普洱市兒童呼吸道感染病原體IgM抗體九聯(lián)檢臨床應(yīng)用分析

羅　丹，張曉陽(yáng)，高向陽(yáng)，周春紅，文元幫

(昆明理工大學(xué)附屬普洱市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南普洱 665000)

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·論著·

普洱市兒童呼吸道感染病原體IgM抗體九聯(lián)檢臨床應(yīng)用分析

羅丹，張曉陽(yáng)，高向陽(yáng)△，周春紅，文元幫

(昆明理工大學(xué)附屬普洱市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南普洱 665000)

摘要:目的通過(guò)對(duì)普洱市兒童呼吸道感染病原體IgM抗體九聯(lián)檢的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，掌握該地區(qū)兒童呼吸道感染的流行病學(xué)特點(diǎn)，為臨床診療提供參考。方法隨機(jī)采集普洱市人民醫(yī)院2014年1～12月兒科門(mén)診及住院的呼吸道感染患兒1 327例血液樣本，采用9項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè)試劑盒(間接免疫熒光法)進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果在1 327例呼吸道感染患兒中，檢出IgM抗體陽(yáng)性446例，總陽(yáng)性率為33.6%。其中肺炎支原體(MP)陽(yáng)性率最高(23.6%)，其次乙型流感病毒(INFB)為 18.5%，嗜肺軍團(tuán)菌1型(LP)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(INFA)和副流感病毒(HPIVs)的陽(yáng)性率都比較低，依次為0.4%、1.1%、1.0%、1.1%、1.0%，Q熱立克次體(CB)和肺炎衣原體(CP)未檢出陽(yáng)性。9種病原體檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；6種主要病原體的月檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；各年齡段患兒病原體檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論普洱市兒童呼吸道感染的主要病原體是MP和INFB，病原體的流行病學(xué)分布與年齡和季節(jié)有關(guān)，臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)檢測(cè)結(jié)果對(duì)患兒進(jìn)行合理診療。

關(guān)鍵詞:兒童；呼吸道感染；九聯(lián)檢；間接免疫熒光法

急性呼吸道感染是兒童最為常見(jiàn)的疾病之一，其致病原包括細(xì)菌、病毒以及多種非典型致病原，臨床癥狀多相似，構(gòu)成情況比較復(fù)雜，病原譜和感染率常因地區(qū)、人群、季節(jié)的不同而存在差異，臨床往往難以針對(duì)病原體進(jìn)行治療，因此，病原體的檢測(cè)顯得尤為重要。而呼吸道感染病原體的快速檢測(cè)，能夠有效預(yù)防和控制兒童呼吸道感染，對(duì)臨床的快速診斷和合理治療提供重要依據(jù)。呼吸道感染病原體IgM抗體九聯(lián)檢(簡(jiǎn)稱呼吸道九聯(lián)檢)與微生物培養(yǎng)相比較，具有檢測(cè)周期短的特點(diǎn)，能夠快速，準(zhǔn)確檢測(cè)9種呼吸道感染病原體的IgM抗體。本研究就1 327例門(mén)診及住院患兒呼吸道九聯(lián)檢檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析，進(jìn)而探討普洱市兒童呼吸道感染的流行病學(xué)特征，為兒童呼吸道感染性疾病的防治提供參考。

1資料與方法

1.1一般資料2014年1～12月普洱市人民醫(yī)院兒科門(mén)診及住院的呼吸道感染兒童患者1 327例，其中男性752例，女性575例，年齡0～14歲，按年齡分為0～<1歲569例，1～<3歲329例，3～<6歲270例，6～≤14歲159例，均存在呼吸道感染的臨床癥狀。

1.2方法采集患兒空腹靜脈血2～3 mL,3 500 r/min離心15 min分離提取血清標(biāo)本。9項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè)試劑購(gòu)自鄭州安圖生物工程股份有限公司，采用間接免疫熒光法檢測(cè)嗜肺軍團(tuán)菌1型(LP)、肺炎支原體(MP)、Q熱立克次體(CB)、肺炎衣原體(CP)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(INFA)、乙型流感病毒(INFB)和副流感病毒(HPIVs)123型病原體的IgM抗體。嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，用熒光顯微鏡觀察結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)所用試劑及質(zhì)控品均為原廠配套產(chǎn)品，所有試劑及質(zhì)控品均在使用有效期內(nèi)，所有檢驗(yàn)項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控在實(shí)驗(yàn)期間均顯示實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。

1.3結(jié)果判斷陽(yáng)性結(jié)果：可以觀察到ADV、流感病毒、RSV或HPIVs的整個(gè)包被孔中有1%～15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或包膜出現(xiàn)蘋(píng)果綠色熒光(在HPIVs和RSV中能同時(shí)觀察到著色的合胞)；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的菌體呈現(xiàn)出蘋(píng)果綠色熒光；支原體出現(xiàn)細(xì)胞外圍蘋(píng)果綠色熒光。陰性結(jié)果：可觀察到軍團(tuán)菌、CP和立克次體無(wú)熒光，支原體、ADV、INFA和INFB、RSV和HPIVs細(xì)胞呈現(xiàn)紅色。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理根據(jù)觀察到的結(jié)果，統(tǒng)計(jì)9種病原體IgM抗體的檢測(cè)陽(yáng)性率，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)間比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.19種病原體檢測(cè)陽(yáng)性率在1 327例呼吸道感染患兒中，檢出446例IgM抗體陽(yáng)性，總陽(yáng)性率為33.6%。其中MP陽(yáng)性率最高(23.6%)，其次為INFB(18.5%),LP、ADV、RSV、INFA和 HPIVs陽(yáng)性率都比較低，依次為0.4%、1.1%、1.0%、1.1%、1.0%,CB和CP未檢出陽(yáng)性。9種病原體檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.26種主要病原體的月檢測(cè)陽(yáng)性率剔除未檢出陽(yáng)性的兩種病原體CB和CP及檢出率較低的LP，其余6種主要病原體的月檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　6種主要呼吸道病原體IgM抗體的月檢測(cè)陽(yáng)性率[n(%)]

2.3不同年齡段患兒主要呼吸道病原體檢測(cè)的陽(yáng)性率比較各年齡段患兒檢測(cè)呼吸道病原體總陽(yáng)性率依次為16.3%、45.0%、48.1%、47.1%。各年齡段患兒呼吸道感染的病原體均以MP陽(yáng)性率最高，其次為INFB。0～<1歲患兒MP和INFB的檢測(cè)陽(yáng)性率明顯低于其他3個(gè)年齡段患兒。不同年齡段患兒病原體檢測(cè)陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2　不同年齡段患兒主要呼吸道病原體IgM

3討論

呼吸道感染是兒童的常見(jiàn)病和多發(fā)病，由于兒童呼吸系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，機(jī)體抵抗力差，易發(fā)生呼吸道感染。然而，引起兒童呼吸道感染的病原體較為復(fù)雜，且臨床表現(xiàn)多相似，很容易被誤診和忽視，導(dǎo)致抗菌藥物濫用，延誤病情。因此，對(duì)兒童呼吸道病原體的正確診斷是預(yù)防和控制兒童呼吸道感染的關(guān)鍵所在。呼吸道病原體的檢測(cè)方法包括病原體分離培養(yǎng)及組織細(xì)胞培養(yǎng)法、血清學(xué)檢測(cè)法、分子生物學(xué)法、免疫學(xué)法等。病原體分離培養(yǎng)及組織細(xì)胞培養(yǎng)法是病原學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但檢測(cè)周期長(zhǎng)、技術(shù)要求高，而分子生物學(xué)法靈敏度高，但多種病原體同時(shí)檢測(cè)成本過(guò)高，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的條件要求也非常嚴(yán)格，兩者都不適合作為臨床常規(guī)項(xiàng)目開(kāi)展[1]。呼吸道九聯(lián)檢采用間接免疫熒光法，一塊載玻片可同時(shí)檢測(cè)9種呼吸道病原體IgM抗體。此方法特異度和敏感度高、操作簡(jiǎn)便、快速，所需標(biāo)本量少，便于兒童呼吸道感染的病原體篩查。

在本研究中，1327例呼吸道感染患兒，陽(yáng)性例數(shù)為446例，總陽(yáng)性率為33.6%，與國(guó)內(nèi)部分省份報(bào)道的結(jié)果基本一致[2-4]。本研究中，9種呼吸道病原體IgM抗體只檢測(cè)出了MP等7種病原體的IgM抗體，CB、CP沒(méi)有

檢出，這與國(guó)內(nèi)其他省份的報(bào)道存在不同[1，5-6]，表明兒童呼吸道感染的病原譜可能存在地區(qū)差異。在檢出的病原體中，以MP陽(yáng)性率最高(23.6%)，其次為INFB(18.5%)，LP、ADV、RSV、INFA和HPIVs陽(yáng)性率都較低，與文獻(xiàn)[7]報(bào)道結(jié)果相符。

本研究顯示，不同月份呼吸道病原體的檢測(cè)陽(yáng)性率有所不同，說(shuō)明呼吸道病原體的流行有一定的季節(jié)性。MP和INFB全年均有檢出，在9、10月兩者陽(yáng)性率均為最高,ADV、INFA、HPIVs和RSV全年陽(yáng)性率都較低，但8～12月份陽(yáng)性率相對(duì)其他月份較高；MP、INFB、ADV、INFA、HPIVs和RSV 這6種主要病原體秋冬兩季的陽(yáng)性率明顯高于春夏兩季，而以秋季的陽(yáng)性率為最高。由此可見(jiàn)，引起普洱市兒童呼吸道感染的主要病原體存在季節(jié)流行的趨勢(shì)，以MP和INFB最為明顯，并且秋季存在爆發(fā)流行的趨勢(shì)。

不同年齡段患兒呼吸道病原體的檢測(cè)陽(yáng)性率也存在一定差異，本研究顯示，各年齡段患兒的病原譜不完全一致，但各組中MP感染率均最高，INFB感染率居第2位。1～<3歲、3～<6歲和6～≤14歲這3個(gè)年齡段均是MP和INFB高峰發(fā)病年齡。而MP陽(yáng)性率在0～14歲的患兒中隨年齡增加而升高，原因可能是學(xué)齡前和學(xué)齡期兒童戶外活動(dòng)增加，大多集中在人群密集的學(xué)校，增加了交叉感染的概率。0～<1歲年齡段中病原體檢測(cè)陽(yáng)性率明顯低于其他3個(gè)年齡段，該年齡段為嬰兒期，可能與嬰兒從母體中獲取了相當(dāng)數(shù)量的免疫球蛋白，以保護(hù)其免受病原微生物的侵襲有一定關(guān)系，但也有可能嬰兒免疫功能低下，體內(nèi)有感染但抗體滴度較低，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果呈假陰性[6]。

綜上所述，本研究通過(guò)對(duì)普洱市兒童呼吸道九聯(lián)檢結(jié)果進(jìn)行綜合分析，從而了解到本地區(qū)兒童呼吸道感染不同病原體的檢出率、構(gòu)成等相關(guān)流行病學(xué)特征，為臨床的診斷和合理治療提供了重要依據(jù)和參考，臨床醫(yī)生應(yīng)參考檢測(cè)結(jié)果，合理使用抗菌藥物，防止因?yàn)E用抗菌藥物引起的耐藥。

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The analysis of clinical application on children′s respiratory tract infection pathogens IgM antibody nine-combined detection in Pu′er

LuoDan,ZhangXiaoyang,GaoXiangyang△,ZhouChunhong,WenYuanbang

(DepartmentofClinicalLaboratory,Pu′erPeople′sHospitalAffiliatedtoKunmingUniversityofScienceandTechnology,Pu′er,Yunnan665000,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the results of children′s respiratory tract infection pathogens IgM antibody nine-combined detection in Pu′er and grasp the epidemiological characteristics of respiratory tract infection of local children for providing reference for clinical diagnosis and treatment.Methods1 327 cases of children′s blood sample with respiratory tract infection were randomly sampled from in Pu′er People′s Hospital in 2014.All the samples were tested with nine respiratory tract infection pathogens IgM antibody detection reagent kit(indirect immunofluorescence),and the test results were adopted for statistical analysis.ResultsThere were 446 cases positive for IgM antibody in 1 327 cases of respiratory tract infection children,the total positive rate was 33.6%.The Positive rate of mycoplasma pneumonia(MP) was the highest,for 23.6%.The second was influenza B virus(INFB),for 18.5%.The eosinophilic lung legionella type 1(LP),adenovirus(ADV),respiratory syncytial virus(RSV),influenza A(INFA) and parainfluenza virus(HPIVs) were all much lower:respectively for 0.4%,1.1%,1.0%,1.1% and 1.0%.It was showed that no positive results were found in Q fever rickettsia(CB) and chlamydia pneumonia(CP).There was significant difference of the positive rate among 9 kinds of pathogens(P<0.05).There was significant difference of the monthly positive rate among the main six pathogens(P<0.05).There was significant difference of the positive rate in the different age groups(P<0.05).ConclusionThe respiratory tract infection pathogens of children in Pu′er are mainly mycoplasma pneumoniae and influenza B virus.The epidemiological distribution of the pathogens is related to the age and season,the clinician should reasonably diagnose and treat according to the test results for children.

Key words:children;respiratory tract infection;nine-combined detection;indirect immunofluorescence

(收稿日期：2015-12-22)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.020

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)09-1205-03

作者簡(jiǎn)介：羅丹，女，檢驗(yàn)技師，主要從事臨床免疫檢驗(yàn)工作研究?！魍ㄓ嵶髡?，E-mail：gxxyy68@163.com。