HPLC法測定胃痛寧片中甘草酸的含量

胡　蓮（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科　瀘州　646000）

?

HPLC法測定胃痛寧片中甘草酸的含量

胡蓮（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科瀘州646000）

摘要：目的：建立高效液相色譜法測定胃痛寧片中甘草酸的含量。方法：采用Discovery C18柱（5μm，4.6mm×250mm），流動(dòng)相：乙醇－0.2mol·L-1醋酸銨溶液－冰醋酸（42∶56∶2），檢測波長：254nm，流速：0.5mL·min-1，柱溫：45℃。結(jié)果：甘草酸在0.198～0.892μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r＝0.9999，平均回收率為99.04%，RSD為1.5%。結(jié)論：該方法操作安全，簡便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：甘草酸高效液相色譜法胃痛寧片

胃痛寧片是由甘草干浸膏、蒲公英提取物、氫氧化鋁等6味藥組成的中西藥復(fù)方制劑，具有清熱燥濕、理氣和胃、制酸止痛之效，用于濕熱互結(jié)所致胃、十二指腸潰瘍、胃炎，癥見胃脘痙痛、胃酸過多、脘悶噯氣、泛酸嘈雜、食欲不振、大便秘結(jié)、小便短赤。衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]中未收載含量測定方法，為有效控制藥品質(zhì)量，本文以甘草的有效成分甘草酸為指標(biāo)，采用高效液相色譜法，流動(dòng)相以乙醇作洗脫劑，建立了含量測定方法。

1　儀器與試藥

高效液相色譜儀：HP-1100VWD系統(tǒng)，HP化學(xué)工作站；試劑：乙醇為優(yōu)級純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。甘草酸銨對照品（110731-201116，以甘草酸計(jì)含量為91.2%）中國藥品生物制品檢定所，胃痛寧片（市售）。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱：Discovery C18（5μm，4.6mm×250mm），流動(dòng)相：乙醇－0.2mol·L-1醋酸銨溶液－冰醋酸（42∶56∶2），檢測波長：254nm，流速：0.5mL·min-1，柱溫：45℃。理論塔板數(shù)以甘草酸計(jì)算不低于3000。

2.2空白試驗(yàn)：按處方量制備缺甘草干浸膏的陰性對照樣品，照樣品測定方法項(xiàng)下操作，測定比較了樣品、甘草酸對照品、陰性對照樣品，結(jié)果在陰性對照樣品色譜圖中甘草酸色譜峰相應(yīng)的保留時(shí)間處無干擾，樣品中甘草酸與其他成分能較好分離，分離度大于1.5，見圖1。

2.3線性關(guān)系：精密稱取甘草酸銨對照品11.32mg，置25mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取3mL，加流動(dòng)相稀釋至25mL，搖勻，作為對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液4.0、6.0、10.0、14.0、18.0μL進(jìn)樣，以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，甘草酸的進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=14.55090X－26.84902，r＝0.9999。結(jié)果表明甘草酸在0.198～0.892μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.4精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定對照品溶液峰面積，計(jì)算RSD為0.36%（n＝6）。

2.5重復(fù)性和穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批樣品（20111013）6份，按樣品測定項(xiàng)下所述方法測定，結(jié)果平均含量為2.85mg·片-1，RSD 為1.1%（n＝6）。取其中一份供試品溶液在室溫下放置0、2、4、8、12、24h進(jìn)行測定，結(jié)果表明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.85% （n＝6）。

2.6回收率試驗(yàn)：精密稱取甘草酸銨對照品49.65mg，置25mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密稱取已知含量的同一批樣品（20111013）0.5g，置具塞錐形瓶中，共6份，分別精密加入上述對照品貯備液2、3、4mL（各2份），按樣品測定項(xiàng)下所述方法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

Table 1 Recoveries of G lycyrrhizic Acid added to sam ple

2.7樣品測定：取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取1.0g，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇200mL，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，以上述色譜條件分析測定，分別測定3批樣品，以外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算甘草酸含量，結(jié)果見表2。

Table 2 Results of sam ple determ ination（n=3）

3　討論

3.1甘草酸對照品分別用甲醇和流動(dòng)相作溶劑，在本色譜條件下，用流動(dòng)相作溶劑其峰型、理論塔板數(shù)明顯優(yōu)于甲醇作溶劑。甘草酸在藥材中常以鉀、鈣鹽形式存在[2]，幾乎不溶于無水乙醇，但易溶于熱的稀乙醇，故樣品采用稀乙醇作提取溶劑，經(jīng)試驗(yàn)，稀乙醇回流提取1h可將樣品中的甘草酸提取完全。

3.2參考文獻(xiàn)[3，4]，在選用甲醇－醋酸銨溶液－冰醋酸、乙腈－冰醋酸作流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，甘草酸在較低流速下才能與其他成分較好分離，柱壓較小。故考慮在低流速下以乙醇代替甲醇、乙腈作洗脫劑，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，以乙醇－0.2mol·L-1醋酸銨溶液－冰醋酸（42∶56∶2）作流動(dòng)相時(shí)，只需適當(dāng)提高柱溫，也能獲得較好分離，色譜峰形對稱，柱壓適中（約106bar），測得的含量與甲醇系統(tǒng)下測定的含量一致。甘草酸與相鄰雜質(zhì)峰的分離度在乙醇系統(tǒng)中約高于甲醇系統(tǒng)。

3.3本法用于胃痛寧片中甘草酸的含量測定，結(jié)果準(zhǔn)確，操作安全，簡便、快速，能有效控制該產(chǎn)品質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)，中藥成方制劑[S].第十七冊，1998：198.

[2]楊云，馮衛(wèi)生.中藥化學(xué)成分提取分離手冊[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，1998：95.

[3]中華人民共和國藥典（一部）[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005：59.

[4]付春梅，李章萬，劉三康，等.乙醇-水反相高效液相色譜法在中藥及中成藥分析中的應(yīng)用[J].藥物分析，2000，20（1）：37-41.

Determ ination of G lycyrrhizic Acid in Weitongning Tablets by HPLC

Hu Lian（Sichuan，Luzhou 646000，China）

Abstract：Objective:An assay method was developed for determination of glycyrrhizic acid in Weitongling Tablets by HPLC.Methods: The Chromatographic conditions were as follows:column Discovery C18（5μm，4.6mm×250mm）;the mobile phase ethanol－0.2mol·L-1ammonium acetate solution－acetic acid glacial（42∶56∶2）and detection at 254nm.The flow rate was 0.5mL·min-1.Column temperature was at 45℃.Results:The liner range of glycyrrhizic acid was 0.198～0.892μg，r＝0.999 9.The average recovery was 99.04%，the RSD was 1.5%.Conclusion:The method was security，simple.The results were accurate and reliable.The method can be used for quality control of theWeitongling Tablets.

Key words:glycyrrhizic acid HPLC Weitongling Tablets

中圖分類號：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1672-8351（2016）01-0001-02