山豆根多糖對(duì)PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞存活率及分泌炎性因子的影響

張玲 李飛 韋英益 何家康 陳海蘭 胡庭俊 廖玲玲

摘要：【目的】探討山豆根多糖（SSP）對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）體外感染RAW264.7細(xì)胞存活率及分泌炎性因子水平的影響，為研發(fā)出治療豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）的新型獸藥提供參考依據(jù)?！痉椒ā恳?0、100、200和400 μg/mL SSP作用于PRRSV體外感染8 h的RAW264.7細(xì)胞，通過MTT法評(píng)價(jià)SSP對(duì)PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞存活率，ELISA檢測SSP對(duì)PRRSV體外感染RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和MCP-1?！窘Y(jié)果】PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h極顯著降低了細(xì)胞存活率（P<0.01，下同），而200～400 μg/mL SSP能極顯著升高PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞存活率。PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h可極顯著升高細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和MCP-1水平，而SSP能有效降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌上述炎性因子水平，其中以200～400 μg/mL SSP的抑制效果最佳?！窘Y(jié)論】SSP通過提高炎癥細(xì)胞存活率及抑制其分泌炎性因子水平，從而有效干預(yù)PRRSV感染免疫細(xì)胞的炎性反應(yīng)。

關(guān)鍵詞： 豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）；山豆根多糖；RAW264.7細(xì)胞；存活率；炎性因子

中圖分類號(hào)： S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2016）12-2151-06

Abstract：【Objective】The present study investigated effects of Sophora subprostrate polysaccharide（SSP） on cell viabilities and inflammatory cytokines of RAW264.7 cells infected by porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV） in vitro， in order to provide reference for developing new veterinary medicine curing PRRSV. 【Method】SSP was applied to RAW264.7 cells infected with PRRSV in vitro for 8 hours at dose of 50， 100， 200 and 400 μg/mL. Cell viabilities in SSP treated RAW264.7 cells infected by PRRSV in vitro were evaluated by MTT method. ELISA method was used to detect levels of inflammatory cytokines in culture supernatant of RAW264.7 cells， including TNF-α， IL-1β， IL-6， IL-8， IL-10 and MCP-1. 【Result】After eight hours of PRRSV infection， viabilities of RAW264.7 cells were significantly reduced（P<0.01，the same below）； 200-400 μg/mL SSP treatment significantly increased cell viabilities of RAW264.7 cells infected by PRRSV. The levels of TNF-α， IL-1β， IL-6， IL-8， IL-10 and MCP-1 were significantly increased in RAW264.7 cells infected with PRRSV. SSP treatment decreased levels of these inflammatory cytokines， and 200～400 μg/mL SSP had the best inhibiting effects. 【Conclusion】SSP can increase cell viabilities and reduce inflammatory cytokine levels in RAW264.7 cells infected by PRRSV， so as to intervene inflammatory response of immune cells infected by PRRSV.

Key words： porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV）； Sophora subprostrate polysaccharide； RAW264.7 cell； viability； inflammatory cytokine

0 引言

【研究意義】豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）屬尼多病毒目動(dòng)脈炎病毒科動(dòng)脈炎病毒屬，為RNA病毒。該病毒感染引發(fā)的豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）主要表現(xiàn)為母豬繁殖障礙、仔豬呼吸道癥狀和機(jī)體免疫抑制（譚業(yè)平等，2014），給世界養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。PRRSV感染可引起強(qiáng)烈的間質(zhì)性肺炎，表明炎癥反應(yīng)在PRRSV感染和致病性方面扮演著十分重要的角色（宋爽，2013）。病毒感染常導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，并促使機(jī)體產(chǎn)生過量的促炎細(xì)胞因子（Azevedo et al.，2006；Chen et al.，2012）。因此，掌握PRRSV感染的內(nèi)在規(guī)律，對(duì)尋找和研發(fā)出理想的抗病毒感染藥物具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】RAW264.7細(xì)胞作為單核/巨噬細(xì)胞常被應(yīng)用于病毒感染模型研究。Lin等（2012）以偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）感染RAW264.7細(xì)胞模擬單純皰疹病毒（Herpes simplex virus，HSV）感染誘導(dǎo)炎癥的情況，發(fā)現(xiàn)β-類胡蘿卜素能顯著抑制PRV誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞NO、IL-1β、IL-6、MCP-1的產(chǎn)生及NF-κB（p50和p65）、ERK、p38、JNK的表達(dá)，表明β-類胡蘿卜素通過抑制PRV誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)而起到抗炎作用。近年來，各國學(xué)者先后從多種生物體內(nèi)提取出大量的生物活性多糖，并證實(shí)這些生物多糖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等功能活性，且低毒、低殘留（Shao et al.，2004；Chang et al.，2010）。生物多糖能夠增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的增殖活性，促進(jìn)NO、H2O2等活性因子的產(chǎn)生及調(diào)節(jié)MCP-1、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-10等細(xì)胞因子的釋放，從而調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的免疫功能（Winzler et al.，1997）。李智軍（2000）對(duì)系膜增生性腎小球腎炎大鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖可降低大鼠血液及尿液中的IL-6含量，抑制系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)增多，具有抗炎保護(hù)作用。Yuan等（2008）研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖對(duì)非肥胖性糖尿病小鼠胰島β細(xì)胞中INF-γ、IL-1β、IL-6和TNF-α等細(xì)胞因子的表達(dá)有明顯的下調(diào)作用，說明黃芪多糖可糾正Th1型細(xì)胞因子的免疫失衡狀態(tài)，從而預(yù)防糖尿病發(fā)生（Qiu et al.，2010）。Su等（2013）研究表明，山豆根多糖在50～800 μg/mL濃度范圍內(nèi)對(duì)體外培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞存活率無顯著影響。【本研究切入點(diǎn)】目前，國內(nèi)外針對(duì)PRRSV誘導(dǎo)豬體內(nèi)炎癥反應(yīng)，特別是PRRSV誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生已有許多研究報(bào)道（馮麗麗，2009；郝祝兵，2014），但尚未研發(fā)出有效的治療藥物。多糖類藥物可從多方面對(duì)免疫系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，從而提高機(jī)體抗炎和抗病毒感染能力，但有關(guān)生物多糖是否對(duì)PRRSV感染引發(fā)的炎癥反應(yīng)具有抗炎作用尚需進(jìn)一步探究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】探討山豆根多糖（Sophora subprostrate polysaccharide，SSP）對(duì)PRRSV體外感染RAW264.7細(xì)胞存活率及分泌炎性因子水平的影響，為研發(fā)出治療PRRS的新型獸藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

山豆根多糖（SSP）為灰白色粉末狀，由廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室采用水提醇沉法提取并精制獲得，經(jīng)苯酚硫酸法測得總糖含量為88.48%。SSP溶液：準(zhǔn)確稱取SSP溶解于10% FBS-DMEM培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)至所需濃度，用0.22 μm濾膜過濾，現(xiàn)配現(xiàn)用。PRRSV-GXA株毒株由廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院基礎(chǔ)藥理實(shí)驗(yàn)室保存提供，經(jīng)非洲綠猴腎傳代細(xì)胞（Marc-145）增殖后測得病毒滴度為10-5.6 TCID50/0.1 mL，用時(shí)調(diào)節(jié)至PRRSV體外感染RAW264.7細(xì)胞氧化脅迫模型稀釋度（100倍稀釋）。RAW264.7細(xì)胞由廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院基礎(chǔ)藥理實(shí)驗(yàn)室分離并凍存。南美洲胎牛血清（FBS）經(jīng)56 ℃水浴滅活30 min，用0.22 μm濾膜過濾后-20 ℃凍存?zhèn)溆?；DMEM干粉、RPMI- l640干粉購自美國Gibco公司；小鼠TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、MCP-1等ELISA檢測試劑盒購自欣博盛生物科技有限公司；脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）、噻唑藍(lán)（MTT）、雙抗（P/S）、谷氨酰胺、胰蛋白酶等均購自美國Sigma公司。主要儀器設(shè)備：Multimode Plate Reader多功能酶標(biāo)儀（PerkinElmer，瑞士）、TS100-F倒置顯微鏡（尼康，日本）、C150細(xì)胞培養(yǎng)箱（Binder，德國）。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 MTT法檢測RAW264.7細(xì)胞活性 設(shè)空白對(duì)照（CK）、SSP 400 μg/mL、SSP 200 μg/mL、SSP 100 μg/mL、SSP 50 μg/mL、PRRSV+SSP 400 μg/mL、PRRSV+SSP 200 μg/mL、PRRSV+SSP 100 μg/mL、PRRSV+SSP 50 μg/mL、LPS、PRRSV共11個(gè)處理組，每組6孔重復(fù)。

取傳代生長良好的RAW264.7細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)其濃度至1×105 cell/mL鋪于96孔板中，100 μL/孔，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后，棄上清液，各病毒組加入PRRSV液（100 μL/孔），非病毒組加入等量的無血清DMEM，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)2 h，每15 min搖勻1次。棄上清液，多糖組分別加入不同濃度的山豆根多糖（200 μL/孔），LPS組加入1 μg/mL LPS（200 μL/孔），空白對(duì)照組、病毒對(duì)照組則加入等量的10% FBS-DMEM培養(yǎng)液。37 ℃、5% CO2培養(yǎng)4 h，吸出20 μL上清液后加入20 μL的5 mg/mL MTT繼續(xù)培養(yǎng)，4 h后棄上清液，加入100 μL DMSO振蕩，室溫避光靜置10 min，以Plate Reader多功能酶標(biāo)儀檢測OD570 nm（劉民等，2005；趙嘉惠等，2007）。

1. 2. 2 ELISA檢測RAW264.7細(xì)胞分泌炎性因子水平 設(shè)空白對(duì)照（CK）、PRRSV+SSP 400 μg/mL、PRRSV+SSP 200 μg/mL、PRRSV+SSP 100 μg/mL、PRRSV+SSP 50 μg/mL、LPS、PRRSV共7個(gè)處理組，每組4孔重復(fù)。

傳代生長良好的RAW264.7細(xì)胞調(diào)節(jié)至1×106 cell/mL鋪于24孔板中，1000 μL/孔，置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)12 h。細(xì)胞貼壁后，棄上清液，病毒組加入PRRSV液（200 μL/孔），空白對(duì)照組加入10% FBS- DMEM（200 μL/孔），LPS組加入1 μg/mL LPS（200 μL/孔），37 ℃、5% CO2培養(yǎng)2 h，每15 min搖勻1次。棄上清液，多糖組加入不同濃度的山豆根多糖（1000 μL/孔），LPS組加入1 μg/mL LPS（1000 μL/孔），空白對(duì)照組、病毒對(duì)照組則加入等量的10% FBS-DMEM培養(yǎng)液。37 ℃、5% CO2培養(yǎng)8 h后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，以ELISA試劑盒檢測炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和MCP-1水平，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含量。

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），并以Duncans進(jìn)行組間比較分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 RAW264.7細(xì)胞存活率測定結(jié)果

由表1可知，經(jīng)50、100、200、400 μg/mL SSP分別處理8 h后RAW264.7細(xì)胞存活率未出現(xiàn)下降趨勢，反而呈升高趨勢，其中100、200和400 μg/mL SSP處理的RAW264.7細(xì)胞存活率極顯著高于空白對(duì)照組（P<

0.01，下同）。PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h后能有效降低細(xì)胞存活率，與空白對(duì)照組相比差異極顯著，但加入SSP處理8 h后RAW264.7細(xì)胞存活率均有所回升，其中200和400 μg/mL SSP能極顯著提高PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞存活率，100 μg/mL SSP能顯著提高PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞存活率（P<0.05，下同）。

2. 2 RAW264.7細(xì)胞分泌炎性因子水平測定結(jié)果

2. 2. 1 TNF-α水平測定結(jié)果 由表2可知，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h可明顯升高細(xì)胞分泌TNF-α水平，與空白對(duì)照組相比差異極顯著。加入不同濃度SSP處理8 h后，發(fā)現(xiàn)SSP能有效降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α的能力。其中，100 μg/mL SSP能顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α水平，200和400 μg/mL SSP能極顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α水平。

2. 2. 2 IL-1β水平測定結(jié)果 由表2可知，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h可升高細(xì)胞分泌IL-1β水平，與空白對(duì)照組相比差異顯著。加入不同濃度SSP處理8 h后，發(fā)現(xiàn)SSP能有效降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-1β的能力。其中，以200和400 μg/mL SSP的效果最明顯，使PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-1β水平接近于空白對(duì)照組，而與病毒對(duì)照組（PRRSV）相比差異極顯著。

2. 2. 3 IL-6水平測定結(jié)果 PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h可極顯著升高細(xì)胞分泌IL-6水平（表2），但加入不同濃度SSP處理8 h后，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-6水平明顯下降。其中，200 μg/mL SSP能顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-6水平，400 μg/mL SSP能極顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-6水平。表明SSP能有效抑制PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-6的能力。

2. 2. 4 IL-8水平測定結(jié)果 由表2可知，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h可極顯著升高細(xì)胞分泌IL-8水平，但加入不同濃度SSP處理8 h后，發(fā)現(xiàn)SSP能有效降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-8水平。其中，50～100 μg/mL SSP能在一定程度上降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-8水平，但與病毒對(duì)照組（PRRSV）相比差異不顯著（P>0.05，下同）；200和400 μg/mL SSP能極顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-8的能力。

2. 2. 5 IL-10水平測定結(jié)果 由表2可知，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h可極顯著升高細(xì)胞分泌IL-10水平，但加入不同濃度SSP處理8 h后，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-10水平得到有效抑制。其中，50 μg/mL SSP能在一定程度上降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-10水平，但與病毒對(duì)照組（PRRSV）無顯著差異，100、200和400 μg/mL SSP能極顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-10水平。

2. 2. 6 MCP-l水平測定結(jié)果 由表2可知，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h可極顯著升高細(xì)胞分泌MCP-l水平，但加入不同濃度SSP處理8 h后，發(fā)現(xiàn)100、200和400 μg/mL SSP能極顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌MCP-l水平，表明SSP能有效抑制PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌MCP-l的能力。

3 討論

PRRSV主要感染機(jī)體肺臟及一些淋巴器官，其宿主細(xì)胞是巨噬細(xì)胞，包括各種未成熟或已分化的巨噬細(xì)胞。肺泡巨噬細(xì)胞來自單核巨噬細(xì)胞系，由單核細(xì)胞系定居在組織中分化而來（Lamontagne et al.，2003）。作為一種貼壁生長的單核/巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞具有轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域（Pang et al.，2010）。本研究結(jié)果表明，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h后極顯著降低細(xì)胞存活率，但加入不同濃度SSP處理8 h后，尤其是經(jīng)200和400 μg/mL SSP處理的PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞存活率極顯著升高，提示一定濃度的SSP能有效降低PRRSV感染引起的細(xì)胞死亡，進(jìn)而提高免疫細(xì)胞的存活率。

TNF-α作為巨噬細(xì)胞分泌的最重要促炎細(xì)胞因子，能夠刺激巨噬細(xì)胞活化并誘導(dǎo)其他促炎細(xì)胞因子分泌（Bradley，2008）。TNF-α可活化T、B淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，并通過與受體TNFR1結(jié)合誘導(dǎo)產(chǎn)生黏附分子和其他細(xì)胞因子。IL-1β主要是由淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種促炎細(xì)胞因子，是機(jī)體調(diào)節(jié)免疫與炎癥反應(yīng)的重要核心介質(zhì)，在炎性反應(yīng)中發(fā)揮重要作用（賈文思等，2013）。Liu等（2009）研究表明，豬肺泡巨噬細(xì)胞感染PRRSV后誘導(dǎo)分泌產(chǎn)生的IL-1β大量增多。而毛予龍等（2012）研究發(fā)現(xiàn)，甘草酸苷可通過降低促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-6等含量來增強(qiáng)細(xì)胞的抗炎能力，進(jìn)而發(fā)揮抗病毒作用。本研究發(fā)現(xiàn)，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h可極顯著升高細(xì)胞分泌TNF-α和IL-1β水平，而SSP能有效降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α和IL-1β的能力，其抑制作用隨多糖劑量的增加而增強(qiáng)。

IL-6作為一種多效的細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)多種生物進(jìn)程，包括炎癥與免疫應(yīng)答、應(yīng)激反應(yīng)、造血系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等（Hirano，2009）。當(dāng)機(jī)體發(fā)生炎癥或其他病變時(shí)，單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是最早產(chǎn)生IL-6的反應(yīng)細(xì)胞（Hirano et al.，1990）。在通常情況下，IL-6與TNF-α和IL-1β一同產(chǎn)生，參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)（Rachman and Rinaldi， 2006； Sakakibara and Tosato，2011）。Liu等（2009）研究發(fā)現(xiàn)，8周齡仔豬在感染PRRSV后第7 d，豬肺泡巨噬細(xì)胞分泌大量IL-6。張海等（2014）研究表明，巴馬汀可明顯抑制LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞IL-6的生成，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗炎作用。本研究發(fā)現(xiàn)，200 μg/mL SSP可顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-6水平，400 μg/mL SSP可極顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-6水平。

趨化因子家族中兩個(gè)重要成員（IL-8和MCP-1）與炎癥反應(yīng)過程密切相關(guān)（Braganhol et al.，2015；Crucitti et al.，2015；Deng et al.，2015）。IL-8是一種多功能的細(xì)胞因子，在病毒感染引發(fā)的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用（何青，2015）。Ait-Ali等（2007）研究發(fā)現(xiàn)，PRRSV感染長白豬和皮特蘭豬2 h后，其肺泡巨噬細(xì)胞中的 IL-8 水平急劇增高，且呈穩(wěn)步上升趨勢；值得注意的是，長白豬巨噬細(xì)胞易感PRRSV的程度沒有皮特蘭豬強(qiáng)，其IL-8的分泌量亦低于皮特蘭豬，說明IL-8是巨噬細(xì)胞對(duì)PRRSV感染的一種免疫應(yīng)答。MCP-1是趨化因子家族CC亞族成員，同屬成員有5種（MCP-l、MCP-2、MCP-3、MCP-4和MCP-5）。MCP-1作為一種能促進(jìn)機(jī)體內(nèi)炎癥微環(huán)境形成的細(xì)胞因子，與免疫應(yīng)答過程及多種病理變化的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)（Miotto et al.，2007）。仲芳等（2009）研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素可抑制LPS誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞IL-8和MCP-1的表達(dá)水平，提示姜黃素在腎臟炎癥過程中具有抑制腎小管上皮細(xì)胞炎性因子分泌及潛在的抗纖維化作用。在本研究中，PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞8 h可極顯著升高細(xì)胞分泌IL-8和MCP-1水平，而200～400 μg/mL SSP可極顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-8和MCP-1水平。

IL-10是一種對(duì)多種細(xì)胞均有影響的多功能細(xì)胞因子，可由多種細(xì)胞產(chǎn)生，如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、成熟的樹突狀細(xì)胞等（Flores-Mendoza et al.，2008）。大多數(shù)病毒感染機(jī)體后均能引起IL-10高水平表達(dá)，一些病毒還通過編碼與IL-10同源的蛋白，借助其免疫抑制特性促進(jìn)病毒感染（Redpath et al.，2001；Breen，2002）。另外，IL-10作為一種多效性細(xì)胞因子被普遍認(rèn)為在PRRSV免疫學(xué)與病理學(xué)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在LPS刺激RAW264.7細(xì)胞釋放炎性因子模型中，人工麝香水提物可明顯降低炎性因子IL-10的釋放，即人工麝香具有顯著的抗炎免疫調(diào)節(jié)活性（孟迂等，2014）。本研究結(jié)果表明，100～400 μg/mL SSP可極顯著降低PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞分泌IL-10水平。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，適量的SSP能有效提高PRRSV感染RAW264.7細(xì)胞存活率及降低其分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10及MCP-1水平，即SSP通過提高炎癥細(xì)胞存活率及抑制其分泌炎性因子水平，從而有效干預(yù)PRRSV感染免疫細(xì)胞的炎性反應(yīng)。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）