隱睪癥與生殖細胞腫瘤關(guān)聯(lián)性的病理研究

景詩學(xué) 吳波 羅添友

【摘要】目的：通過對隱睪患者檢測神經(jīng)細胞粘附分子（NCAM）及轉(zhuǎn)錄因子Oct-4蛋白，探討隱睪癥與生殖細胞腫瘤的關(guān)聯(lián)性。方法：搜集入住我院的隱睪癥的患者，采集隱睪睪丸標本，并進行睪丸活檢，檢測NCAM、Oct-4的表達；并分析兩個指標的表達與隱睪位置和年齡的相關(guān)性。結(jié)果：NCAM在人隱睪中的表達與年齡組、睪丸位置無相關(guān)性（P>0.05）。但是大于5歲后隱睪內(nèi)生精小管NCAM陽性表達有增高趨勢。不同年齡組NCAM表達存在顯著差異性（P<0.05），小于1.6歲年齡組與大于5歲年齡組間存在顯著差異性（P<0.017），余年齡組間無顯著差異性。NCAM在間質(zhì)內(nèi)陰性表達與睪丸位置分布無相關(guān)性（P>0.05）。Oct-4與NCAM生精小管內(nèi)同時陽性表達有4例，其年齡及睪丸位置分布無規(guī)律。結(jié)論：NCAM、Oct-4在人隱睪中存在病理性表達，NCAM和Oct-4可作為臨床預(yù)測隱睪患兒生殖潛能和睪丸癌變的篩查指標。

【關(guān)鍵詞】隱睪；神經(jīng)細胞粘附分子；轉(zhuǎn)錄因子Oct-4；不育；癌變

【中圖分類號】R679+. 22【文獻標志碼】A

隱睪是一種常見的男性不育疾病，發(fā)病率高達3%～4%，且其發(fā)病率有升高的趨勢＼[1，2＼]。臨床醫(yī)學(xué)研究已廣泛關(guān)注隱睪癥與癌變、不育的關(guān)系，有文獻報道隱睪癥引起了的生殖細胞腫瘤的概率是正常人的20～40倍＼[3＼]，引起約30%的睪丸腫瘤，是生殖細胞癌變的主要原因之一。特別是有人指出，即使將睪丸放入陰囊，也并不能改善隱睪患者的“不育、癌變”趨勢＼[4＼]。有研究認為， 生殖母細胞遷移障礙或者分化延遲，不能形成足夠的精原細胞池，是隱睪患者“不育”及“癌變”的最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，而Oct-4及NCAM的表達，在這關(guān)鍵環(huán)節(jié)起重要作用。本組資料采用免疫組化方法對隱睪患者的NCAM、Oct-4進行分析，探討其與患者睪丸位置、年齡之間的相關(guān)性。

1資料與方法

1.1臨床資料

本研究以2011年10月至2012年前來我院體檢的48例隱睪患者為研究對象，單側(cè)患者41例，雙側(cè)患者7例，手術(shù)年齡在0.5～13.1歲之間，平均年齡為3歲。經(jīng)倫理委員會批準，獲得患者家屬知情同意條件下，共搜集50個睪丸標本，在單側(cè)患者只取患側(cè)共41個，雙側(cè)患者只取一側(cè)共5個，取雙側(cè)者共2例4個。其中腹股溝型標本共21例，外環(huán)口型標本共14例，內(nèi)環(huán)口型標本共10例，皮下型標本共5例。

1.2組織病理學(xué)檢測

采用冰凍切片免疫組織化學(xué)方法進行睪丸組織病理檢測。手術(shù)切除睪丸組織，置冰凍切片機載物臺上，-22℃快速冷凍后，切片，將切片貼附于涂有APES膠的玻片上，用冷丙酮固定5s后晾干切片，再用Tris-HCL緩沖液洗10s，滴加細胞角蛋白即用型抗體于水平位置的玻璃片上，將組織覆蓋，將盛有玻璃片的試劑盒放入43℃冰箱內(nèi)孵育3min，用Tris-HCL緩沖液洗3次，每次10s，DAB顯色，顯微鏡下控制染色強度，用Mayers蘇木素復(fù)染20s，水洗后用梯度酒精脫水，二甲透明，封片，觀察結(jié)果。設(shè)備及試劑盒由我院病理科提供。

結(jié)果判定：（1）NCAM陽性：新生鼠睪丸NCAM陽性免疫組化染色片作陽性對照，染色陽性信號為棕黃色，位于細胞膜。（2）Oct-4陽性判斷：以成人精原細胞瘤陽性免疫組化染色片作陽性對照，染色陽性信號為棕黃色，位于細胞核。

1.3統(tǒng)計學(xué)

統(tǒng)計學(xué)軟件是SPSS17.0，不同組之間的差異比較采用方差分析，連續(xù)型變量兩組間比較采用t檢驗，不符合正態(tài)分布的采用秩和檢驗，率的比較采用Fisher確切概率法/χ2檢驗。P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。兩兩比較應(yīng)用Bonfrroni法，校正檢驗標準=0.05/檢驗次數(shù)。

2結(jié)果

2.150個睪丸中生精小管內(nèi)NCAM、Oct-4病理表達規(guī)律及NCAM在隱睪生精小管和睪丸間質(zhì)內(nèi)表達NCAM生精小管（-）、睪丸間質(zhì)（+）有21例，占42%；NCAM生精小管內(nèi)（+）、睪丸間質(zhì)（+）有13例，占26%；NCAM生精小管內(nèi)陽性表達（+）、睪丸間質(zhì)表達（-）有2例，占4%。NCAM在生精小管內(nèi)（-）、睪丸間質(zhì)（-）有14例，占28%。生精小管中NCAM（+）、Oct-4（-）有11例，占22%；生精小管中NCAM（+）、Oct-4（+）有4例，占8%；生精小管中NCAM（-）、Oct-4（+）有2例，占4%；總共17例，約34%在隱睪生精小管內(nèi)病理性表達。見表1、表2。

2.2NCAM生精小管內(nèi)表達、間質(zhì)內(nèi)陰性表達與年齡的相關(guān)性NCAM在人隱睪生精小管中的表達與年齡組無相關(guān)性（P>0.05）。但是大于5歲后隱睪內(nèi)生精小管NCAM陽性表達有增高趨勢。不同年齡組NCAM間質(zhì)內(nèi)陰性表達存在顯著差異性（P<0.05），小于1.6歲年齡組與大于5歲年齡組間存在顯著差異性（P<0.017），余年齡組間無顯著差異性。見表3。

2.3NCAM生精小管內(nèi)表達、間質(zhì)內(nèi)陰性表達與年齡的相關(guān)性Fisher確切概率法P=0.1415，P>0.05； NCAM間質(zhì)內(nèi)陰性表達與年齡的相關(guān)性Fisher確切概率法：P=0.0022，P<0.05。

2.4NCAM在人隱睪中的表達與睪丸位置無相關(guān)性（P>0.05）NCAM在間質(zhì)內(nèi)陰性表達與睪丸位置分布無相關(guān)性（P>0.05）。Oct-4與NCAM生精小管內(nèi)同時陽性表達有4例，其年齡及睪丸位置分布無規(guī)律。見表4。

3討論

NCAM是細胞粘附分子的一員， 啟動并維持生殖母細胞發(fā)育，是調(diào)控間質(zhì)細胞前驅(qū)體遷移及間質(zhì)細胞分化發(fā)育的重要因子之一＼[5，6＼]。在正常發(fā)育過程中NCAM在生精小管中的表達在出生3～4個月時消失，同時在睪丸間質(zhì)中開始出現(xiàn)，其異常表達，代表生殖細胞的生長分化異常，存在生殖潛能低下和/或癌變危險性＼[7，8＼]。本研究中，NCAM在人隱睪生精小管中的表達與年齡組無相關(guān)性（P>0.05），提示隱睪患者生殖細胞發(fā)生癌變的風(fēng)險較高，并不受年齡影響。但是NCAM在生精小管中的異常表達，大于5歲后有增高趨勢，提示可能隱睪患者生殖細胞發(fā)生癌變的風(fēng)險隨年齡增高而增加，需進一步增大樣本研究。不同年齡組NCAM間質(zhì)內(nèi)陰性表達存在顯著差異性（P<0.05），小于1.6歲年齡組與>5歲年齡組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.017），其它年齡組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。提示隱睪患者睪丸間質(zhì)細胞發(fā)生癌變的風(fēng)險較高，并隨著年齡有增高趨勢，提示可能隱睪患者睪丸間質(zhì)細胞發(fā)生癌變的風(fēng)險隨年齡增高，而增加，需進一步增大樣本研究。統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，本研究中NCAM生精小管內(nèi)、間質(zhì)內(nèi)陰性表達均與睪丸置分布無相關(guān)性，即睪丸位置與生殖細胞發(fā)生癌變無相關(guān)性＼[9，10＼]。

Oct-4是生殖母細胞特異性標志物，參與睪丸生殖細胞的分化及睪丸結(jié)構(gòu)的形成，與癌前病變相關(guān)＼[11，12＼]。Oct-4生精小管內(nèi)的表達陽性有6例，占12%，且與其年齡及睪丸位置分布無相關(guān)性，提示提示隱睪患者睪丸癌變的風(fēng)險與年齡、睪丸位置無關(guān)，提示可能隱睪患者癌變的風(fēng)險在睪丸下降之前已經(jīng)出現(xiàn)，但是本研究樣本量少＼[13＼]，需進一步增大樣本研究。

綜上，.NCAM和Oct-4可作為臨床預(yù)測隱睪患兒發(fā)生生殖細胞癌變的篩查指標，在50例標本中， NCAM、Oct-4正常表達的有19例，僅占38%，雖然其表達在隱睪患者中隨年齡有增高趨勢，統(tǒng)計分析其表達 NCAM、Oct-4在生精小管內(nèi)表達與其年齡及睪丸位置分布無相關(guān)性，提示可能隱睪患者癌變的風(fēng)險在睪丸下降之前已經(jīng)出現(xiàn)＼[14，15＼]。本研究受到時間及臨床標本來源限制，生殖細胞癌變預(yù)測指標和隱睪位置及單雙側(cè)的相關(guān)性，NCAM在間質(zhì)表達異常與生殖細胞癌變的影響，是否治療越晚生殖潛能損害越重等眾多問題，尚待進一步擴大標本量和遠期隨訪研究。

參考文獻

＼[1＼]傅冷西，李篤妙，張建星，等.隱睪癥中激素和雌雄激素受體的研究.中華小兒外科雜志，2005，26（4）：186-188.

＼[2＼]鄭偉，趙春麗.卵巢惡性生殖細胞腫瘤術(shù)后化療對卵巢功能的影響研究.中國性科學(xué)，2014，23（6）：38-41.

＼[3＼]林俊.小兒隱睪癥518例手術(shù)體會.中華男科學(xué)雜志，2007，13（11）：1041-1042.

＼[4＼]金今福.手術(shù)手套在小兒隱睪癥、鞘膜積液術(shù)后護理中的巧用.護士進修雜志，2012，27（15）：1357.

＼[5＼]楊山，汪超軍.睪丸生殖細胞腫瘤患者行睪丸部分切除術(shù)的1、3、5年生存率分析.中國性科學(xué)，2014，23（4）：52-54.

＼[6＼]劉祥瑞，李年令.隱睪癥的超聲診斷（附48例分析）.中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù)，2002，18（5）：478-479.

＼[7＼]梁志祥，蔣洪昌，黃美松，等.118例隱睪診治體會.中國性科學(xué)，2009，18（12）：26-27.

＼[8＼]葉輝，葉蓁蓁，馬繼東，等.腹腔鏡在分期Fowler-Stephens睪丸固定術(shù)中的應(yīng)用.中華小兒外科雜志，2002，23（6）：505-507.

＼[9＼]Kraggerud SM， Hoei-Hansen CE， Alagaratnam S， et al. Molecular characteristics of malignant ovarian germ cell tumors and comparison with testicular counterparts： Implications for pathogenesis. Endocrine Reviews. 2013，34（3）：339-376..

＼[10＼]Musselman JRB， Jurek AM， Johnson KJ， et al. Maternal dietary patterns during early pregnancy and the odds of childhood germ cell tumors： A childrens oncology group study. American Journal of Epidemiology. 2011，173（3）：282-291.

＼[11＼]劉新福，李歡誠，陳春延，等.隱睪癥睪丸引帶異常的臨床意義.中華泌尿外科雜志，2006，27（4）：275-277.

＼[12＼]Banks K， Tuazon E， Berhane K， et al. Cryptorchidism and testicular germ cell tumors： comprehensive meta-analysis reveals that association between these conditions diminished over time and is modified by clinical characteristics.Frontiers in Endocrinology. 2012（3）：182.

＼[13＼]宋非無，李篤妙，許雅麗，等.單側(cè)隱睪癥鞘膜及引帶中INSL3和LGR8的表達和意義.中華小兒外科雜志，2013，34（8）：599-602.

＼[14＼]李世文，鄭新民，鄭航，等.一氧化氮、總抗氧化能力對大鼠隱睪生殖細胞凋亡的影響.中華男科學(xué)，2003，9（3）：175-177.

＼[15＼]應(yīng)衛(wèi)，李玉艷，等.腫瘤標志物在卵巢腫瘤的診斷及良、惡性鑒別中的作用分析.中國性科學(xué)，2014，23（1）：21-24.

（收稿日期：2015-02-02）