自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療慢性移植物腎病的安全性與可行性

梅國斌 粟偉峰 楊雨琪 彭心怡 夏智明

自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療慢性移植物腎病的安全性與可行性

梅國斌 粟偉峰 楊雨琪 彭心怡 夏智明

目的 分析自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療慢性移植物腎病的安全性與可行性。方法 選取26例慢性移植物腎病患者，患者均自愿接受自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療。觀察治療后不良反應，對比治療前、治療后1周、4周、8周、12周時血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）、24h尿蛋白等指標的變化。結果 治療后患者不良反應發(fā)生率為30.77%。治療后1、4、8周時患者Scr、BUN、24h尿蛋白明顯下降，Ccr明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。治療后12周時Scr、BUN、Ccr、24h尿蛋白與治療前比較差異無統(tǒng)計學意義,其中，治療前Scr、BUN、Ccr、24h尿蛋白分別為（211.37±48.22）μmol/L、（14.48±4.12）mmol/L、（38.65±9.26）mL/min、（885.69±212.34）mg，治療后12周分別為（215.45±51.62）μmol/L、（14.52±4.20）mmol/L、（38.34±8.93）mL/min、（891.24±205.58）mg。結論 采用自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療慢性移植物腎病可獲得腎功能的改善，不良反應以發(fā)熱、瘙癢為主，未見出血、動脈栓塞、假性動脈瘤等嚴重并發(fā)癥。

慢性移植物腎??；自身骨髓間充質(zhì)干細胞；安全性；可行性

腎臟移植是目前臨床治療終末期腎病的有效方法，但腎臟移植后的并發(fā)癥是影響移植腎存活時間的常見原因，其中慢性移植物腎病是給患者帶來了較大的困擾。如何延緩慢性移植物腎病的發(fā)展、改善移植腎功能一直是臨床工作研究的重點。骨髓間充質(zhì)干細胞是一種低免疫原性干細胞群，具有易獲取、易擴增、易保存等優(yōu)點，可誘導免疫耐受、降低免疫反應、促進損傷修復[1]。本研究分析自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療慢性移植物腎病的安全性與可行性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年5月～2014年4月26例慢性移植物腎病患者，男18例，女8例；年齡35～60歲，平均（48.12±10.24）歲；體質(zhì)量51～76kg，平均（63.25±11.43）kg。

患者均為首次接受腎臟移植，在腎臟移植6個月后出現(xiàn)腎功能進行性減退。實驗室檢查結果提示Scr、BUN、24h尿蛋白水平高于正常值。彩色多普勒超聲檢查結果提示移植腎血管阻力指數(shù)（RI）＞0.7。移植腎穿刺活檢結果提示發(fā)生間質(zhì)纖維化、腎小管萎縮、腎小球硬化、細胞外基質(zhì)沉積等病理改變。

1.2 方法

1.2.1 自身骨髓間充質(zhì)干細胞的制取 患者在簽署知情同意書后接受骨髓穿刺術，抽取自身骨髓50mL，置于低分子肝素鈉抗凝的無菌離心管中，采用適量PBS稀釋后加入裝有淋巴細胞分離液的離心管中，以2000r/min轉(zhuǎn)速離心20min。吸取單個核細胞層，采用PBS洗滌，以1100r/min轉(zhuǎn)速離心4min，棄去上清液。沉淀物采用L-DMEM完全培養(yǎng)液重懸，接種于培養(yǎng)瓶，于

37℃的CO2孵箱中孵育。待克隆中細胞完全融合后采用PBS洗滌2次，加入0.25%胰酶消化，取細胞懸液置入離心管內(nèi)，以1∶3傳代培養(yǎng)。將培養(yǎng)的細胞行常規(guī)行病原學檢測，移入液氮罐凍存[2]。

使用前進行復蘇，并進行乙肝抗原、抗體、丙肝抗原、抗體、梅毒、HIV、抗結核抗體-IgG、抗巨細胞病毒抗體-IgM、EB抗體、肺炎支原體、細菌、真菌等病原學檢測和骨髓間充質(zhì)干細胞的鑒定[3]。

采用Seldinger法自股動脈插入導管，行移植腎動脈造影。插管至移植腎動脈，注入骨髓間充質(zhì)干細胞，注入量為5×106個/ kg，采用無菌生理鹽水稀釋至20mL。首次輸注骨髓間充質(zhì)干細胞時不調(diào)整神經(jīng)鈣蛋白阻滯劑類免疫抑制劑的用量[4]。

在首次輸注后1周、4周時經(jīng)外周靜脈第2次、第3次輸注骨髓間充質(zhì)干細胞，輸注量為1×106個/kg，采用無菌生理鹽水稀釋至50mL，于30min內(nèi)緩慢泵入，輸注前靜脈推注地塞米松5mg[5]。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計數(shù)資料以百分數(shù)和例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不良反應分析 26例患者治療后共發(fā)生不良反應8例，其中發(fā)熱3例、皮膚瘙癢5例，不良反應發(fā)生率為30.77%。

2.2 腎功能指標分析 治療后1、4、8周時患者Scr、BUN、24h尿蛋白明顯下降，Ccr明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。治療后12周時Scr、BUN、Ccr、24h尿蛋白與治療前比較差異無統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 治療前后腎功能指標比較（n=26，x±s）

3 討論

自身骨髓間充質(zhì)干細胞具有免疫抑制和組織重塑的特性，在免疫相關性疾病的治療中應用較廣泛。使用自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療移植物抗宿主病具有一定的治療價值[6]。

初次輸注時在數(shù)字減影動脈造影引導下經(jīng)移植腎動脈輸注自身骨髓間充質(zhì)干細胞可使其更有效地分布于移植腎，避免經(jīng)靜脈輸注干細胞到達移植腎細胞數(shù)量少的缺點，同時不會引起動脈血栓、感染等不良反應[7-8]。但反復進行有創(chuàng)操作會增加患者痛苦，因此在后續(xù)第2次、第3次的治療中則采取靜脈輸注法。

本研究結果顯示，患者治療后1、4、8周時Scr、BUN、24h尿蛋白明顯下降，Ccr明顯升高，這一結果提示采用自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療慢性移植物腎病可獲得腎功能的改善，可行性滿意。治療后12周時Scr、BUN、Ccr、24h尿蛋白與治療前比較差異無統(tǒng)計學意義，這一結果提示采用自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療慢性移植物腎病的長期效果還有待研究。治療期間不良反應為30.77%，以發(fā)熱、瘙癢為主，未見出血、動脈栓塞、假性動脈瘤等嚴重并發(fā)癥，這一結果提示采用自身骨髓間充質(zhì)干細胞治療慢性移植物腎病的安全性滿意。

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[4] 黃湘華，秦衛(wèi)松，張明超，等.移植物抗宿主反應與造血干細胞移植術后膜性腎病[J].腎臟病與透析腎移植雜志，2010，19（2）：103-110.

[5] 錢葉勇，石炳毅，王科，等.慢性移植物腎病患者外周血淋巴細胞細胞因子表達的研究[J].器官移植，2013，4（1）：19-22.

[6] 李華偉，楊劍英，王京祥.間充質(zhì)千細胞治療腎移植患者移植物腎病1例[J].中國藥物經(jīng)濟學，2013，1（5）：407-409.

[7] 余鵬程.供者骨髓間充質(zhì)干細胞對大鼠腎移植慢性排斥的作用及其免疫調(diào)節(jié)機制的初步研究[D].南方醫(yī)科大學,2011.

[8] 王耀軍.骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)對嵌合體形成及大鼠異體復合組織成活影響的免疫機制研究[D].第四軍醫(yī)大學,2013.

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.29.026

湖南 418000 懷化第一人民醫(yī)院 （梅國斌 粟偉峰 楊雨琪 彭心怡 夏智明）

夏智明 E-mail:781805907@qq.com