溶液中科羅索酸平均含量（n= 6）為3.40％，RSD為1.78％，表明在5h內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定性良好，能夠完全滿足整個分析工作需要。

3.3準確度試驗

通過準確度試驗可知：科羅索酸的平均回收率為100.67％，RSD為1.18％。

4結(jié)果與討論

采用安捷倫TC-C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，流動相為甲醇∶水∶冰醋酸=82∶18∶0.2，流速1.0mL/min，檢測波長205nm，柱溫30℃的色譜條件，通過外標法，從線性、精確度、準確性3個方面對金銀花中科羅索酸定量分析方法進行驗證。根據(jù)該方法測定本批金銀花提取物中科羅索酸含量為3.38％，當進樣濃度在0.20～1.01mg/mL時，與峰面積呈良好的線性關系；通過重復性試驗和穩(wěn)定性試驗對該方法精確度進行驗證，表明多次測定科羅索酸含量相對接近，其RSD分別為0.907％（＜2％）和1.78％（＜2％），說明該方法精確度較高；運用回收率方法對準確度進行驗證，平均回收率（％）為100.67％，RSD（％）為1.18％（＜2％），回收率在98％～102％之間，說明該方法精確度和準確度良好，可用于金銀花中科羅索酸含量測定。

參考文獻

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［2］王力川.金銀花的化學成分及功效研究進展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學，2009，37（5）：2036-2037.

［3］阮鳴，彭國平.金銀花揮發(fā)油的萜類化學成分研究進展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2005，16（1）：59-61.

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［5］縱偉，夏文水.大葉紫薇葉中corosolic acid的分離和測定［帶作物學報］，2006，27（2）：103-107.

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［7］劉博，楊艷芳，吳和珍.HPLC法測定山茱萸中科羅索酸的含量［J］.藥物分析雜志，2011，31（12）：2217-2219.

［8］吳哲，李小玉，吳曉東，等.HPLC法測定桑葉和沙棘葉中科羅索酸的含量［J］.山西農(nóng)業(yè)科學，2014，42（11）：1169-1171.

（責任編輯：李丹）

中圖分類號：S567.7+9，TQ460.7+2

文獻標識碼：A

文章編號：1001-9499（2016）03-0043-02

作者簡介：第1陳賀佳（1984-），女，中級工程師，主要從事食品和天然植物提取物中有效活性成分的檢測技術研究工作。

通訊作者：姚德坤（1965-），男，高級工程師，主要從事天然植物提取物活性成分的研究開發(fā)工作。

收稿日期：2016-01-11