射干提取物對(duì)慢性咽炎家兔血清中白細(xì)胞介素-4和免疫球蛋白E表達(dá)的影響*

尤獻(xiàn)民，鄒桂欣，趙金明，王光函，李國(guó)信

（遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧沈陽(yáng)　110034）

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射干提取物對(duì)慢性咽炎家兔血清中白細(xì)胞介素-4和免疫球蛋白E表達(dá)的影響*

尤獻(xiàn)民，鄒桂欣，趙金明，王光函，李國(guó)信

（遼寧省中醫(yī)藥研究院，遼寧沈陽(yáng)110034）

摘要：目的觀察射干提取物用于慢性咽炎家兔血清中白細(xì)胞介素-4（IL-4）和免疫球蛋白E（IgE）指標(biāo)的變化，以進(jìn)一步探討其治療作用機(jī)制。方法應(yīng)用氨水和松節(jié)油直接作用于大耳白家兔咽部黏膜制備慢性咽炎病理模型，以射干提取物進(jìn)行治療，觀察藥物對(duì)模型動(dòng)物血清IL-4和IgE表達(dá)的影響。結(jié)果模型組動(dòng)物血清中的IL-4和IgE含量顯著高于空白組（P＜0.05），經(jīng)射干提取物治療后血清中IL-4和IgE水平均較模型組降低。結(jié)論射干治療慢性咽炎藥理活性作用可能是通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。

關(guān)鍵詞：射干提取物；慢性咽炎；細(xì)胞因子；作用機(jī)制

*國(guó)家“十二五”重大新藥創(chuàng)制項(xiàng)目“中藥新藥臨床技術(shù)平臺(tái)評(píng)價(jià)研究技術(shù)平臺(tái)”，項(xiàng)目編號(hào)：2012zx09303-017；國(guó)家自然基金資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：81273927；國(guó)家臨床重點(diǎn)專(zhuān)科建設(shè)項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)資助；國(guó)家中醫(yī)藥管理局臨床中藥學(xué)重點(diǎn)學(xué)科；遼寧中醫(yī)藥大學(xué)杏林學(xué)者青藍(lán)工程。

慢性咽炎是指咽喉干燥、咽痛不適、咽內(nèi)異物感，經(jīng)久不愈的一種慢性咽部疾病，屬中醫(yī)“慢喉痹”范疇［1］，可能由病毒、細(xì)菌及變態(tài)反應(yīng)因素引起。射干作為治療喉痹咽痛的要藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》［2］，具有清熱解毒、消痰、利咽的作用，臨床有良好的治療效果。現(xiàn)代研究表明，射干中的異黃酮類(lèi)成分具有明顯抗炎、抑菌、止咳的藥理作用［3-5］。筆者通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)，以白細(xì)胞介素-4（IL-4）和免疫球蛋白E（IgE）為檢測(cè)指標(biāo)，從細(xì)胞因子的角度對(duì)射干治療咽炎的作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討。

1　材料與方法

1.1材料

儀器：美國(guó)Elx800TM型酶標(biāo)儀；高速冷凍離心機(jī)（日立工機(jī)株式會(huì)社）；喉頭噴霧器（泰興市輝春醫(yī)療器械有限公司）。

動(dòng)物：選取清潔級(jí)3月齡大耳白家兔60只，雌雄各半，體重1.8～2.3 kg。隨機(jī)分成6組，即空白組，模型組，射干提取物低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組（予慢嚴(yán)舒檸），每組10只。飼養(yǎng)環(huán)境，溫度（20±2）℃，自由飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

試劑與試藥：慢嚴(yán)舒檸（桂龍藥業(yè)＜安徽>有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20053117，規(guī)格為每袋5 g）；氨水（國(guó)藥集團(tuán)），松節(jié)油（長(zhǎng)沙化學(xué)試劑廠，分析純）；IgE和IL-4 ELISA試劑盒（南京建成生物工程研究所有限公司）。

射干提取物：射干藥材1 kg，加70%乙醇提取2次，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，用乙醇調(diào)整至含醇量為30%，上于D101大孔吸附柱上，用2倍量30%乙醇除雜，繼用80%乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥至干，即得。每1 g提取物含20.7 g射干藥材。

1.2試驗(yàn)方法

用喉頭噴霧器內(nèi)裝氨水（體積分?jǐn)?shù)為2.5%），對(duì)模型組、對(duì)照組、射干提取物劑量組共50只家兔噴咽，每日2次，上、下午各1次，每次噴3撳，連續(xù)噴17 d。其中在造模的第8～17天用扁桃體注射針將松節(jié)油注射于兔咽部黏膜下，每次0.2 mL，正常對(duì)照組動(dòng)物用生理鹽水噴咽及注射，操作方法與造模組完全相同。于造模第20天開(kāi)始給藥，每天1次，陽(yáng)性對(duì)照組給予慢嚴(yán)舒檸（50 mg/kg），射干提取物高劑量組、中劑量組、低劑量組分別給予射干提取物400，200，100 mg/kg，空白組及模型組給予等量蒸餾水。連續(xù)給藥7 d后，處死動(dòng)物，取血清標(biāo)本，用ELISA試劑盒檢測(cè)，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，測(cè)定各組動(dòng)物血清標(biāo)本中IL-4和IgE含量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

結(jié)果見(jiàn)表1?？梢?jiàn)，模型組中IL-4的含量顯著高于空白組（P＜0.01），提示造模成功；射干高、中、低劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組血清中IL-4含量均降低，射干低劑量組與模型組比較無(wú)顯著性差異，高劑量組（P＜0.01）、中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與模型組比較差異顯著（P＜0.05）。模型組中IgE的含量顯著高于空白組（P＜0.05），提示造模成功；射干高、中、低劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組血清中IgE含量均降低，但只有射干高劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05），射干中、低劑量組與模型組無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

表1　各組兔血清中IL-4和IgE含量比較（±s，pg/mL）

表1　各組兔血清中IL-4和IgE含量比較（±s，pg/mL）

注：與空白組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，#P＜0.01。

空白組模型組射干低劑量組射干中劑量組射干高劑量組陽(yáng)性對(duì)照組組別　動(dòng)物數(shù)（只）IL-4IgE 10 10 10 10 10 10 25.6±3.0 32.1±6.3▲29.7±4.2 27.0±3.1*25.1±3.0#26.5±1.8*19.6±3.1 24.4±5.2△22.9±4.1 21.7±2.6 20.1±2.5*19.3±2.6*

3　討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，慢性咽炎是咽黏膜、黏膜下及淋巴組織的彌漫性炎癥。細(xì)胞因子在慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，IL-4是其中一種重要的炎癥因子，在IgE介導(dǎo)的經(jīng)典Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)炎癥中發(fā)揮重要作用。因?yàn)樽儜?yīng)原被黏膜表面的抗原提呈細(xì)胞吸收后，被傳給Th0淋巴細(xì)胞，Th0細(xì)胞轉(zhuǎn)化成Th2細(xì)胞而開(kāi)始分泌IL-4，IL-4又刺激合成IgM的漿細(xì)胞轉(zhuǎn)化成合成的IgE的漿細(xì)胞，IgM結(jié)合到肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面，當(dāng)變應(yīng)原再次接觸機(jī)體后，與IgE結(jié)合引起變態(tài)炎癥反應(yīng)［6］。

射干是治療咽炎的要藥，提取物中主要含射干苷、野鳶尾苷、鳶尾黃素、野鳶尾黃素、次野鳶尾黃素等黃酮類(lèi)化合物，這些天然的藥物活性成分可能在體內(nèi)形成一個(gè)多途徑、多靶點(diǎn)系統(tǒng)而發(fā)揮作用。本試驗(yàn)結(jié)果提示，射干提取物對(duì)慢性咽炎的治療作用可能是通過(guò)降低血清中IgE水平，并抑制血清中IL-4的表達(dá)等來(lái)實(shí)現(xiàn)的，完整的作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn)：

［1］彭順林，張?jiān)?，陳?咽靈口服液對(duì)實(shí)驗(yàn)性慢性咽炎IL-13和EGF表達(dá)的影響［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻喉科雜志，2008，16（3）：168-170.

［2］孫星衍.神農(nóng)本草經(jīng)［M］.北京：中國(guó)古籍出版社，1982：275.

［3］李國(guó)信，秦文艷，齊越，等.射干提取物抗炎及鎮(zhèn)痛藥理實(shí)驗(yàn)研究［J］.實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2008，22（1）：3-4.

［4］秦文艷，趙金明，齊越，等.射干提取物體內(nèi)體外抑菌作用的研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（4）：147-150.

［5］趙金明，孟莉，陳賀，等.射干有效成分抗病毒主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2011，17（6）：9-12.

［6］葉京英，韓德民.慢性咽炎研究進(jìn)展［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘（耳鼻咽喉科學(xué)），2004，19（5）：268-271.

Effects of Rhizoma Belamcandae Extracts on the Expression of IL-4 and IgE in Rabbits with Experimentally Induced Chronic Pharyngitis

You Xianmin，Zou Guixin，Zhao Jinming，Wang Guanghan，Li Guoxin
（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang，Liaoning，China 110034）

Abstract：Objective To study the expression of interleukin-4 and IgE in the pharyngitis rabbit model with the Rhizoma Belamcandae extracts to explore its treatment mechanism.Methods White rabbits were used in this study to prepare the model of chronic pharyngitis，induced by directly applied into the pharyngeal mucosa with ammonia water and turpentine oil at first.Then，these modeling animals were divided into several groups，with the Rhizoma Belamcandae extracts taken to treat this kind of lesion.The changes in the expression of IL-4 and IgE of these animal models were determined to evaluate the pharmacological effects of this solution on the lesion.Results It was shown that the level of IL-4 and IgE were reduced among the animals in treating group（P＜0.05）.Conclusion The therapeutic mechanisms of Rhizoma Belamcandae extracts or the treatment of chronic pharyngitis may be achieved by regulating the expression of cytokines.

Key words：Rhizoma Belamcandae extracts；chronic pharyngitis；cytokines；mechanism

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5；R282.71

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-4931（2016）07-0003-02

作者簡(jiǎn)介：尤獻(xiàn)民（1964-），男，碩士研究生，研究員，研究方向?yàn)橹兴幮滤庨_(kāi)發(fā)，（電子信箱）yying _65@126.com；李國(guó)信（1963-），男，博士研究生，研究員，研究方向?yàn)榕R床藥學(xué)，本文通訊作者，（電子信箱）youxianminw1120@126.com。

收稿日期：（2015-10-14）