中藥復(fù)方錦黃口服液體外抑菌及防治仔豬腹瀉的試驗(yàn)效果

李仁閣,胡宏偉,張成虎

蘭州市畜牧獸醫(yī)研究所,甘肅 蘭州 730050

中藥復(fù)方錦黃口服液體外抑菌及防治仔豬腹瀉的試驗(yàn)效果

李仁閣,胡宏偉,張成虎

蘭州市畜牧獸醫(yī)研究所,甘肅 蘭州 730050

試驗(yàn)通過分組，觀察復(fù)方中藥制劑錦黃口服液預(yù)防和治療仔豬腹瀉的臨床效果，以及對(duì)引起仔豬腹瀉常見病原菌的抑菌效果。結(jié)果表明：“錦黃散”對(duì)豬致病性大腸桿菌、魏氏梭菌表現(xiàn)為不敏感，而對(duì)空腸彎曲菌、克雷伯氏菌、仔豬痢疾密螺旋體和壞死桿菌均表現(xiàn)為低敏。錦黃口服液對(duì)吮乳仔豬的治愈率為88.57%，總有效率為92.90%，預(yù)防保護(hù)率為100%，與黃梔口服液、甲磺酸左氧氟沙星注射液相比，臨床治療效果顯著。

仔豬腹瀉；錦黃口服液；試驗(yàn)效果

仔豬腹瀉是一種典型的多因素性疾病。引起仔豬腹瀉的病因復(fù)雜，長期以來仔豬腹瀉是引起仔豬生長受阻和仔豬高死亡率的重要原因，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于該病的傳染性與非傳染性因素相互影響又互為因果，給預(yù)防和治療帶來諸多難度。獸醫(yī)臨床長期大量使用抗生素類藥物導(dǎo)致致病菌耐藥性產(chǎn)生，療效愈來愈差，同時(shí)擾亂了仔豬胃腸道菌群的平衡，影響仔豬的生長發(fā)育，藥物殘留對(duì)公共衛(wèi)生和食品安全造成威脅。應(yīng)用高效、安全、不易產(chǎn)生耐藥性和低殘留藥物成為防治仔豬腹瀉亟需解決的問題。

本文利用中草藥無污染、無殘留、不易產(chǎn)生耐藥性、不污染動(dòng)物源性食品的特點(diǎn)，針對(duì)仔豬腹瀉，以“清熱燥濕、收斂止瀉、健脾消食”為防治原則和選擇藥物原則，研制出以黨參、黃連、訶子、白芍等為主要成分的錦黃口服液及其散劑，臨床試驗(yàn)表明，錦黃口服液能有效的治療仔豬腹瀉，對(duì)引起仔豬腹瀉的常見病原菌也有一定的抑制作用。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)藥物

中藥復(fù)方制劑錦黃口服液(蘭州市畜牧獸醫(yī)研究所自制)

1.2 對(duì)照藥品

黃梔口服液(河南和牧動(dòng)物制藥有限公司)；甲磺酸左氧氟沙星氯化鈉注射液(北京華潤雙鶴藥業(yè)股份有限公司)；阿莫西林粉(濰坊普力美動(dòng)物藥業(yè)有限公司)。

1.3 菌株

由蘭州市百源基因技術(shù)有限公司提供，試驗(yàn)前在斜面培養(yǎng)基上接種復(fù)活。

1.4 培養(yǎng)基

伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、TSC平板、FTG培養(yǎng)基、SS平板、麥康凱培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂平板、改良CCDA培養(yǎng)基、哥倫比亞血瓊脂平板、血瓊脂平板上(含多粘菌素B，10%脫纖維羊血或胎牛血清)、腦心浸液血瓊脂培養(yǎng)基(含新生霉素200 μg/mL和萬古霉素7.5 μg/mL)、水解酪蛋白(Mueller-Hinton)培養(yǎng)基，以上培養(yǎng)基均購自(蘭州市百源基因技術(shù)有限公司)。

1.5 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇甘肅省蘭州市某大型豬場8～28日齡的患腹瀉的吮乳仔豬，28～31日齡體重相近的斷奶仔豬和選擇28日齡、體重相近的健康斷奶仔豬。

2 試驗(yàn)方法

2.1 菌液的制備

將豬致病性大腸桿菌、魏氏梭菌、克雷伯氏菌、空腸彎曲菌、仔豬痢疾密螺旋體、壞死桿菌分別接種于水解酪蛋白瓊脂平板37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，挑選單個(gè)菌落接種于肉湯培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～18 h后，菌種濃度相當(dāng)于1×108CFU/mL；用肉湯培養(yǎng)基作稀釋液稀釋1000倍，使稀釋后的菌液濃度約為1×105CFU/mL，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 培養(yǎng)基的制備

稱取胰酪陳大豆酵母浸膏肉湯培養(yǎng)基，溶于蒸餾水，分裝于試管中，高壓滅菌后置于4℃冰箱備用。稱取水解酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，溶于蒸餾水，高壓滅菌后分別傾注于12個(gè)無菌90 mm平皿中，待凝固后4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 涂菌

吸取100 μL1×105CFU/mL的各菌液于90 mm水解酪蛋白瓊脂平板培養(yǎng)基上，涂布均勻，待菌液干燥后備用。

2.4 打孔

選取孔徑4 mm的打孔器(已滅菌)，在涂菌液平板上打孔，每板打3個(gè)孔，每孔加復(fù)方中草藥水煎劑50 μL，每種菌做3個(gè)重復(fù)板。37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑，判斷藥液豬致病性大腸桿菌、魏氏梭菌、克雷伯氏菌、空腸彎曲菌、仔豬痢疾密螺旋體、壞死桿菌的抑菌效果。抑菌圈直徑d>20 mm為極敏，15

2.5 臨床治療試驗(yàn)

2.5.1 吮乳仔豬臨床治療試驗(yàn) 選擇自然患腹瀉的吮乳仔豬120頭，隨機(jī)分為試驗(yàn)組70頭和對(duì)照組50頭，分別使用錦黃口服液及對(duì)照藥物進(jìn)行治療。試驗(yàn)組70頭灌服錦黃口服液5 mL (含生藥5g) ∕次，2次∕d，連用3 d；對(duì)照組25頭灌服黃梔口服液，5 mL (含生藥5 g) ∕次，2次∕d，連用3 d；對(duì)照組25頭肌內(nèi)注射甲磺酸左氧氟沙星注射液，1 mL(0.03 g)/kg，2次∕d，連用3 d。

2.5.2 斷奶仔豬臨床治療試驗(yàn) 選擇自然患腹瀉的斷奶仔豬40頭，隨機(jī)分為試驗(yàn)組20頭和對(duì)照組20頭，分別使用錦黃口服液和對(duì)照藥物進(jìn)行治療。試驗(yàn)組20頭灌服錦黃口服液，10 mL (含生藥10g)∕次，2次∕d，連用3 d；對(duì)照組10頭灌服黃梔口服液，10 mL (含生藥20 g)∕次，2次∕d，連用3 d。對(duì)照組10頭肌內(nèi)注射甲磺酸左氧氟沙星注射液，1 mL(0.02 g)/kg，2次/d，連用3 d。

2.6 臨床療效判定標(biāo)準(zhǔn)

2.6.1 痊愈 經(jīng)治療，患病仔豬精神正常，吃奶或吃食正常，糞便成形、軟硬適中、顏色及氣味正常，臨床癥狀完全消失，恢復(fù)正常。

2.6.2 有效 經(jīng)治療，患病仔豬精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)，食欲增強(qiáng)，糞便性狀好轉(zhuǎn)、其中水分明顯減少，臨床癥狀緩解。

2.6.3 無效 經(jīng)治療，患病仔豬精神、食欲無好轉(zhuǎn)，糞便性狀無好轉(zhuǎn)、病情加重或改用其他藥物治療，甚至死亡。

2.7 統(tǒng)計(jì)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

3 結(jié)果

3.1 錦黃口服液的體外抑菌作用

由表1可以看出，由黃連、地錦草、廣藿香、蒼術(shù)所組成的中草藥復(fù)方水煎劑對(duì)豬致病性大腸桿菌幾乎沒有抑菌作用，表現(xiàn)為不敏感，而對(duì)空腸彎曲菌、魏氏梭菌、克雷伯氏菌、仔豬痢疾密螺旋體和壞死桿菌均表現(xiàn)一定的抑菌作用，為低敏。見下圖。

表1 錦黃口服液的體外抑菌效果

3.2 錦黃口服液對(duì)吮乳仔豬臨床治療試驗(yàn)效果

錦黃口服液對(duì)吮乳仔豬腹瀉的治愈率和總有效率分別為88.57%和92.90%，明顯高于對(duì)照組，差異顯著(\%P\%<0.05)，說明錦黃口服液對(duì)吮乳豬腹瀉有較好的治療作用。結(jié)果見表2。

3.3 錦黃口服液對(duì)斷奶仔豬腹瀉臨床治療試驗(yàn)效果

錦黃口服液對(duì)斷奶仔豬腹瀉的總有效率和治愈率分別為90.00%和95.00%，顯著高于對(duì)照組(\%P\%<0.05)，黃梔口服液與甲磺酸左氧氟沙星注射液無顯著性差異。說明錦黃口服液對(duì)斷奶豬腹瀉有較好的治療作用，效果顯著。結(jié)果見表3。

表2 錦黃口服液治療吮乳仔豬腹瀉療效

注：同一列數(shù)據(jù)右肩標(biāo)小寫字母表示差異顯著 (\%P\%<0.05)。

表3 錦黃口服液對(duì)斷奶仔豬腹瀉治療效果

注：同一列數(shù)據(jù)右肩標(biāo)大寫字母表示差異顯著(\%P\%<0.05)。

4 討論

本文成功研制的錦黃口服液盡管對(duì)引起仔豬腹瀉的幾種常見病原菌有一定的抑菌作用，但體外抑菌試驗(yàn)對(duì)中草藥的抗菌作用只能是一種參考性的方法，其實(shí)際臨床應(yīng)用效果還必須通過動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)加以比較、驗(yàn)證，從而進(jìn)一步闡明其抑菌機(jī)理。

錦黃口服液在治療和預(yù)防仔豬腹瀉中具有良好的效果，由于其毒副作用小，因此在規(guī)模集約標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖場用錦黃口服液進(jìn)行仔豬腹瀉早期發(fā)病的治療，可有效抵御細(xì)菌性因素引起的仔豬腹瀉。同時(shí)克服單純應(yīng)用抗生素類藥物帶來的耐藥性、豬腸道菌群的紊亂等弊病，有很好的開發(fā)應(yīng)用發(fā)前景。

Effects of Traditional Chinese Medicine Compound Jinhuang Oral Liquid on Antibacterial in Vitro and Treatment of Diarrhea in Piglets

LI Ren-ge1, HU Hong-wei1, ZHANG Cheng-hu1

(InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryofLanzhou,LanzhouGansu730050China)

This paper aimed to investigate the effects of the Jinhuang oral liquid on preventing and treating diarrhea, and inhibiting the common pathogenic bacteria of diarrhea in piglets. The results showed that the Jinhuang oral liquid is not sensitive to E. coli and clostridium westergren, but is less sensitive to jejunum bending bacteria, klebsiella, diarrhea treponema of piglet and necrosis bacillus. The cure rate of Jinhuang oral liquid against piglet diarrhea is 88.57%, total validity is 92.90%, and the preventive rate is 100 %. The clinical effect is remarkable compared with Huangzhi oral liquid and mesylate levofloxacin.

Diarrhea piglet; Jinhuang oral liquid; test results

2016-04-11

甘肅省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項(xiàng)目(GNCX-2014-1)。

李仁閣(1982- )，男，山東臨沂人，碩士，獸醫(yī)師，主要從事畜牧獸醫(yī)工作。

S 853.2

A

1004-6704(2016)06-0039-04