QuEChERS-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定綠茶中33種有機磷農(nóng)藥殘留

王洪濤 白志平 李菲菲 胡杰麗 王成俊 熊家會 王姝婷 孫慶文 蘭梅 陳洪坤

摘要：研究建立了一種綠茶中33種有機磷農(nóng)藥的檢測方法。采用QuEChERS提取凈化，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀定量分析。在25.0～200.0 μg/L質(zhì)量濃度范圍，有機磷的線性相關(guān)系數(shù)（R2）大于0.996;0.010～1.010 mg/kg加標(biāo)水平下，平均回收率為87.5%～99.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為3.6%～6.8%（n=6），各農(nóng)藥定量限均為0.010 mg/kg。該方法簡單快速、重復(fù)性好，適用于綠茶樣品中有機磷的快速檢測需求。

關(guān)鍵詞：QuEChERS;氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜;農(nóng)藥殘留

Determination of 33 Organophosphorus Pesticide

Residues in Green Tea Using QuEChERS-Gas

Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

WANG Hongtao， BAI Zhiping， LI Feifei， HU Jieli， WANG Chengjun， XIONG Jiahui，

WANG Shuting， SUN Qingwen， LAN Mei， CHEN Hongkun

Sichuan Yibin Wuliangye Co.， Ltd.， Yibin 644007， China

Abstract： A multiresidue analytical method for the determination of 33 organophosphorus pesticide residues was

established in green tea. The samples were extracted and purified by using QuEChERS and quantified by triple-quad-

rupole mass spectrometry. The results indicated that the concentrations of 33 pesticide residues had good linearity

relationships in the range of 25.0 ～ 200.0 μg/L， with the correlation coefficients （R2） above 0.996. The average

recovery at different spiking levels （0.010 ～ 1.010 mg/kg） was ranged from 87.5% to 99.4% with RSD （relative

standard deviation， n= 6） 3.59% ～ 6.75%. The LOQ （the limit of quantification） was 0.010 mg/kg. The method was

simple， quick， reliable and appropriate for the simultaneous analysis of multi- organophosphorus in green tea.

Keywords： QuEChERS， gas chromatography-tandem mass spectrometry， pesticide residue

我國是世界上最大的茶葉生產(chǎn)國，茶葉出口量居世界前三[1]。農(nóng)藥的應(yīng)用，對提高茶葉產(chǎn)量，防治病蟲害具有重要意義，但過度使用可導(dǎo)致茶葉中農(nóng)藥殘留超標(biāo)，危害人體健康，阻礙茶葉擴大出口。在各類農(nóng)藥中，有機磷類農(nóng)藥是我國常用農(nóng)藥之一，國家出臺的農(nóng)藥殘留最大限量推薦了茶葉農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)26個[2]。茶葉中農(nóng)藥多殘留檢測的國標(biāo)法及研究主要涉及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[3-6]。茶葉基質(zhì)相對復(fù)雜，有機磷類農(nóng)藥是一類降解迅速，熱不穩(wěn)定性的農(nóng)藥，進一步提升了茶葉中有機磷類農(nóng)藥的檢測難度。

茶葉農(nóng)殘檢測前處理方法有固相萃取與QuEChERS[7-14]，QuEChERS 法快速、藥劑使用量少[15]。QuEChERS凈化劑有N-丙基乙二胺、無水硫酸鎂、活性炭粉末等。N-丙基乙二胺主要用于去除有機酸、極性雜質(zhì)、部分色素與糖類，無水硫酸鎂起到去除水的效果?；钚蕴糠勰江h(huán)類物質(zhì)有強吸附作用。

本研究以四川省宜賓市生產(chǎn)銷售的綠茶為研究對象，選用農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的甲胺磷、久效磷等7種禁限用有機磷農(nóng)藥[16]，敵敵畏、馬拉硫磷等26種常用有機磷農(nóng)藥為研究對象，建立了一種基于QuEChERS提取凈化，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用的檢測方法，可對綠茶中33種有機磷農(nóng)藥進行準(zhǔn)確定性定量檢測，為綠茶產(chǎn)品質(zhì)量控制提供技術(shù)支撐。

一、材料與方法

1. 主要儀器設(shè)備

7890A氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent公司）、HC3204電子天平（上?；ǔ彪娖饔邢薰荆?、KH22離心機（湖南凱達科學(xué)儀器有限公司）、超純水機Plus-E3（南京易普易達科技發(fā)展有限公司）、渦旋混合儀SI-P246型（美國科學(xué)工業(yè)公司）、500A-JRABS粉碎儀（永康市云達機械設(shè)備廠）。

2. 主要材料與試劑

33種有機磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司）;乙腈（色譜純，成都市科隆化學(xué)品有限公司）;N-丙基乙二胺吸附劑;活性炭粉末（青島邦凱高新技術(shù)材料有限公司）;無水硫酸鎂（試劑級，北京利奇世紀(jì)化工有限公司）;纖維素濾膜 （廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）;注射器（2 mL，鄭州康佳醫(yī)療器械有限公司）;離心管（50 mL，邁博瑞生物膜技術(shù)有限公司）。

3. 色譜分析條件

進樣口：280 ℃，不分流，1 μL進樣量;分離柱：DB-1701（30 m ×250 μm， 0.25 μm）;流速：1.0 mL/min;輔助加熱器：280 ℃。柱箱：初始40 ℃（1 min），30 ℃/min速率升至130 ℃，5 ℃/min速率升至310 ℃。

4. 質(zhì)譜分析條件

離子源：280 ℃，四極桿溫度：150 ℃，有機磷農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)設(shè)置見表1。

5. 樣品前處理

（1）制樣。取綠茶樣品50 g，粉碎后-20 ℃保存。

（2）提取。取綠茶1.0 g、純水10 mL、乙腈10 mL于50 mL離心管中，渦旋2 min。

（3）凈化。50 mL離心管中加N-丙基乙二胺300 mg、活性炭粉末400 mg、無水硫酸鎂1 200 mg，渦旋1 min，10 000 r/min離心5 min，過纖維素濾膜，待氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測。

6. 中間儲備液的配制

中間標(biāo)準(zhǔn)儲備液：將33種有機磷農(nóng)藥（100 μg/mL）配制成質(zhì)量濃度為1 μg/mL中間標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-20 ℃保存。

二、結(jié)果與討論

1. 線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)

取經(jīng)測定不含有機磷農(nóng)藥的茶葉樣品，按本研究方法處理，得到綠茶空白基質(zhì)溶液。用空白基質(zhì)溶液將1 000 μg/L農(nóng)藥稀釋成25 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、150 μg/L、200 μg/L線性工作液，供氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定得到各農(nóng)藥線性方程，線性方程及相關(guān)系數(shù)見表2。X為各農(nóng)藥質(zhì)量濃度（μg/L），Y為響應(yīng)值。

2. 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)是指分析物以外的所有物質(zhì)?；|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率比大于1為基質(zhì)增強，小于1為基質(zhì)抑制[15-16]。本研究采用 25.0～200 μg/L兩曲線斜率比較，得到有機磷農(nóng)藥基質(zhì)效應(yīng)如圖1。從圖中可見，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率比均大于1，表明33種有機磷均存在基質(zhì)增強作用。因此，需采用空白基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3. 回收率與精密度

取未施用農(nóng)藥的空白樣品，設(shè)0.010 mg/kg、0.488 mg/kg、1.010 mg/kg的3級加標(biāo)試驗，得到有機磷農(nóng)藥的回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（表3）。從表中可知，平均回收率在87.5% ～ 99.4%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.6% ～ 6.8%（n=6），滿足綠茶中33種農(nóng)藥的快速檢測。不同添加水平下有機磷農(nóng)藥色譜圖如圖2，表明該方法有較高的回收率和較好的精密度，能夠滿足綠茶中有機磷農(nóng)藥的分析檢測。

4. 市售綠茶樣品的檢測

應(yīng)用本方法對200份市售綠茶樣品進行檢測，參試樣品中33種有機磷農(nóng)藥的含量均小于0.010 mg/kg。

為驗證方法的可靠性，進一步進行了茶園田間試驗。在20 m2茶園內(nèi)，對各農(nóng)藥按0.5 mg/m2施藥，12 h后采集鮮葉并制成綠茶，同時樣品加標(biāo)0.010 mg/kg檢測農(nóng)殘，檢出結(jié)果如表4。

田間試驗有機磷農(nóng)藥殘留檢出情況及添加回收率結(jié)果表明，施藥12 h后，各有機磷含量在0.020 ～ 0.029 mg/kg，回收率大于86.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）小于6.8%。表明本研究建立的方法可靠，能夠應(yīng)用于綠茶樣品有機磷農(nóng)藥的檢測。

三、結(jié)論

本研究建立了綠茶樣品中33種有機磷農(nóng)藥組分的檢測方法，使用該方法綠茶樣品不需定量濃縮處理，各有機磷農(nóng)藥定量限為0.010 mg/kg，0.010 ～ 1.010 mg/kg加標(biāo)水平下回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差滿足痕量檢測的要求。該方法檢測耗時短、可靠性好，適用于測定茶葉中敵敵畏等33種有機磷農(nóng)藥的含量。

參考文獻

[1] 冷楊， 尚懷國， 李莉. 2019年我國茶葉進出口貿(mào)易情況簡析[J]. 中國茶葉， 2020， 42（3）： 28-30.

[2] 國家衛(wèi)生健康委員會， 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部， 國家市場監(jiān)督管理總局. 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量： GB 2763—2019[S]. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社， 2019.

[3] 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會， 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部， 國家食品藥品監(jiān)督管理總局. 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品 茶葉中448種農(nóng)藥及其相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜法： GB 23200.13—2016[S]. 北京： 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社， 2016.

[4] 中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會， 中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部， 國家市場監(jiān)督管理總局. 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法： GB 23200.113—2018[S]. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社， 2018.

[5] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢疫總局， 中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. 茶葉中519種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測定氣相色譜-質(zhì)譜法： GB/T 23204—2008[S]. 北京： 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社， 2008.

[6] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢疫總局， 中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. 茶葉中農(nóng)藥多殘留測定 氣相色譜-質(zhì)譜法： GB/T 23376—

2009[S]. 北京： 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社， 2009.

[7] 王吉祥， 牛之瑞， 馮雷， 等. SPE-GC-MS/MS法測定茶葉中49種農(nóng)藥殘留[J]. 食品研究與開發(fā)， 2017， 38 （13）： 173-178.

[8] 曾艷， 郎紅， 楊巧慧， 等. 固相萃取-GC/LC-MS/MS 測定茶葉中79種農(nóng)藥殘留[J]. 茶葉科學(xué)， 2019， 39（5）： 576-586.

[9] 李福敏， 邵林. QuEChERS-氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉中的12種有機氯農(nóng)藥殘留[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報， 2018， 9（6）： 1377-1382.

[10] 陳昌梅， 林明霞， 蘭元. SPE-GC-MS/MS法測定茶葉中的76種農(nóng)藥殘留[J]. 中國茶葉， 2020， 42（12）： 52-61.

[11] 段聯(lián)勃， 徐丹， 高水麗. QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉中氟蟲胺[J]. 中國茶葉，2019， 41（12）： 26-29， 35.

[12] 朱雪琴， 趙薇， 陳坦林， 等. 改良QuEChERS法提取-氣相色譜-火焰光度檢測同時測定茶葉中5種有機磷農(nóng)藥殘留[J]. 分析測試學(xué)報， 2018， 34（2）： 176-180.

[13] 崔鵬， 馬晶， 孫謙. GC-MS/MS結(jié)合改進的QuEChERS方法測定茶葉中多農(nóng)藥殘留[J]. 環(huán)境化學(xué)， 2018， 37（5）： 1175-1178.

[14] 盧森華， 梁爽， 黎強， 等. QuEChERS法與傳統(tǒng)固相萃取法對比檢測茶葉中25種農(nóng)藥[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2019， 58（23）： 176-181，188.

[15] 徐炎炎， 李森， 張芹， 等. 氣質(zhì)聯(lián)用和液質(zhì)聯(lián)用中基質(zhì)效應(yīng)的分析和總結(jié)[J]. 農(nóng)藥， 2017， 56（3）： 162-165.

[16] 周利. 茶葉中禁限用農(nóng)藥和化學(xué)品名單[J]. 中國茶葉， 2019， 41（4）： 51.