骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在神經(jīng)修復(fù)中的研究進(jìn)展

馮燁軍，陳明

·綜述·

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在神經(jīng)修復(fù)中的研究進(jìn)展

馮燁軍，陳明

近年來，干細(xì)胞移植技術(shù)治療神經(jīng)損傷已成為神經(jīng)修復(fù)研究的熱點(diǎn)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）以其擴(kuò)增快、多向分化潛能、再生能力強(qiáng)、排斥反應(yīng)小、可誘導(dǎo)分化為類雪旺細(xì)胞等特點(diǎn)被用于治療臨床神經(jīng)損傷的研究。本文就BM-MSCs的生物學(xué)特點(diǎn)、誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞的方法及其在神經(jīng)修復(fù)中的應(yīng)用作一綜述。

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；誘導(dǎo)分化；神經(jīng)修復(fù)

1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)

1.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的來源及分類

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs）最早由德國病理學(xué)家Cohnheim于1867年提出，并于1968年被Friedenstein等[1]首次發(fā)現(xiàn)為存在于骨髓中的非造血干細(xì)胞。BM-MSCs在骨髓中含量很低，大約只占骨髓有核細(xì)胞的0.001%～0.010%。BM-MSCs有兩個(gè)亞群，一種是成纖維樣的細(xì)胞，另一種是呈小圓形的細(xì)胞，又稱為快速自我更新細(xì)胞（rapidly self-renewing cells，RS），這兩種細(xì)胞的主要區(qū)別在于其表面標(biāo)記物有差異[2]。90%以上的BM-MSCs都處于G0/ G1期，屬于中胚層的早期細(xì)胞。只要給予合適的培養(yǎng)條件，BM-MSCs便可分化為涵蓋中胚層、內(nèi)胚層及外胚層的細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞、肝細(xì)胞、成骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肺細(xì)胞等，因此BM-MSCs有強(qiáng)大的分化增殖能力。

1.2 BM-MSCs的表面標(biāo)記物及免疫特性

BM-MSCs有多種表面標(biāo)記物，包括生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子及對(duì)應(yīng)受體、黏附分子、整合素等。迄今為止，研究者們尚未發(fā)現(xiàn)具有高度特異性的BMMSCs表面標(biāo)記物。目前被大多數(shù)人公認(rèn)的表面標(biāo)記物有CD105、CD106、CD29、CD166、CD71、CD44等；BM-MSCs作為一類非造血干細(xì)胞，不表達(dá)如CD34、CD14、CD45、CD11b等造血細(xì)胞的表面標(biāo)記物。BM-MSCs免疫排斥較弱，其機(jī)制尚不明確。Ramasamy等[3]認(rèn)為其原因是BM-MSCs抑制CD4+T、CD8+T細(xì)胞的增殖；Wang等[4]的研究指出BMMSCs較弱的免疫排斥反應(yīng)可能是通過抑制C3活化，從而降低機(jī)體的免疫排斥反應(yīng)。BM-MSCs的這一特性在臨床上具有意義非凡的應(yīng)用價(jià)值，也為治療神經(jīng)損傷提供了新的方向。

2 BM-MSCs向神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)分化

2.1 BM-MSCs體內(nèi)誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞

1999 年Kopen等[5]將標(biāo)記的大鼠BM-MSCs注射入胎鼠的側(cè)腦室，12 d后處死，分別在大鼠前腦、小腦、紋狀體、海馬的分子層中找到帶有標(biāo)記的神經(jīng)細(xì)胞，并表達(dá)GFAP、NF-M等蛋白，由此認(rèn)為BMMSCs能在體內(nèi)分化為神經(jīng)細(xì)胞，并與胚胎神經(jīng)的發(fā)生、神經(jīng)干細(xì)胞的成熟、遷移方式相同。2001年，Park等[6]將轉(zhuǎn)入膠質(zhì)細(xì)胞來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子（glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF）的大鼠MSCs植入健康雌鼠體內(nèi)，培養(yǎng)8周后建立MPTP帕金森病模型，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)入GDNF的大鼠MSCs對(duì)黑質(zhì)神經(jīng)元有明顯的保護(hù)作用。近幾年來，Goldmacher等[7]將大鼠BM-MSCs注入大腦中動(dòng)脈梗死（middle cerebral artery occlusion，MCAO）的大鼠模型后，發(fā)現(xiàn)BM-MSCs能分化為星型膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞，并能明顯促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)。

然而，體內(nèi)誘導(dǎo)BM-MSCs分化存在較多缺點(diǎn)。由于生長(zhǎng)環(huán)境的不穩(wěn)定性，多數(shù)BM-MSCs在分化過程中不可避免地發(fā)生死亡或凋亡，少數(shù)能分化為神經(jīng)細(xì)胞的BM-MSCs也并不都具有電生理功能和分泌神經(jīng)遞質(zhì)。Xiao等[8]利用佛手柑內(nèi)酯（bergapten，BP）分別通過體內(nèi)外途徑誘導(dǎo)分化BMMSCs，觀察其對(duì)雙側(cè)卵巢切除大鼠骨質(zhì)疏松模型的作用。體外組分為0.1、1、10 μmol/L濃度的BP進(jìn)行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)分化培養(yǎng)2周后移植入大鼠體內(nèi)；體內(nèi)組的BP劑量為20 mg/(kg·d)，喂養(yǎng)3月。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在體外組中BP能促進(jìn)BM-MSCs內(nèi)ALP的表達(dá)，且ALP濃度隨BP濃度升高而升高。成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子（runt-related transcription factor 2）及骨鈣素（osteocalcin）在體內(nèi)組及體外組中均升高，但只在體外組中通過免疫組化和免疫熒光方法檢測(cè)到成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子（osterix）及膠原蛋白Iα1?？梢?，BP的體外誘導(dǎo)途徑能比體內(nèi)誘導(dǎo)分化出細(xì)胞因子更全面的成骨細(xì)胞，因而在臨床應(yīng)用更傾向通過體外途徑進(jìn)行BM-MSCs的誘導(dǎo)分化。

2.2 BM-MSCs體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元細(xì)胞

由于BM-MSCs體內(nèi)誘導(dǎo)分化的局限性，體外誘導(dǎo)分化成為研究熱點(diǎn)。2000年Woodbury等[9]利用β-巰基乙醇（β-mercaptoethanol，BME）、二甲基亞砜、丁羥茴香醚、叔丁基對(duì)甲氧酚等分別誘導(dǎo)BMMSCs向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化，首次報(bào)道BM-MSCs能通過體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元細(xì)胞。但此方法中高濃度的BME具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，一些持反對(duì)意見的學(xué)者認(rèn)為此方法觀察到的神經(jīng)樣細(xì)胞是由于化學(xué)毒性使細(xì)胞變形的結(jié)果。此外，該方法并不能很好地用于臨床治療。目前主要的體外誘導(dǎo)方法有細(xì)胞因子誘導(dǎo)、共同培養(yǎng)誘導(dǎo)、中藥參與的誘導(dǎo)、提高細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）誘導(dǎo)等。

2.2.1 細(xì)胞因子誘導(dǎo) BM-MSCs的表面存在多種細(xì)胞因子及對(duì)應(yīng)受體，因此BM-MSCs的增殖分化受到多種細(xì)胞因子的調(diào)控。目前已有多種細(xì)胞因子被證實(shí)能誘導(dǎo)BM-MSCs分化為神經(jīng)細(xì)胞，如堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、表皮生長(zhǎng)因子（epidermal growth factor，EGF）、維甲酸（retinoic acid，RA）、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）等。

bFGF是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和雪旺氏細(xì)胞的促有絲分裂原，能延長(zhǎng)培養(yǎng)液中多種神經(jīng)元的存活時(shí)間，并刺激乙酰膽堿?；傅暮铣杉巴黄鹕L(zhǎng)，同時(shí)還可促進(jìn)外周神經(jīng)纖維再生。EGF是一種非特異性有絲分裂促進(jìn)因子，可誘導(dǎo)BM-MSCs向星型膠質(zhì)細(xì)胞分化，還可促進(jìn)軸突延長(zhǎng)。研究者們通常聯(lián)合使用bFGF與EGF誘導(dǎo)BM-BMCs分化。Huat等[10]發(fā)現(xiàn)bFGF聯(lián)合EGF能誘導(dǎo)BM-MSCs分化為神經(jīng)祖細(xì)胞樣細(xì)胞（neutral progenitor-like cells，NPCs），且檢測(cè)到分化細(xì)胞質(zhì)mRNA的表達(dá)遠(yuǎn)高于單純BM-MSCs分化的對(duì)照組。

RA是維生素A的一種衍生物，主要能促進(jìn)星型膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元合成，還能增加神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量。RA的誘導(dǎo)作用與濃度相關(guān)，低濃度的RA主要誘導(dǎo)細(xì)胞向神經(jīng)前體細(xì)胞分化，高濃度的RA能促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞分化為成熟的神經(jīng)細(xì)胞。目前研究者多采用全反式維甲酸（all-trans-retinoic acid，ATRA）聯(lián)合其他細(xì)胞因子進(jìn)行BM-MSCs的誘導(dǎo)分化。Bi等[11]將BM-MSCs加入不同濃度的ATRA（0.01～100 μmol/L）24 h后置入改良的神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基，發(fā)現(xiàn)1 μmol/L ATRA能明顯提高神經(jīng)元的分化率及存活率。

BDNF是一種具有營養(yǎng)神經(jīng)作用的蛋白質(zhì)，BDNF與其受體在神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在，主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)。Liu等[12]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)入BNDF的BM-MSCs治療豚鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（cochlear spiral ganglion cells）損傷比單純BM-MSCs效果更好。

2.2.2 共同培養(yǎng)誘導(dǎo) BM-MSCs與某些神經(jīng)細(xì)胞在體外共同培養(yǎng)時(shí)，在這些神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)作用下，BM-MSCs會(huì)分化為特定的神經(jīng)細(xì)胞，這一方法可認(rèn)為是體內(nèi)誘導(dǎo)方法的體外化。其主要機(jī)制可能是神經(jīng)細(xì)胞分泌的各種細(xì)胞因子、神經(jīng)遞質(zhì)等參與BM-MSCs信息處理過程，調(diào)控BM-MSCs分化成神經(jīng)細(xì)胞。Zurita等[13]將大鼠坐骨神經(jīng)來源的雪旺細(xì)胞與大鼠BM-MSCs共同培養(yǎng)（相互不接觸）后發(fā)現(xiàn)，4 h后（10±2.1）%的BM-MSCs表達(dá)巢蛋白（Nestin），其形態(tài)類似于成纖維細(xì)胞；8 h后更多的細(xì)胞表達(dá)巢蛋白，但不表達(dá)其他神經(jīng)標(biāo)記物如NF-200、GFAP、β-Ⅲ-微管蛋白等，細(xì)胞形態(tài)開始發(fā)生變化；培養(yǎng)1～2周后，多數(shù)細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，神經(jīng)標(biāo)志物如NF-200、GFAP、β-Ⅲ-微管蛋白的數(shù)量明顯增多，而巢蛋白逐漸減少。這說明BM-MSCs的分化受到可溶性因子的調(diào)控，并非與神經(jīng)細(xì)胞融合。

2.2.3 中藥參與的誘導(dǎo) 中藥作為我國特有的藥物，在我國許多醫(yī)學(xué)研究方面都有獨(dú)到之處。我國許多研究者成功利用中藥誘導(dǎo)BM-MSCs分化為神經(jīng)細(xì)胞。近年來，聶蕾等[14]應(yīng)用當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物聯(lián)合β-巰基乙醇誘導(dǎo)小鼠BM-MSCs分化，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合誘導(dǎo)能有效提高BM-MSCs分化率，且分化細(xì)胞有較強(qiáng)的增殖能力。李玉美等[15]利用bFGF預(yù)誘導(dǎo)后的BM-MSCs加入丹參酮ⅡA繼續(xù)培養(yǎng)，在培養(yǎng)得到的神經(jīng)樣細(xì)胞中檢測(cè)到神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）陽性率為（75.60± 2.31）%，巢蛋白呈一過性表達(dá)并隨培養(yǎng)時(shí)間遞減，不表達(dá)神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白，說明此聯(lián)合誘導(dǎo)方案能定向誘導(dǎo)神經(jīng)元樣細(xì)胞分化。鄧秀君[16]發(fā)現(xiàn)中藥蝮龍抗栓丸聯(lián)合BM-MSCs移植在治療大鼠MCAO中能顯著提高大鼠腦內(nèi)GDNF的水平。

2.2.4 提高細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度的誘導(dǎo) cAMP是細(xì)胞內(nèi)參與調(diào)節(jié)功能的第二物質(zhì)信使。Deng等[17]的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，提高BM-MSCs細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度，可誘導(dǎo)BM-MSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞并檢測(cè)到NSE等標(biāo)記物表達(dá)水平上調(diào)。研究者們認(rèn)為其機(jī)制可能與cAMP濃度升高直接激活PKA通路有關(guān)。也有研究者認(rèn)為，此類方法對(duì)于BM-MSCs向成熟神經(jīng)細(xì)胞分化作用有限，僅能誘導(dǎo)BM-MSCs分化為早期的神經(jīng)元樣細(xì)胞。

3 BM-MSCs在神經(jīng)修復(fù)中的應(yīng)用

神經(jīng)損傷主要分為中樞神經(jīng)損傷及外周神經(jīng)損傷。BMMSCs移植治療神經(jīng)損傷是研究的熱點(diǎn)。隨著研究的深入，越來越多的新方法不斷涌現(xiàn)。

3.1 單一BM-MSCs移植

單一的BM-MSCs移植主要應(yīng)用于非節(jié)段性神經(jīng)損傷的治療，如帕金森病（Parkinson’s disease，PD）、阿爾茲海默病（Alzheimer’s disease，AD）、亨廷頓氏?。℉untington’s disease，HD）、腦缺血等。Hoban等[18]將高表達(dá)GDNF的BM-MSCs（GDNF-MSCs）體外培養(yǎng)后注入SD大鼠的左側(cè)紋狀體，1 d后將內(nèi)毒素注入大鼠左側(cè)大腦黑質(zhì)中構(gòu)建SD大鼠PD模型，移植21 d后發(fā)現(xiàn)GDNF-MSCs對(duì)局部神經(jīng)有保護(hù)作用。趙慧新等[19]通過移植BDNF轉(zhuǎn)染的BM-MSCs治療AD大鼠，發(fā)現(xiàn)其對(duì)AD大鼠的認(rèn)知有改善作用，且能促進(jìn)海馬區(qū)NMDARI的表達(dá)。Sánchez等[20]將BM-MSCs移植入喹啉酸紋狀體損傷SD大鼠模型中，檢測(cè)到其紋狀體及大腦皮質(zhì)內(nèi)BDNF明顯上升，并認(rèn)為BM-MSCs移植是一種有可能治愈HD的方法。YE等[21]發(fā)現(xiàn)BM-MSCs植入MCAO模型大鼠中后能促進(jìn)受損區(qū)域腦白質(zhì)的再生和增殖。Jo等[22]將BM-MSCs移植入嗅上皮（olfactory epithelium，OE）缺損模型的大鼠，4周后發(fā)現(xiàn)缺損的OE恢復(fù)到正常水平，且嗅覺標(biāo)志蛋白（olfaction marker protein，OMP）較對(duì)照組明顯上升，NGF及BDNF的表達(dá)略有下降。劉雙鳳等[23]通過比較尾靜脈注射PBS與BM-MSCs治療MCAO新生SD大鼠發(fā)現(xiàn)，后者可改善局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能，可能與移植后腦組織中TNF-α和IL-10的表達(dá)有關(guān)。

3.2 BM-MSCs復(fù)合組織工程神經(jīng)移植

自體神經(jīng)移植術(shù)較早應(yīng)用于節(jié)段性神經(jīng)缺損的治療，但由于其存在供體神經(jīng)來源有限、供體區(qū)永久性神經(jīng)功能障礙等缺點(diǎn)，因此構(gòu)建組織工程神經(jīng)替代自體神經(jīng)已成為目前研究的趨勢(shì)。組織工程神經(jīng)的三要素是：支架、種子細(xì)胞和因子。構(gòu)建組織工程神經(jīng)的生物材料支架即人工神經(jīng)移植物，種子細(xì)胞主要是雪旺細(xì)胞（Schwann cell，SC）或具有類似功能的細(xì)胞，使用較多的因子是神經(jīng)營養(yǎng)因子。May等[24]采用種植大鼠坐骨神經(jīng)SC的硅膠管作為陰莖海綿體神經(jīng)（cavernous nerve，CN）5 mm缺損的修復(fù)供體，3月后實(shí)驗(yàn)組大鼠90%有勃起反應(yīng)。但由于硅膠管不可降解，長(zhǎng)期留存于局部組織可導(dǎo)致異物反應(yīng)、神經(jīng)生長(zhǎng)障礙或壓迫再生組織等，臨床難以應(yīng)用，研究者們開始探索可降解的人工神經(jīng)支架。Hisasue等[25]應(yīng)用多聚L-乳酸和E-己內(nèi)酯的共聚物結(jié)合膠原海綿的人工支架對(duì)CN 4 mm缺損進(jìn)行修復(fù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該人工支架較單純生物降解物更有利于勃起功能的恢復(fù)。Connolly等[26]采用同種異體的大鼠去細(xì)胞神經(jīng)支架（acellular nerve scaffold，ANS）修復(fù)CN 5 mm缺損，術(shù)后12周55%實(shí)驗(yàn)組大鼠CN功能完全恢復(fù)，且實(shí)驗(yàn)組CN內(nèi)觀察到再生的神經(jīng)纖維。近年來，Chen等[27]應(yīng)用去細(xì)胞脊髓支架復(fù)合5-溴脫氧尿苷標(biāo)記的BM-MSCs移植入大鼠脊髓損傷（spinal cord-injured，SCI）模型中，8周后免疫熒光檢測(cè)到部分BM-MSCs分化為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，復(fù)合BM-MSCs的脊髓支架不僅能抑制細(xì)胞凋亡，而且還能促進(jìn)脊髓功能恢復(fù)。Zhou等[28]運(yùn)用BM-MSCs與SC共同復(fù)合去細(xì)胞神經(jīng)支架治療大鼠10 mm坐骨神經(jīng)缺損，16周后發(fā)現(xiàn)BM-MSCs與SC聯(lián)合組療效優(yōu)于單一BM-MSCs或SC移植組，并且復(fù)合組的療效與自體神經(jīng)移植組相當(dāng)。Onuma-Ukegawa等[29]研究發(fā)現(xiàn)，蜂窩膠原蛋白海綿（honeycomb collagen sponge，HC）支架復(fù)合BM-MSCs能更好地促進(jìn)大鼠脊神經(jīng)節(jié)（dorsal root ganglion，DRG）的體外再生，3 mm的HC支架復(fù)合BM-MSCs移植治療SCI模型大鼠能使運(yùn)動(dòng)和感覺功能恢復(fù)更好。

4 存在的問題及研究前景

BM-MSCs在神經(jīng)修復(fù)方面的應(yīng)用前景已得到廣大研究者的肯定，但仍存在一些問題：如BM-MSCs在體內(nèi)不同微環(huán)境中分化成熟的機(jī)制尚不明確；BM-MSCs有無轉(zhuǎn)化為惡性細(xì)胞的可能；BM-MSCs體內(nèi)誘導(dǎo)是否存在更加高效可行的方法，BMMSCs復(fù)合組織工程神經(jīng)治療長(zhǎng)距離周圍神經(jīng)損傷的研究仍不成熟；在一些疾病的最佳治療時(shí)間內(nèi)如何快速制備BM-MSCs從而提高療效等。BM-MSCs為一些難治性的神經(jīng)系統(tǒng)疾病及不可逆性神經(jīng)損傷提供了新的治療方向，隨著研究的深入，BM-MSCs一定能在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療中發(fā)揮巨大作用。

[1]Friedenstein AJ,Gorskaja JF,Kulagina NN.Fibroblast precursors in normal and irradiated mouse hematopoietic organs[J].Exp Hematol,1976, 4：267-274.

[2]Zhou Z,Jiang EL,Wang M,et al.Comparative study on various subpopulations in mesenchymal stem cells of adult bone marrow[J].Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi,2005,13：54-58.

[3]Ramasamy R,Tong CK,Seow HF,et al.The immunosuppressive effects of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells target T cell proliferation but not its effector function[J].Cell Immunol,2008,251：131-136.

[4]Wang JW,Liu YB,Xu B,et al.The study on immunomodulation of donor mesenchymal stem cells on discordant liver xenotransplantation[J]. Zhonghua Wai Ke Za Zhi,2005,43：1254-1258.

[5]Kopen GC,Prockop DJ and Phinney DG.Marrow stromal cells migrate throughout forebrain and cerebellum,and they differentiate into astrocytes after injection into neonatal mouse brains[J].Proc Natl Acad Sci U S A,1999,96：10711-10716.

[6]Park KW,Eglitis MA and Mouradian MM.Protection of nigral neurons by GDNF-engineered marrow cell transplantation[J].Neurosci Res, 2001,40：315-323.

[7]Goldmacher GV,Nasser R,Lee DY,et al.Tracking transplanted bone marrow stem cells and their effects in the rat MCAO stroke model[J]. PLoS One,2013,8：e60049.

[8]Bergapten promotes bone marrow stromal cell differentiation into osteoblasts in vitro and in vivo[J].Mol Cell Biochem,2015,409：113-122.

[9]Woodbury D,Schwarz EJ,Prockop DJ,et al.Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons[J].J Neurosci Res, 2000,61：364-370.

[10]Huat TJ,Khan AA,Abdullah JM,et al.MicroRNA Expression Profile of Neural Progenitor-Like Cells Derived from Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells under the Influence of IGF-1,bFGF and EGF[J].Int J Mol Sci,2015,16：9693-9718.

[11]Bi Y,Gong M,Zhang X,et al.Pre-activation of retinoid signaling facilitates neuronal differentiation of mesenchymal stem cells[J].Dev Growth Differ,2010,52：419-431.

[12]Liu QX,Chen GG,He XB,et al.Effect of brain-derived neurotrophic factor gene transfected bone-marrow mesenchymal stem cells on damaged cochlear spiral ganglion cells of guinea pigs[J].Zhonghua Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi,2010,45：1029-1034.

[13]Zurita M,Vaquero J,Oya S,et al.Neurotrophic Schwann-cell factors induce neural differentiation of bone marrow stromal cells[J].Neuroreport, 2007,18：1713-1717.

[14]聶蕾,殷祎隆,劉永琦,等.當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2013,33：632-637.

[15]李玉美,余德立,劉來兵,等.堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子預(yù)誘導(dǎo)后加入丹參酮ⅡA體外定向培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化[J].中國組織工程研究,2012,16：1884-1888.

[16]鄧秀君.中藥聯(lián)合干細(xì)胞移植對(duì)缺血再灌注大鼠腦內(nèi)GDNF的影響[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2015,8：262-262,263.

[17]Deng J,Petersen BE,Steindler DA,et al.Mesenchymal stem cells spontaneously express neural proteins in culture and are neurogenic after transplantation[J].Stem Cells,2006,24：1054-1064.

[18]Hoban DB,Howard L and Dowd E.GDNF-secreting mesenchymal stem cells provide localized neuroprotection in an inflammation-driven rat model of Parkinson's disease[J].Neuroscience,2015,303：402-411.

[19]趙慧新,趙鋼勇,張平.移植腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)AD大鼠的影響[J].神經(jīng)損傷與功能重建,2014,10：195-198.

[20]Serrano Sanchez T,Alberti Amador E,Lorigados Pedre L,et al. BDNF in quinolinic acid lesioned rats after bone marrow cells transplant [J].Neurosci Lett,2014,559：147-151.

[21]Ye X,Yan T,Chopp M,et al.Combination BMSC and Niaspan treatment of stroke enhances white matter remodeling and synaptic protein expression in diabetic rats[J].Int J Mol Sci,2013,14：22221-22232.

[22]Jo H,Jung M,Seo DJ,et al.The effect of rat bone marrow derived mesenchymal stem cells transplantation for restoration of olfactory disorder [J].Biochem Biophys Res Commun,2015,467：395-399.

[23]劉雙鳳,顏燦群,占克斌.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)功能及IL-10、TNF-α水平的影響[J].神經(jīng)損傷與功能重建,2015,10：107-109.

[24]May F,Weidner N,Matiasek K,et al.Schwann cell seeded guidance tubes restore erectile function after ablation of cavernous nerves in rats[J]. J Urol,2004,172：374-377.

[25]Hisasue S,Kato R,Sato Y,et al.Cavernous nerve reconstruction with a biodegradable conduit graft and collagen sponge in the rat[J].J Urol, 2005,173：286-291.

[26]Connolly SS,Yoo JJ,Abouheba M,et al.Cavernous nerve regeneration using acellular nerve grafts[J].World J Urol,2008,26：333-339.

[27]Chen J,Zhang Z,Liu J,et al.Acellular spinal cord scaffold seeded with bone marrow stromal cells protects tissue and promotes functional recovery in spinal cord-injured rats[J].J Neurosci Res,2014,92：307-317.

[28]Zhou LN,Zhang JW,Liu XL,et al.Co-Graft of Bone Marrow Stromal Cells and Schwann Cells Into Acellular Nerve Scaffold for Sciatic Nerve Regeneration in Rats[J].J Oral Maxillofac Surg,2015,73：1651-1660.

[29]Onuma-Ukegawa M,Bhatt K,Hirai T,et al.Bone Marrow Stromal Cells Combined With a Honeycomb Collagen Sponge Facilitate Neurite Elongation In Vitro and Neural Restoration in the Hemisected Rat Spinal Cord[J].Cell Transplant,2015,24：1283-1297.

（本文編輯：王晶）

R741；R741.05

ADOI10.16780/j.cnki.sjssgncj.2016.05.019

東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院南京 210009

國家自然科學(xué)基金青年基金（No.81300472）

2015-11-1

陳明mingchenseu@126. com