參芎注射液對順鉑耳蝸毒性防護作用的實驗研究*

張　博，陳　穎，黃　喜，程勝男，李海燕

(1.湖北科技學院五官醫(yī)學院，湖北 咸寧 437100；2.湖北科技學院五官醫(yī)學院10級耳鼻咽喉班)

?

參芎注射液對順鉑耳蝸毒性防護作用的實驗研究*

張博1，陳穎2，黃喜2，程勝男2，李海燕2

(1.湖北科技學院五官醫(yī)學院，湖北 咸寧 437100；2.湖北科技學院五官醫(yī)學院10級耳鼻咽喉班)

摘要：目的 探討參芎注射液對順鉑致小鼠耳毒性拮抗作用。方法 將30只成年健康小鼠隨機分為3組：對照組(A組)：連續(xù)7d 腹腔注射生理鹽水2ml/(kg·d)；順鉑組(B組)：連續(xù)7 d腹腔注射順鉑4mg/(kg·d)；參芎組(C組)：先于第1、2d腹腔注射參芎液4ml/(kg·d)，接著第3～9d注射順鉑4mg/(kg·d)，注射順鉑30min后腹腔注射參芎液4ml/(kg·d)。通過測試聽性腦干反應(auditory brainstem response，ABR)閾值，觀察各組小鼠聽力的變化。應用顯微鏡觀察耳蝸毛細胞損傷情況。結(jié)果 ①用藥前,三組小鼠ABR閾值差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。用藥后，B組和C組ABR閾值均明顯高于A組(P<0．01)，但C組ABR閾值明顯低于B組(P<0．01)。②顯微鏡下顯示：A組耳蝸內(nèi)外毛細胞排列整齊,細胞間邊緣清楚；B組耳蝸毛細胞破壞嚴重，腫脹、邊緣不清楚、外毛細胞嚴重缺失； C組耳蝸外毛細胞損傷及缺失現(xiàn)象較B組輕。結(jié)論 參芎注射液可減輕順鉑所致毛細胞損傷，可在一定程度上有效預防順鉑的耳毒性。

關鍵詞：參芎注射液；順鉑；耳毒性；聽性腦干反應

順鉑是臨床最常用抗腫瘤藥物之一，常用于治療頭頸部及泌尿生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤，具有良好的療效。但是臨床研究表明順鉑與其他抗腫瘤藥物一樣，有許多毒副作用，其中以內(nèi)耳損害致聾和腎臟損害最為嚴重[1～3]，目前尚無有效防治及拮抗手段。參芎葡萄糖注射液為復方制劑，其主要成分為：鹽酸川芎嗪和丹參素，臨床主要用于閉塞性腦血管疾病及其他缺血性血管疾病治療。本研究通過建立動物順鉑耳毒性模型，探討參芎注射液對順鉑致小鼠耳毒性拮抗作用，以尋求防治順鉑耳蝸毒性損傷的有效藥物。

1資料與方法

1.1一般資料選擇成熟健康小白鼠30只(校實驗動物中心提供)，耳廓反射正常，體重28～30 g，雌雄不限。動物隨機分成3組，每組10只。對照組(A組)：連續(xù)7d，每天腹腔注射生理鹽水2ml/(kg·d)。順鉑組(B組)：連續(xù)7 d腹腔注射順鉑4mg/(kg·d)(齊魯制藥有限公司)。參芎組(C組)：先于第1、2d腹腔注射參芎注射液4ml/(kg·d)(貴州景峰注射液有限公司)，接著第3～9d注射順鉑4mg/(kg·d)，注射順鉑30min后腹腔注射參芎注射液4ml/(kg·d)。

1.2聽性腦干反應(ABR) 閾值檢測小鼠經(jīng)1%戊巴比妥鈉(上海西唐科技公司) 按35～40 mg/kg腹腔注射麻醉，在隔聲屏蔽室內(nèi)檢測各組動物給藥前及停藥后24h ABR閾值。記錄電極放置于兩耳廓前沿連線中點，參考電極置于同側(cè)耳垂，接地電極置于鼻尖處。聲刺激強度從95 dB SPL開始，以5 dB SPL 依次遞減，ABR閾值判定以Ⅲ波為準。

1.3形態(tài)學觀察于停藥24 h檢測ABR閾值后，每組動物行耳蝸鋪片，觀察其形態(tài)學變化及毛細胞缺失情況。

2結(jié)果

2.1一般狀況A組小鼠無異常變化。B組小鼠給藥期間食欲減退、體重減輕、活動遲緩、毛發(fā)疏松。C組上述現(xiàn)象較B組輕。

2.2各組ABR閾值變化由表1可見，三組小鼠用藥前ABR閾值差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。用藥后，B和C組ABR閾值均明顯高于A組(P<0．01)，但C組ABR閾值明顯低于B組(P<0．01)。

表1　各組小鼠ABR閾值變化

與A組比較，*P<0.01；與B組比較，△P<0.01

2.3耳蝸鋪片顯微鏡下觀察各組耳蝸鋪片顯示：A組耳蝸毛細胞排列整齊有序,細胞間邊緣清楚，見圖1(封二)；B組毛細胞破壞嚴重，細胞間邊緣不清楚，有顯著外毛細胞缺失，見圖2(封二)；C組耳蝸外毛細胞損傷及缺失現(xiàn)象較輕，見圖3(封二)。箭頭所指處為外毛細胞缺失部位。

各組耳蝸對應部位毛細胞計數(shù)：在光鏡(×400)下從左向右連續(xù)數(shù)三排外毛細胞各50個，計數(shù)出各組缺失毛細胞數(shù)。結(jié)果顯示：B組外毛細胞缺失最嚴重，C組外毛細胞缺失明顯低于B組(P<0.05)，A組無明顯毛細胞缺失。見表2。

表2　各組耳蝸對應部位缺失毛細胞數(shù)比較(個，±s，n=10)

與B組比較，*P<0.05

3討論

順鉑是臨床治療頭頸部及泌尿生殖系統(tǒng)的惡性腫瘤的首選藥物之一，然而該藥具有嚴重的耳毒性副作用，可導致耳蝸毛細胞受損，從而造成雙側(cè)聽力喪失。關于順鉑耳毒性作用機制存在多種學說，目前尚無統(tǒng)一認識。有文獻報道[4]順鉑對耳蝸形態(tài)的影響主要表現(xiàn)在Corti器、血管紋和螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元這三方面。目前認為順鉑耳毒性機制可能與以下途徑有關[4，5]： 藥物選擇性聚集于內(nèi)耳，當達到中毒劑量時，可引起細胞水腫、細胞間隙壓縮或閉合，造成藥物排泄緩慢，使順鉑在內(nèi)耳可長時間、高濃度存在，引起耳毒性損傷。 引起毛細胞內(nèi)線粒體變性，由于線粒體是細胞進行氧化代謝、提供能量的中心，其損傷勢必影響細胞的代謝及功能活動。順鉑還能引起耳蝸血管紋的損傷，而血管紋是整個耳蝸包括內(nèi)、外毛細胞及支持細胞能量的主要來源，其損傷也會影響細胞代謝和功能活動，導致耳蝸功能的失調(diào)[6]。 影響抗氧化酶及參與三羧酸循環(huán)的各種酶的功能正常發(fā)揮。

參芎葡萄糖注射液為復方制劑，其主要成分為鹽酸川芎嗪和丹參素，具有抗血小板聚集，擴張冠狀動脈，降低血液粘度，加速紅細胞的流速，改善微循環(huán)，并具有抗心肌缺血和心肌梗死的作用，臨床主要用于閉塞性腦血管疾病及其他缺血性血管疾病治療。本研究觀察到順鉑可使小鼠ABR閾值升高，耳蝸毛細胞破壞嚴重，部分外毛細胞缺失；使用參芎注射液后ABR閾值降低，毛細胞損傷及缺失減輕。結(jié)果表明參芎注射液可在一定程度上抑制順鉑誘導的耳蝸毛細胞的破壞，有效減輕聽功能的損傷。至于參芎注射液對順鉑耳毒性防護作用具體機制，還有待于今后更深入的研究。

參考文獻：

[1]廖英俊，湯浩．抗癌藥順鉑耳毒性機制及防治方法的研究進展[J]．生理科學進展，2003，34(3)：266

[2]Tsuchiya A,Imai M,Kamimura H,et al.Successful treatment of multiple lung metastases of hepatocellular carcinoma by combined chemotherapy with docetaxel，cisplatin and tegafur/uracil[J].World Journal of Gastroenterology,2009,15(14):1779

[3]Mukherjea D,Jajoo S,Whitworth C,et al.Short interfering rna against transient receptor potential vanilloid 1 attenuates cisplatin-induced hearing loss in the rat[J].J Neurosci,2008,28(49):13056

[4]費文彬,江洋,吳展元.順鉑耳毒性的研究[J].聽力學及言語疾病雜志,2007,15(6):505

[5]沈雄，王揮戈，何婉瓏，等.黃芪對順鉑耳蝸毒性防護作用的實驗研究[J].中國實用醫(yī)藥,2009,4(11):22

[6]Wang J,Lloyd Faulconbridge RV,Fetoni A,et al.Local application of sodium thiosulfate prevents cisplatin-induced hearing loss in the guineapig[J],2003,45(3):380

Protective Effect of Shenxiong Injection on Cochlea Toxicity Induced by Cisplatin

ZHANG Bo,CHEN Ying，HUANG Xi,et al

(HubeiUniversityofScienceandTechnology,XianningHubei437100,China)

ABSTRACT：Objective To investigate the protective effect of Shenxiong injection on cisplatin-induced ototoxicity in mice. Methods 30 adult healthy mice were randomly divided into 3 groups: control group (group A)，cisplatin group (group B) and Shenxiong injection group (group C).The group A was injected intraperitoneally with normal saline for 7 days，group B was treated with cisplatin at the dose of 4mg/kg for 7 days，once a day，and group C was treated with Shenxiong injection at the dose of 4ml/kg for consecutive 9 days.The threshold of auditory brainstem response(ABR)and the changes of hearing were measured in each group.The injury of cochlear hair cells was observed by microscope.Results Before treatment，there was no significant difference for ABR threshold between the three groups(P>0.05).After treatment，the ABR thresholds in group B and group C were significantly higher than that of group A(P<0.01)，but the ABR threshold in group C was significantly lower than that in group B(P<0.01).Under the microscope，the hair cells of group B were severally damaged and swollen，the edge was not clear，and the outer hair cells were badly absent.Compared with group B，Shenxiong injection could significantly alleviate the pathological changes of cochlear hair cells.Conclusion Shenxiong injection can reduce the damage of hair cells induced by cisplatin，and prevent effectively cisplatin-induced ototoxicity.

KEY WORDS：Shenxiong injection;Cisplatin;Ototoxicity；Auditory brainstem response

(收稿日期：2016-01-09)

DOI:10.16751/j.cnki.2095-4646.2016.02.0111

中圖分類號：R-322

文獻標識碼：A

文章編號：2095-4646(2016)02-0111-03

基金項目：大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目