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    溶氧對(duì)氨基酸發(fā)酵的影響分析

    2016-05-28 16:52張兆峰孫麗美張現(xiàn)峰
    科技與創(chuàng)新 2016年10期
    關(guān)鍵詞:色氨酸大腸桿菌氨基酸

    張兆峰+孫麗美+張現(xiàn)峰

    摘 要:控制溶解氧,使其最大限度地發(fā)揮作用,保障氨基酸發(fā)酵工程的質(zhì)量,已經(jīng)成為業(yè)內(nèi)人士探討的共同課題。對(duì)氨基酸發(fā)酵及其他酸類的發(fā)酵具有戰(zhàn)略性意義。L-色氨酸作為8種基本氨基酸之一,具有普遍性。從氧在氨基酸好氧發(fā)酵過(guò)程中發(fā)揮的作用入手,引出溶氧對(duì)氨基酸發(fā)酵的影響分析實(shí)驗(yàn)。以大腸桿菌為培養(yǎng)菌群,以L-色氨酸為對(duì)象進(jìn)行了實(shí)驗(yàn),取得了一些成果,以期對(duì)業(yè)內(nèi)相關(guān)研究起到一定的指導(dǎo)作用。

    關(guān)鍵詞:溶氧;氨基酸;大腸桿菌;L-色氨酸

    中圖分類號(hào):TQ922 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A DOI:10.15913/j.cnki.kjycx.2016.10.098

    利用菌群產(chǎn)生氨基酸的技術(shù)已經(jīng)發(fā)展了50多年,并且取得了顯著的成效。當(dāng)前,氨基酸發(fā)酵仍然是十分實(shí)用的,是很多企業(yè)常用的發(fā)酵技術(shù)。在發(fā)酵過(guò)程中,溶解氧起著十分重要的作用,其濃度直接影響著氨基酸發(fā)酵的質(zhì)量——濃度過(guò)低或者過(guò)高都有可能直接破壞菌群的生長(zhǎng)和培育,影響產(chǎn)酸過(guò)程。

    1 氧在氨基酸好氧發(fā)酵中發(fā)揮的作用

    我們知道,需要氧氣的菌類和兼性厭氧的菌類是氨基酸發(fā)酵過(guò)程中最為常見(jiàn)的兩種菌種,發(fā)酵過(guò)程離不開(kāi)溶氧的參與。氨基酸的發(fā)酵首先是生產(chǎn)菌種的充分生長(zhǎng),然后才是菌類代謝物的聚集。無(wú)論哪一個(gè)環(huán)節(jié),都要以溶氧的輔助為前提,溶氧的濃度一定要適宜,否則適得其反。以谷氨酸為例,在菌種的發(fā)育成長(zhǎng)階段,如果溶氧濃度過(guò)高,高氧會(huì)阻礙氨基酸發(fā)酵菌種的生長(zhǎng),使之難以消耗糖原,加速菌類的老化,進(jìn)而使菌種無(wú)法將糖轉(zhuǎn)化為所需的養(yǎng)分;相反,如果溶氧的濃度過(guò)低,氨基酸的合成速度將會(huì)受到影響,會(huì)產(chǎn)生很多代謝廢物,不利于其成長(zhǎng)??偟膩?lái)說(shuō),不適宜的濃度會(huì)嚴(yán)重阻礙培養(yǎng)菌的健康生長(zhǎng),甚至還會(huì)使整個(gè)氨基酸的質(zhì)量受到破壞。在菌種代謝物的產(chǎn)生過(guò)程中,溶氧的濃度也很重要。在菌類產(chǎn)酸的合成期,需要大量的溶氧,溶氧量要充足,這樣才能夠配合菌類充分發(fā)酵產(chǎn)酸;如果溶氧量剛剛好,氨基酸生產(chǎn)可以達(dá)到最大量;如果溶氧量不足,不僅代謝物的產(chǎn)生會(huì)受到阻礙,還有可能產(chǎn)生其他的副產(chǎn)物,給氨基酸的培養(yǎng)生產(chǎn)帶來(lái)麻煩。

    那么,如何有效地控制溶氧量呢?下面以L-色氨酸為對(duì)象,以大腸桿菌為菌種進(jìn)行溶氧量控制實(shí)驗(yàn)。

    2 溶氧量控制實(shí)驗(yàn)

    2.1 實(shí)驗(yàn)基本材料和實(shí)驗(yàn)方法

    培養(yǎng)基:蛋白陳、牛肉膏、酵母膏、氯化鈉、瓊脂、硫化鈉溶液、硫化鎂溶液、玉米漿等。

    實(shí)驗(yàn)條件:無(wú)菌工作室。

    實(shí)驗(yàn)設(shè)備:搖瓶4只、鼓風(fēng)器、烘干機(jī)、干燥劑、精細(xì)儀表盤(pán)、高速離心機(jī)、滅菌儀器、發(fā)酵儀器、恒溫箱等。

    2.2 培植方法

    實(shí)驗(yàn)前,將大腸桿菌接種在活化菌斜面,放于恒溫箱中,恒溫保存,24 h后取出。將活化斜面上一塊正常的大腸桿菌菌群取下放入搖瓶中,將搖瓶密封,再用不透光的衛(wèi)生布將搖瓶層層包裹,完全密封;將包裹好的搖瓶放于恒溫的搖床之中,調(diào)至常溫,轉(zhuǎn)速為200 r/min,培養(yǎng)1 d。將所有的細(xì)菌種子放到發(fā)酵箱中,溫度保持在28 ℃左右,酸堿度為中性,通風(fēng)量保持在200 L/h。用種子液浸泡15 min。

    2.3 分析方法

    用無(wú)菌水洗滌大腸桿菌菌種,之后要在高溫下烘干。測(cè)定方法采用比色法,溶氧量測(cè)定采用動(dòng)態(tài)測(cè)定法。

    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)分析

    2.4.1 供氧速率對(duì)L-色氨酸發(fā)酵的影響

    供氧速率會(huì)影響L-色氨酸發(fā)酵過(guò)程中的供氧量。實(shí)驗(yàn)顯示,攪拌速度越快,通氣量越大,供氧效率越高,供氧量就越大,溶氧量也就越大。當(dāng)通氣量為200 L/h時(shí),溶氧量最合理,L-色氨酸的培養(yǎng)數(shù)量最多;當(dāng)攪拌速度為300 r/h左右時(shí),菌體的生長(zhǎng)最為健康,產(chǎn)酸量最大。

    2.4.2 DO值對(duì)L-色氨酸發(fā)酵的影響

    實(shí)驗(yàn)可得,當(dāng)DO值分別為10%,20%,30%,40%時(shí),L-色氨酸的質(zhì)量濃度分別為8 g/L、10 g/L、9 g/L、6 g/L,菌體的質(zhì)量濃度分別為11 g/L、13 g/L、15 g/L、14 g/L。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出,當(dāng)DO值為20%時(shí),L-色氨酸的產(chǎn)量達(dá)到最大,但是對(duì)菌體卻沒(méi)有明顯的影響。由此可見(jiàn),相對(duì)穩(wěn)定的DO值對(duì)大腸桿菌和L-色氨酸的培養(yǎng)更為有益。

    2.4.3 應(yīng)用正交設(shè)計(jì)進(jìn)行分階段供養(yǎng)研究

    我們將氨基酸的發(fā)酵過(guò)程分解為3個(gè)時(shí)間階段,分別為0~24 h、24~48 h、48~72 h。保持3個(gè)時(shí)間段中其他因素不變,分別得出4次實(shí)驗(yàn)的成果,其正交水平分別為0~24 h:10 302 040,24~48 h:40 301 020,48~72 h:20 403 010.其中,在24~48 h的時(shí)間段,正交水平最高,DO值可達(dá)到20%,大腸桿菌質(zhì)量最為穩(wěn)定,產(chǎn)酸效果最好,L-色氨酸質(zhì)量最好。

    3 結(jié)束語(yǔ)

    通過(guò)以L-色氨酸為對(duì)象,以大腸桿菌為菌種的溶氧量控制實(shí)驗(yàn)我們可以得出以下結(jié)論:①供氧速率對(duì)溶氧量起著重要的作用,二者是正比例關(guān)系。②通風(fēng)量和攪拌速度是供氧速率的兩個(gè)決定因素。當(dāng)通風(fēng)量達(dá)到200 L/h,攪拌速度在300 r/h左右時(shí),大腸桿菌菌體和L-色氨酸質(zhì)量最好。③DO值對(duì)發(fā)酵結(jié)果有極大的影響,對(duì)L-色氨酸的影響較大,對(duì)大腸桿菌菌群的影響不是很明顯。當(dāng)DO值達(dá)到20%時(shí),L-色氨酸產(chǎn)酸量達(dá)到最大值。正交設(shè)計(jì)分階段供養(yǎng)證明,發(fā)酵時(shí)間不同,溶氧對(duì)氨基酸發(fā)酵的影響也不同。當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為24~48 h時(shí),不論是大腸桿菌,還是L-色氨酸,其質(zhì)量都是最穩(wěn)定的。

    參考文獻(xiàn)

    [1]王健,陳寧.色氨酸生產(chǎn)菌的選育及其發(fā)酵條件的研究[J].氨基酸和生物資源,2013(5):43-44.

    [2]盧志洪,劉志成,鄭穗平.不同溶氧條件下谷氨酸棒桿菌發(fā)酵過(guò)程代謝物及關(guān)鍵酶酶活分析[J].中國(guó)釀造,2010(2):21.

    [3]郭智成.對(duì)美國(guó)L-色氨酸事件的回顧和思考[J].醫(yī)學(xué)與哲學(xué),2011(8):60-61.

    〔編輯:劉曉芳〕

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