新型漢防己甲素衍生物的合成及其生物活性

衛(wèi)　笑， 楊義芳， 趙正保*

(1. 山西醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，山西 太原　030001; 2. 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院，上?！?00040)

?

·研究論文·

新型漢防己甲素衍生物的合成及其生物活性

衛(wèi)笑1， 楊義芳2， 趙正保1*

(1. 山西醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，山西 太原030001; 2. 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院，上海200040)

摘要：以漢防己甲素為原料，經(jīng)溴代反應(yīng)制得關(guān)鍵中間體5-溴漢防己甲素(2)； 2與硼酸衍生物經(jīng)Suzuki反應(yīng)合成了6個(gè)新型的漢防己甲素衍生物(4a～4f)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR, (13)C NMR和ESI-MS表征。采用CCK-8法初步考察了4a～4f對(duì)人早幼粒白血病細(xì)胞(HL60)和人肺癌細(xì)胞(A549)的抑制活性；并采用MTT法對(duì)活性較好的化合物進(jìn)行復(fù)篩。采用酶聯(lián)免疫吸附法考察4a～4f對(duì)多種受體酪氨酸激酶的抑制活性。結(jié)果表明：4b, 4c和4e對(duì)HL60和A549有一定的抑制活性;4b和4c對(duì)受體酪氨酸激酶FGFR1的抑制活性大于50%。

關(guān)鍵詞：漢防己甲素； 合成； 生物活性； 受體酪氨酸激酶

漢防己甲素(1, Tetrandrine )是從防己科植物防己根中提取的雙芐基異喹啉類生物堿之一，其藥理作用非常廣泛，近年來其抗腫瘤方面的作用備受關(guān)注[1-4]。以1為先導(dǎo)化合物，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，有望合成出生物活性更好的雙芐基異喹啉類衍生物。

蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(PTKs )家族在細(xì)胞生長、增殖、分化中具有重要作用。正常情況下, 由酪氨酸激酶和酪氨酸磷酸酶拮抗調(diào)節(jié)以維持平衡。但是，基因突變、基因融合等病理機(jī)制均會(huì)導(dǎo)致PTKs的持續(xù)活化，使細(xì)胞調(diào)節(jié)功能異常，誘發(fā)腫瘤[5]。通過阻斷酪氨酸激酶破壞腫瘤細(xì)胞的信號(hào)傳遞, 從而達(dá)到治療腫瘤的目的，是目前抗腫瘤藥物的一個(gè)研究熱點(diǎn)[6-7]。

Scheme 1

本文以1為原料，經(jīng)溴代反應(yīng)制得關(guān)鍵中間體5-溴漢防己甲素(2)； 2與硼酸衍生物經(jīng)Suzuki反應(yīng)合成了6個(gè)新型的漢防己甲素衍生物(4a～4f， Scheme 1)，其結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR,13C NMR和ESI-MS表征。并采用CCK-8法和MTT法對(duì)4a～4f的體外生物活性進(jìn)行篩選；采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)考察了4a～4f對(duì)多種蛋白質(zhì)酪氨酸激酶的抑制作用[8-11]。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試劑

ZF-I型三用紫外分析儀；AVANCE 600 MHz型和AV-III 400 MHz型超導(dǎo)核磁共振儀(CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo))；Agilent 1100SL型離子阱質(zhì)譜儀；Molecular Device SpectraMax 190型酶標(biāo)儀；SMART CELL-CO2型培養(yǎng)箱；SW-CJ-2F型超凈工作臺(tái)。

人肺癌細(xì)胞株(A549)，人早幼粒白血病細(xì)胞株(HL60)， Sigma公司；DMEM/High Glucose培養(yǎng)基，HyClone公司；0.25%胰蛋白酶溶液，Invitrogen公司；蛋白酪氨酸激酶(PTKs)，上海藥物研究所；其余所用試劑均為分析純。

1.2合成

(1) 2的合成

在單頸瓶中依次加入1 3 g(5 mol)，三氟乙酸20 mL和水10 mL，攪拌使其溶解；緩慢注入1.2 mol·L-1溴的乙酸(5 mL)溶液，于冰鹽浴中反應(yīng)4.5 h。加冰水50 mL淬滅反應(yīng),用氨水調(diào)至堿性后用二氯甲烷(2×200 mL)萃取，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水(3×50 mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥;減壓蒸除部分溶劑，剩余物用乙醚重結(jié)晶，再經(jīng)硅膠柱層析[洗脫劑：V(甲醇) ∶V(乙酸乙酯)=7 ∶3]純化得白色無定型粉末2 3.1 g,收率94%, m.p.142.3～144.1 ℃;1H NMRδ： 7.34(dd,J=8.2 Hz, 2.1 Hz, 1H), 7.14(dd,J=8.1 Hz, 2.5 Hz, 1H), 6.86(s, 2H), 6.79(dd,J=8.3 Hz, 2.5 Hz, 1H), 6.53(s, 1H), 6.52(s, 1H), 6.30(dd,J=8.3 Hz, 2.1 Hz, 1H), 6.02(s, 1H), 3.93(s, 3H), 3.79(d,J=10.1 Hz, 1H), 3.74(s, 3H), 3.55～3.40(m, 3H), 3.37(s, 3H), 3.26(dd,J=12.5 Hz, 5.6 Hz, 1H), 3.22(s, 3H), 2.98(m, 2H), 2.89(m, 1H), 2.82～2.67(m, 5H), 2.64(s, 3H), 2.49(d,J=8.4 Hz, 1H), 2.29(s, 3H);13C NMRδ： 153.77, 149.37, 148.75, 148.25, 147.85, 147.13, 143.33, 142.83, 135.11, 134.41, 132.65, 130.12, 128.31, 128.26, 128.12, 127.88, 122.83, 121.99, 121.94, 120.34, 116.19, 112.64, 112.22, 111.52, 63.75, 61.59, 60.48, 60.38, 56.12, 55.47, 45.18, 43.69, 42.65, 42.12, 41.44, 37.80, 25.41, 22.69; ESI-MSm/z: 701.47, 703.34{[M+H]+}。

(2) 4a～4f的合成(以4a為例)

在三頸燒瓶中依次加入2 70 mg(0.1 mmol)，甲苯20 mL和水5 mL，攪拌使其溶解；加入1 mol·L-1AcOK 5 mL,于20 ℃超聲脫氣20 min。抽真空充氮?dú)舛啻?，加入Pd(dppf)Cl222 mg和 4-聯(lián)苯基苯硼酸(3a)61.6 mg(0.2 mmol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流(90 ℃)反應(yīng)8 h。冷卻至室溫，加蒸餾水5 mL淬滅反應(yīng)。過濾，濾液中加入乙酸乙酯30 mL，用飽和食鹽水(3×50 mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑后經(jīng)薄層層析[展開劑:V(二氯甲烷) ∶V(甲醇) ∶V(乙酸乙酯) ∶V(石油醚)=15 ∶1 ∶1 ∶1]純化得5-(4-聯(lián)苯基)漢防己甲素(4a)。

用類似方法合成4b～4f。

4a: 白色粉末，收率42%， m.p.233.5～234.9 ℃;1H NMRδ： 7.65(d,J= 7.4 Hz, 5H), 7.49～7.34(m, 6H), 7.18～7.15(m, 1H), 6.91(d,J=8.1 Hz, 1H), 6.85(d,J=6.4 Hz, 1H), 6.61(s, 1H), 6.57(s, 1H), 6.35(d,J=7.0 Hz, 1H), 6.08(s, 1H), 3.94(s, 3H), 3.68～3.51(m, 4H), 3.49(s, 3H), 3.48(s, 3H), 3.26(s, 3H), 3.15～2.88(m, 7H), 2.78(s, 3H), 2.62(s, 3H), 2.45(s, 3H);13C NMRδ： 153.99, 149.51, 149.00, 147.61, 147.22, 143.95, 142.14, 140.78, 139.90, 135.21, 133.87, 132.59, 130.43, 130.39, 129.59, 128.81, 128.81, 127.38, 127.35, 127.08, 127.08, 127.01, 126.99, 126.97, 126.94, 126.92, 126.90, 126.87, 126.86, 123.45, 122.19, 122.14, 120.49, 115.65, 112.47, 111.73, 63.93, 60.84, 60.28, 56.11, 55.74, 44.90, 43.26, 41.97, 38.16, 37.10, 31.94, 30.05, 29.71, 22.70; ESI-MSm/z: 775.7{[M+H]+}。

4b: 灰色粉末，收率55.4%， m.p.147.6～148.3 ℃;1H NMRδ: 7.42(d,J=8.2 Hz, 1H), 7.16(d,J=8.3 Hz, 1H), 6.92(d,J=8.1 Hz, 2H), 6.86(dd,J=8.2 Hz, 2.4 Hz, 1H), 6.74(dd,J=49.7 Hz, 17.9 Hz, 3H), 6.61(s, 1H), 6.55(s, 1H), 6.35(d,J=8.0 Hz, 1H), 6.08(s, 1H), 3.94(s, 3H), 3.93(s, 3H), 3.89(s, 3H), 3.64(d,J=61.0 Hz, 3H), 3.50(m, 4H), 3.46(s, 3H), 3.24(s, 3H), 3.20～3.07(m, 4H), 2.98(dd,J=16.6 Hz, 5.7 Hz, 1H), 2.89～2.81(m, 3H), 2.79(s, 3H), 2.64(m, 2H), 2.47(s, 3H);13C NMRδ: 154.00, 150.14, 149.55, 149.20, 148.78, 148.6, 148.22, 147.78, 143.92, 142.20, 132.56, 130.94, 130.51, 129.80, 128.84, 128.42, 128.22, 128.15, 127.72, 126.71, 123.66, 122.26, 122.20, 120.50, 115.41, 113.25, 113.17, 112.38, 111.77, 110.92, 65.59, 63.79, 60.81, 60.34, 56.09, 56.06, 56.04, 56.02, 55.89, 55.87, 55.77, 44.64, 41.59, 38.16, 29.71, 22.70; ESI-MSm/z: 759.7{[M+H]+}。

4c: 淡黃色粉末，收率59.5%， m.p.184.4～186.3 ℃;1H NMRδ： 7.36(dd,J=8.2 Hz, 1.3 Hz, 1H), 7.33～7.27(m, 1H), 7.15(dd,J=8.1 Hz, 2.1 Hz, 1H), 6.84(m, 5H), 6.72～6.66(m, 1H), 6.58(s, 1H), 6.55(s, 1H), 6.35～6.31(m, 1H), 6.05(s, 1H), 4.57(m, 1H), 3.93(s, 3H), 3.91(d,J= 5.6 Hz, 1H), 3.86(d,J=5.8 Hz, 1H), 3.47(s, 3H), 3.46～3.42(m, 1H), 3.41(s, 3H), 3.38(d,J=7.4 Hz, 1H), 3.30～3.26(m, 1H), 3.24(s, 3H), 3.03～2.96(m, 1H), 2.93～2.88(m, 1H), 2.84～2.73(m, 4H), 2.65(s, 3H), 2.55(dd,J=60.5 Hz, 27.5 Hz, 3H), 2.30(s, 3H), 1.34(d,J=5.9 Hz, 6H);13C NMRδ： 157.69, 154.22, 150.27, 149.57, 149.54, 148.08, 146.62, 144.07, 142.35, 136.85, 132.59, 132.43, 130.64, 129.42, 129.31, 128.08, 125.93, 124.06, 123.26, 122.38, 122.25, 121.93, 120.56, 118.10, 117.33, 115.21, 115.03, 114.03, 112.34, 111.93, 69.86, 63.94, 60.85, 60.85, 60.36, 56.07, 56.07, 55.76, 44.64, 43.76, 41.23, 38.41, 29.68, 23.23, 22.12, 22.06, 22.03; ESI-MSm/z: 757.7{[M+H]+}。

4d: 灰色粉末，收率60.7%， m.p.122.3～123.6 ℃;1H NMRδ： 7.40～7.34 (m, 3H), 7.22～7.18(m, 1H), 7.16(dd,J=7.9 Hz, 2.0 Hz, 2H), 7.12(t,J=7.2 Hz, 2H), 7.06(dd,J=15.6 Hz, 7.9 Hz, 4H), 6.87(d,J=7.8 Hz, 1H), 6.83(dd,J=8.1 Hz, 1.8 Hz, 1H), 6.57(s, 2H), 6.34(d,J=7.9 Hz, 1H), 6.06(s, 1H), 3.93(s, 3H), 3.54(d,J=12.9 Hz, 1H), 3.46(s, 3H), 3.44(s, 3H), 3.40(dd,J=11.7 Hz, 6.4 Hz, 3H), 3.24(s, 3H), 3.04(dd,J=19.2 Hz, 8.3 Hz, 3H), 2.88～2.78(m, 6H), 2.70(s, 3H), 2.65(d,J=14.1 Hz, 1H), 2.35(s, 3H);13C NMRδ： 156.02, 155.24, 152.88, 148.48, 148.41, 147.77, 146.36, 146.30, 142.89, 140.86, 133.27, 132.90, 131.56, 131.28, 130.35, 130.24, 129.90, 129.32, 128.75, 128.75,128.13, 127.82, 126.17, 125.99, 125.78, 124.30, 122.35, 122.08, 121.07, 119.41, 118.06, 118.06,117.35, 114.85, 111.50, 110.54, 64.56, 62.60, 59.73, 59.18, 55.09, 54.66, 43.62, 41.81, 40.92, 40.85, 36.98, 29.54, 23.50, 20.80; ESI-MSm/z: 791.7{[M+H]+}。

4e: 灰色粉末，收率63.6%， m.p.164.7～166.1 ℃;1H NMRδ： 7.38(s, 1H), 7.17(m, 5H), 6.84(dd,J=23.1 Hz, 7.8 Hz, 3H), 6.57(d,J=3.5 Hz, 2H), 6.33(d,J=6.7 Hz, 1H), 6.06(s, 1H), 3.92(s, 3H), 3.51(m, 1H), 3.49(s, 3H), 3.43(s, 6H), 3.40～3.32(m, 2H), 3.24(s, 3H), 3.01(s, 3H), 2.82(m, 4H), 2.70(s, 3H), 2.67～2.57(m, 2H), 2.51(d,J=7.1 Hz, 2H), 2.34(s, 3H), 0.94(d,J=6.6 Hz, 6H);13C NMRδ： 154.10, 149.56, 149.28, 147.92, 146.71, 144.00, 142.29, 140.81, 132.58, 130.64, 130.23, 129.65, 129.55, 129.52, 129.49, 129.13, 129.10, 129.06, 129.03, 128.98, 126.37, 123.85, 123.79, 122.31, 122.17, 122.17, 120.55, 115.34, 112.37, 111.87, 60.76, 60.38, 56.08, 55.73, 45.22, 44.86, 43.59, 41.69, 37.42, 37.09, 32.75, 31.92, 30.24, 30.04, 29.71, 22.71, 22.44, 22.44; ESI-MSm/z: 755.7{[M+H]+}。

4f: 淡黃色粉末，收率48%， m.p.172.1～174 ℃;1H NMRδ： 7.71(s, 1H), 7.53(s, 1H), 7.36(d,J=42.3 Hz, 2H), 7.16(s, 1H), 6.86(d,J=33.4 Hz, 3H), 6.73(d,J=14.0 Hz, 1H), 6.57(d,J=15.2 Hz, 2H), 6.34(s, 1H), 6.07(s, 1H), 4.08(m, 2H), 3.93(s, 3H), 3.83(s, 3H), 3.62(m, 1H), 3.46(s, 6H), 3.42～3.36(m, 1H), 3.25(s, 3H), 3.12～2.80(m, 7H), 2.76(s, 3H), 2.73～2.67(m, 1H), 2.56(m, 2H), 2.42(s, 3H);13C NMRδ： 159.39, 154.06, 149.77, 149.51, 149.12, 147.72, 147.08, 143.97, 142.13, 133.48, 132.58, 132.31, 130.93, 130.47, 130.30, 129.36, 129.20, 128.85, 127.66, 127.53, 126.67, 126.64, 126.34, 123.59, 122.23, 122.16, 120.49, 115.57, 112.43, 111.76, 65.59, 63.90, 60.88, 60.27, 56.10, 55.71, 55.27, 44.74, 43.28, 41.71, 31.93, 30.57, 29.71, 29.37, 22.70; ESI-MSm/z: 729.6{[M+H]+}。

1.3生物活性測(cè)定

(1) 細(xì)胞培養(yǎng)

將HL60和A549細(xì)胞接種于含10%胎牛血清，100 U·mL-1青霉素和100 μg·mL-1鏈霉素的1640培養(yǎng)液中，于37 ℃在5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞采用對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞。

(2) CCK-8法活性初篩

選用對(duì)數(shù)生長期的貼壁腫瘤細(xì)胞，用0.25%胰蛋白酶消化制成單細(xì)胞懸液后，將細(xì)胞密度調(diào)整為5．0×104個(gè)/mL，每孔接種細(xì)胞懸液100 μL，共96孔，于37 ℃在飽和濕度下含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h。每孔加入不同濃度的藥物，每組3個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組加入相同體積培養(yǎng)基，陽性藥物為1，于37 ℃在飽和濕度下含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h。終止培養(yǎng)前1 h，每孔加入10 μL CCK-8溶液，混勻，在細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育1 h。于490 nm波長處檢測(cè)各孔的OD 值，計(jì)算細(xì)胞存活率(細(xì)胞存活率/%=D實(shí)驗(yàn)組/D對(duì)照組×100%，對(duì)照組存活率記為100%)。

(3) MTT法活性復(fù)篩

選取濃度為10 μmol·mL-1時(shí)對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的抑制率大于50%的化合物，采用MTT法進(jìn)行復(fù)篩。準(zhǔn)備方法同1.3(2)。每孔中加入5 mg·mL-1MTT 20 μL，在培養(yǎng)箱中保溫3～4 h。每孔加入100 μL 溶解液，繼續(xù)在培養(yǎng)箱中保溫過夜，使生成的甲臢晶體充分溶解。測(cè)定570 nm處吸收值D。通過軟件計(jì)算樣品對(duì)各腫瘤細(xì)胞的IC50。

(4) 對(duì)PTK的抑制活性的測(cè)定

采用ELISA法，用無K+的PBS酶稀釋反應(yīng)底物Poly(Glu,Tyr)4 ∶1至20 μg·mL-1， 125 μL/孔包被酶標(biāo)板，置37 ℃反應(yīng)12～16 h。棄去孔中液體，用T-PBS(含0.1%Tween-20的無K+的PBS， 200 μL/孔)洗板3次，每次5 min。于37 ℃干燥酶標(biāo)板1～2 h。每孔加入經(jīng)反應(yīng)緩沖液(50 mmol·mL-1HEPES pH 7.4, 50 mmol·mL-1MgCl2, 0.5 mmol·mL-1MnCl2, 0.2 mmol·mL-1Na3VO4, 1 mmol·mL-1DTT) 稀釋的ATP溶液49 μL，每孔中加入1 μL待測(cè)化合物，再加入50 μL用反應(yīng)緩沖液稀釋的c-Met, ALK, FGFR1, RET, EGFR, ErbB2激酶域重組蛋白啟動(dòng)反應(yīng)，每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)無ATP對(duì)照孔兩孔。置37 ℃搖床(100 r·min-1)反應(yīng)1 h。棄去孔中液體，用T-PBS洗板3次。加入抗體PY99稀釋液(抗體用含BSA 5 mg·mL-1T-PBS 1∶500稀釋)，100 μL/孔，于37 ℃搖床反應(yīng)0.5 h。棄去孔中液體，T-PBS洗板3次。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠二抗稀釋液(抗體用含BSA 5 mg·mL-1的T-PBS 1 ∶2 000稀釋)，100μL/孔，于37 ℃搖床反應(yīng)0.5 h。棄去孔中液體，T-PBS洗板3次。加入2 mg·mL-1的OPD顯色液100μL/孔[用含有0.03%H2O2的0.1 mmol·mL-1檸檬酸/檸檬酸鈉緩沖液(pH 5.4)稀釋]，于25 ℃避光反應(yīng)1～10 min。加入2 mol·mL-1H2SO450 μL/孔中止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀數(shù)，測(cè)定波長為490 nm處樣品的OD值。采用酶標(biāo)儀隨機(jī)附帶軟件以四參數(shù)法回歸求得IC50。抑制率/%=1-(OD化合物-OD無對(duì)照孔)/(OD陰性對(duì)照-OD無ATP對(duì)照)×100%。

2結(jié)果與討論

2.1合成

鈀催化的Suzuki反應(yīng)是構(gòu)建C-C鍵化合物的重要反應(yīng)，其具有底物范圍廣、反應(yīng)條件溫和以及良好的區(qū)域選擇性等優(yōu)點(diǎn)。借助Suzuki反應(yīng)，科學(xué)家們?nèi)斯ず铣闪怂６舅匾约熬弁愄烊划a(chǎn)物似蛇霉素[13]。本文先將1的5-位選擇性的溴代，再采用Suzuki反應(yīng)合成了6個(gè)新型的漢防己甲素衍生物(4a～4f)。其中，2的合成是本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。當(dāng)溴的滴加速度過快時(shí)，由于反應(yīng)過程放熱，使體系的溫度超過-15 ℃，產(chǎn)生較多雜質(zhì)。通過調(diào)整溴的滴加速度，保持反應(yīng)溫度低于-15 ℃，雜質(zhì)減少，產(chǎn)率達(dá)94%，適合大量制備。Suzuki反應(yīng)要求嚴(yán)格除氧，氧氣的存在會(huì)使產(chǎn)率降低，反應(yīng)全過程在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。后處理采用了制備薄層色譜法。由于4和2的極性相近，在實(shí)驗(yàn)過程中，進(jìn)行了二次展開，使得4與未反應(yīng)完的2的Rf值相差較大，得以分離。

2.2生物活性

4a～4f對(duì)HL60細(xì)胞和A549細(xì)胞的抑制活性見表1。由表1可見，4b, 4c和4e有一定的抑制活性。

4a～4f對(duì)蛋白質(zhì)酪氨酸激酶的抑制活性見表2。由表2可見， 4b和4c對(duì)受體酪氨酸激酶FGFR1的抑制活性大于50%，且活性較漢防己甲素有一定程度提高。

綜上所述，4b和4c不僅對(duì)HL60和A549細(xì)胞有一定抑制活性且對(duì)酪氨酸激酶FGFR1的選擇性較高?？梢詫?duì)其繼續(xù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，以期發(fā)現(xiàn)活性更好的化合物。

表1　4a～4f對(duì)HL60細(xì)胞和A549細(xì)胞的抑制活性

表2　4a～4f對(duì)PTKs的抑制率

3結(jié)論

合成了6個(gè)新型的漢防己甲素衍生物。初步抗腫瘤活性表明:4b, 4c和4e對(duì)HL60細(xì)胞和A549細(xì)胞有一定抑制活性。其中，4b和4c對(duì)受體酪氨酸激酶FGFR1的抑制活性較強(qiáng)，可作為潛在藥物進(jìn)一步修飾。

在本文的研究基礎(chǔ)上，其他同系列化合物的抗腫瘤活性、構(gòu)效關(guān)系、作用機(jī)制等的研究正在進(jìn)行中，以期獲得更多有效的抗腫瘤藥物。

參考文獻(xiàn)

[1]Cai X H, Wang S, Chen B A. Research advances on the pharmacological effects of tetrandrine[J].Chinese Journal of Natural Medicines,2011,9(6):473-480.

[2]Wu J M, Chen Y, Chen J C,etal. Tetrandrine induces apoptosis and growth suppression of colon cancer cells in mice[J].Cancer Letters,2010,287(2):187-195.

[3]Kuo P L, Lin C C. Tetrandrine-induced cell cycle arrest and apoptosis in Hep G2 cells[J].Life Sciences,2003,73(2):243-252.

[4]Xu W L, Shen H L, Ao Z F,etal. Combination of tetrandrine as a potential-reversing agent with daunorubicin,etoposide and cytarabine for the treatment of refractory and relapsed acute myelogenous leukemia[J].Leukemia Research,2006,30(4):407-413.

[5]唐海濤,陳國廣,方正,等. 多靶點(diǎn)受體酪氨酸激酶抑制劑的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志,2009,18(6):502-506.

[6]郭建軍,朱晶,趙永躍,等. 不可逆性酪氨酸激酶抑制劑的研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2015,31(6):749-754.

[7]張媛,程雨蘭,周金培,等. 以c-Met為腫瘤治療靶點(diǎn)的受體酪氨酸激酶抑制劑的研究進(jìn)展[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2015,46(1):16-27.

[8]Wiriyachitra P, Cava M P. Aromatic hydroxylation of some isoquinoline-type alkaloids[J].The Journal of Organic Chemistry,1977,42(13):2274-2277.

[9]Miyaura N, Yamada K, Suzuki A. A new stereospecific cross-coupling by the palladium-catalyzed reaction of 1-alkenylboranes with 1-alkenyl or 1-alkynyl halides[J].Tetrahedron Letters,1979,20(36):3437-3440.

[10]朱銘,楊超,余章彪,等. 芝麻酚與3-羥基氧化吲哚拼接衍生物的合成及其抗腫瘤活性[J].合成化學(xué),2014,22(4):444-447.

[11]樊睿,班樹榮,方蓮花,等. 新型查耳酮衍生物的合成及其初步抗蛋白酪氨酸激酶(PTKs)活性研究[J].中國藥物化學(xué)雜志,2011,21(3):178-182.

[12]朱麗萍, 左治鈞, 秦瑩穎. Suzuki反應(yīng)的國內(nèi)外研究進(jìn)展[J].地下水,2015,37(3):281-283.

Synthesis of Novel Tetrandrine Derivatives and Their Biological Activities

WEI Xiao1, YANG Yi-fang2, ZHAO Zheng-bao1*

(1.School of Pharmaceutical Science, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China；2. Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry, Shanghai, 200040, China)

Abstract：Six novel tetrandrine derivatives(4a～4f) were synthesized by Suzuki coupling reaction of boronic acid derivatives and 5-bromotetrandrine， which was obtained by bromination, using tetrandrine as the starting material. The structures were characterized by1H NMR, (13)C NMR and ESI-MS. The inhibition activities of 4a～4f against A549 and HL60 cancer cell lines were investigated by CCK-8 assay. The compounds which had better inhibition activities were secondary screened by MTT assay. The inhibitory activities of 4a～4f against PTKs were tested by ELISA. The results showed that 4b, 4c and 4e exhibited well inhibition activities against the two cancer cell lines. 4b and 4c showed better inhibition activities against FGFR1.

Keywords：Tetrandrine; synthesis; biological activity; PTKs

中圖分類號(hào)：O621.3; O625.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI：10.15952/j.cnki.cjsc.1005-1511.2016.03.15405

作者簡介：衛(wèi)笑(1990-)，女，漢族，山西臨汾人，碩士研究生，主要從事藥物合成研究。 E-mail: xiao_w2562@163.com通信聯(lián)系人： 趙正保，博士，教授， Tel． 0351-4690242, E-mail: zhengbao_z@163.com

基金項(xiàng)目：國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)(2009ZX09301-007)

收稿日期：2015-12-16