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    凋膜止崩方對大鼠子宮內(nèi)膜增生癥組織中MMP—1及TIMP—1mRNA表達的影響

    2016-05-14 11:40:28樊麗萍賀豐杰
    云南中醫(yī)中藥雜志 2016年8期
    關(guān)鍵詞:基質(zhì)金屬蛋白酶

    樊麗萍 賀豐杰

    摘要:目的 探討凋膜止崩方對大鼠子宮內(nèi)膜增生癥子宮內(nèi)膜組織中MMP-1及TIMP-1mRNA表達的影響,為一種臨床治療無排卵型功血(ADUB)的新方法---中藥靶向干預子宮內(nèi)膜增生癥提供理論依據(jù)。方法 應用RT--PCR技術(shù)從基因水平檢測凋膜止崩方對去勢雌性大鼠增生癥子宮內(nèi)膜組織中MMP-1及其抑制因子TIMP-1 mRNA表達的影響。結(jié)果 用藥組子宮內(nèi)膜組織中MMP-1mRNA的表達均顯著低于正??瞻捉M,而TIMP-1mRNA的表達均顯著高于正??瞻捉M(P<005)。結(jié)論 凋膜止崩方對子宮內(nèi)膜增生癥組織中MMP-1及其抑制因子TIMP-1mRNA有顯著影響,抑制MMP-1mRNA的表達,而促進TIMP-1mRNA的表達,破壞增生過長的子宮內(nèi)膜,達到徹底治愈功血的目的,替代宮腔鏡下子宮內(nèi)膜電切術(shù)(TCRE),克服了手術(shù)的部分副作用,值得臨床推廣應用。

    關(guān)鍵詞:凋膜止崩方;子宮內(nèi)膜增生癥;基質(zhì)金屬蛋白酶;基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物

    中圖分類號:R2855 文獻標志碼:A 文章編號:1007-2349(2016)08-0075-03

    【Abstract】Objective:To study the effect ofDiaomozhibeng Prescription on MMP-1 and TIMP-1mRNA expression of endometrial hyperplasia tissues in rats and to provide a theoretical basis for anovulatory dysfunctional uterine bleeding(ADUB)method,ieTCM targeted intervention endometrial hyperplasiaMethods:RT-PCR technique was used to detect genetically the effect ofDiaomozhibeng Prescription on MMP-1 and TIMP-1 mRNA expression of endometrial hyperplasia tissues in ovariectomized ratsResults:The expression of MMP-1mRNA endometrial tissue of the treatment group was significantly lower than that of the normal control group,but the expression of TIMP-1mRNA was significantly higher than that of the normal control group(P

    【Key words】Diaomozhibeng Prescription,endometrial hyperplasia,matrix metalloproteinase,matrix metalloproteinase inhibitor

    凋膜止崩方由鴉膽子油、莪術(shù)和元胡組成。鴉膽子油是由鴉膽子果實用石油醚提取所得的脂肪油,加入乳化劑而成的。經(jīng)實驗研究和大量臨床病例證實,鴉膽子油乳[1-2]對白血病、結(jié)腸癌、黑色素瘤、卵巢癌、Lweis肺癌及肉瘤確有顯著的抑制效果。

    基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的第一個成員,在結(jié)構(gòu)上由10個外顯子和9個內(nèi)含子組成?;|(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)是體內(nèi)MMPs的天然特異性組織抑制劑,廣泛存在于組織和體液中,能以1:1克分子比例與MMP-1酶原或活性酶非共價結(jié)合,從而抑制MMP-1酶原活化及其活性[3]。子宮內(nèi)膜增生癥是由于子宮內(nèi)膜受雌激素持續(xù)作用而無孕酮拮抗所發(fā)生的不同程度的增殖性改變,近年來發(fā)病率有上升趨勢。本實驗采用不同濃度的凋膜止崩方作用于去勢雌性大鼠增生癥子宮內(nèi)膜組織,觀察增生過長子宮內(nèi)膜組織中MMP-1及TIMP-1 mRNA表達的變化,探討中藥靶向干預子宮內(nèi)膜增生癥的作用機制,為臨床用藥提供理論依據(jù)。

    1 資料與方法

    11 實驗材料與分組 健康成年SD雌性大鼠(大鼠批號,許可證號:SCXK陜2007-001)45只,體重(200±20)g,購自西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心。將購回的大鼠適應性喂養(yǎng)3 d,隨機分成4組,分組情況如下:空白組:10只;對照組:10只;小劑量組:10只;大劑量組:10只。造膜:空白組僅行開關(guān)腹,其余三組均去掉大鼠卵巢組織(去卵巢目的:使大鼠不排卵即造成無排卵型功血),術(shù)后3天空白組各大鼠給肌注花生油015 mL/100 g,其余3組大鼠均肌注苯甲酸雌二醇015 mL/100 g隔日1次,連續(xù)10次后各組隨機處死2只取其子宮病理證實為子宮內(nèi)膜增生癥(其中有4例為復雜性增生即出現(xiàn)背靠背現(xiàn)象,3例為單純性增生,1例無變化);免疫組化證實子宮內(nèi)膜組織中MMP-1與TIMP-1的表達(見圖1-8)3天后將生理鹽水06 mL(因雌性大鼠子宮為雙子宮,一側(cè)容積為03 mL)注入對照組大鼠雙側(cè)子宮腔內(nèi)。將已配好的凋膜止崩液(小劑量0001 g/06 mL即單側(cè)為00005 g/03 mL)注入小劑量組大鼠的雙側(cè)子宮腔內(nèi);(大劑量0002 g/06 mL即單側(cè)為0001 g/03 mL)注入大劑量組大鼠的雙側(cè)子宮腔內(nèi),連續(xù)喂養(yǎng)3 d。

    12 檢測方法 提取組織后,通過BESTBIO-貝博提供試劑盒完成cDNA的合成,由北京奧科生物技術(shù)有限責任公司設(shè)計引物,以cDNA為模板進行PCR反應,獲取電泳圖后。通過Flourchem V 20Stand A lone軟件計算組織中的MMP-1,TIMP-1mRNA表達水平。

    13 統(tǒng)計學處理 應用美國SPSS130統(tǒng)計軟件分析系統(tǒng)資料采用F檢驗后進行t檢驗比較差異。P<005認為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    21 凋膜止崩方對MMP-1及TIMP-1mRNA表達的影響,見圖9-10。RT-PCR結(jié)果顯示:空白組,對照組,大劑量組,小劑量組MMP-1條帶與內(nèi)參照GAPDH條帶灰度比值分別為:132、143、046、072。TIMP-1條帶與內(nèi)參照GAPDH條帶灰度比值分別為:119、080、101、095,MMP-1mRNA在對照組中表達最高,在用藥組中的表達明顯降低。TIMP-1mRNA在用藥組中的表達明顯升高,在對照組中表達降低(P<005)。

    3 討論

    凋膜止崩方中鴉膽子[4]又名老膽子、苦參子。其作用為可清熱、瀉火并解毒、截瘧治痢、腐蝕贅疣。

    MMPs是一組調(diào)節(jié)復雜鈣及鋅依耐的中性蛋白酶家族,是細胞外基質(zhì)降解過程中的重要酶類[5],MMPs的活性調(diào)節(jié)在組織重建,炎癥及腫瘤生長、組織侵襲、轉(zhuǎn)移等過程中起重要作用。在正常穩(wěn)態(tài)組織中MMPs表達量極少,而在炎性細胞因子,激素,生長因子刺激下其表達量上升,從而在許多生理及病理過程中扮演重要角色。TIMPs是一組能抑制MMP活性的多功能因子家族。TIMPs主要是從MMP酶原活性階段,在活化的MMP階段兩個方面抑制MMP的激活,其表達受激素、細胞因子和生長因子等多方面調(diào)控[6]。TIMP通過調(diào)節(jié)MMP的活性調(diào)控細胞外基質(zhì)(ECM)的更新,細胞外基質(zhì)合成與降解過程的協(xié)調(diào)依賴于二者間的平衡[7]。子宮內(nèi)膜周期性的增生和剝脫生理過程中無疑貫穿著組織的崩解和重建,因此MMPs和TIMPs的協(xié)調(diào)表達必然在這一過程中起著關(guān)鍵作用[8]。近年來,在ADUB的研究中也比較關(guān)注MMPs和TIMPs的表達和變化,研究表明[9]MMPs和TIMPs的表達異常與功能失調(diào)性子宮出血的發(fā)生有一定的關(guān)系,而抑制MMPs的活性成為功能失調(diào)性子宮出血治療的又一新靶點。另外,且研究還表明[10]MMPs在降解ECM的同時,還具有調(diào)節(jié)細胞生長,凋亡,分化等更廣泛而復雜的生物學作用,而TIMP能抑制血管生成素,誘導血管內(nèi)皮細胞出芽[11]。

    本實驗結(jié)果顯示:凋膜止崩方對增生癥子宮內(nèi)膜組織中MMP-1,TIMP-1有明顯影響,可使MMP-1mRNA的表達明顯降低,而TIMP-1mRNA的表達明顯增加,表明TIMP-1可有效抑制子宮內(nèi)膜過度增生及侵襲生長,推測凋膜止崩方可能是通過抑制子宮內(nèi)膜部分炎癥因子,切斷細胞因子作用途徑達到間接抑制MMPs 分泌的目的,還可能是通過增加孕激素受體(PR)數(shù)量以使內(nèi)膜對孕酮反應增強[12],進而抑制MMP的合成與釋放,替代宮腔鏡下子宮內(nèi)膜電切術(shù),克服了手術(shù)的部分副作用(如子宮穿孔、水中毒、電灼傷、氣體栓塞等),給子宮內(nèi)膜增生癥的治療提供了新的靶點,為凋膜止崩方在臨床治療子宮內(nèi)膜增生癥提供了理論依據(jù)。

    參考文獻:

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    (收稿日期:2016-05-23)

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