非小細(xì)胞肺癌患者細(xì)胞學(xué)標(biāo)本EGFR基因突變檢測(cè)及其臨床病理意義

吳　 娟，杜　 蕓*，王　 珩，吳家寧，趙銀環(huán)，王　 蕊，張　 艷，紀(jì)曉坤（河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院癌檢中心，河北　 石家莊　 050011）

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非小細(xì)胞肺癌患者細(xì)胞學(xué)標(biāo)本EGFR基因突變檢測(cè)及其臨床病理意義

吳 娟，杜 蕓*，王 珩，吳家寧，趙銀環(huán)，王 蕊，張 艷，紀(jì)曉坤
（河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院癌檢中心，河北 石家莊 050011）

【摘要】目的： 探討細(xì)胞學(xué)標(biāo)本在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的診斷及個(gè)體化治療中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法：收集352例新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本制片后，行常規(guī)HE染色；同時(shí)選擇TTF-1、NapsinA、CK7、CEA、CD56、Syn、P63、CK5/6、WT-1、E-cadherin等抗體對(duì)來源不明的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記，并對(duì)明確診斷為NSCLC的病例，采用突變擴(kuò)增阻滯系統(tǒng)(ARMS)檢測(cè)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變情況。結(jié)果：352例患者中，345例有癌細(xì)胞。經(jīng)臨床及免疫細(xì)胞化學(xué)證實(shí)345例惡性細(xì)胞中，NSCLC有335例，且NSCLC細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中有302例DNA提取成功，占90.15%(302/335)。EGFR基因檢測(cè)結(jié)果顯示，EGFR共突變123例，總突變率為40.73%(123/302)。其中，第18、19、20、21外顯子的突變率分別為0.99%(3/302)、19.21%(58/302)、0.66%(2/302)和19.87% (60/302)；EGFR 18、19、21外顯子突變占EGFR突變總數(shù)的98.37%(121/123)顯著高于EGFR 20外顯子突變(P<0.05)。302例患者中，女性患者EGFR 突變率為54.35% (75/138)，明顯高于男性患者29.27%(48/164)(P<0.05)；非吸煙患者EGFR的突變率為51.49%(104/202)，顯著高于吸煙者19%(19/100)(P<0.05)。276例腺癌中EGFR突變率44.20%(122/276)；非腺癌EGFR突變率4.34%(1/23)；腺癌EGFR突變率明顯高于其他類型(P<0.05)。結(jié)論：利用新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記和ARMS分子病理技術(shù)有助于晚期非小細(xì)胞肺癌的診斷，并為表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs)個(gè)體化治療提供可靠依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】細(xì)胞學(xué)標(biāo)本；免疫細(xì)胞化學(xué)；非小細(xì)胞肺癌；突變擴(kuò)增阻滯系統(tǒng)；EGFR基因突變檢測(cè)

作者信息： 吳 娟，E-mail：wujuan199012@163.com。*通信作者，杜 蕓 ，Tel：0311-86095393，E-mail：yydd40@126.com

Detection of EGFR gene mutation in non-small cell lung cancer and its clinical significance

WU Juan，DU Yun*， WANG Heng，WU Jianing，ZHAO Yinhuan，WANG Rui，ZHANG Yan，JI Xiaokun
(Cancer Detection Center of the Fourth Affiliated Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050011, Hebei, China)

【ABSTRACT】OBJECTIVE: To investigate the clinical value of cytological specimens in the diagnosis and the individualized treatment of non-small cell lung cancer(NSCLC). METHODS：Cytological specimens were stained with HE and with immunocytochemical method to detect expression of an appropriate set of antibodies (TTF-1，NapsinA，CK7，CEA，CD56，Syn，P63，CK5/6，WT-1，E-cadherin)，in tumor cells of unknown origin. The epidermal growth factor receptor(EGFR) gene was detected by the amplification refractory mutation system(ARMS) in NSCLC. RESULTS：In 352 patients，345 cases were found cancer cells on the cytological specimens．According to the clinical history and immunocytochemical staining of the 345 malignant cases，335 were NSCLC cytological samples，and the DNA of 302 NSCLC samples were extracted successfully (satisfaction rate at 90.15%). EGFR mutations were detected in 123 of the 302 specimens (40.73%，123/302) and the frequencies of EGFR mutations in exon18，19，20(T790M)，21 were 0.99% (3/302)， 19.21%(58/302)，0.66%(2/302) and 19.87% (60/302)，respectively. Higher frequencies of EGFR mutations were detected in exons 18，19 and 21(98.37%，121/123) than in exon 20(P<0.05). EGFR mutations were more frequently detected in women(54.35%，75/138) than in men (29.27%，48/164)(P<0.05)，and in non-smokers (51.49%，104/202) than in smokers 19%(19/100)(P<0.05). Mutations were identified in 44.20%(122/276) cases of adenocarcinoma and 4.34%(1/23) in nonadenocarcinoma. Mutation of EGFR gene in adenocarcinoma was higher than thatin non-adenocarcinoma(P<0.05). CONCLUSION：The use of cytological specimens in combination with immunocytochemical staining and molecular techniques helps in the diagnosis of advanced cancer and individualized treatment option of NSCLC.

【KEY WORDS】cytological specimens；immunocytochemical；non-small cell lung cancer；amplification refractory mutation system；EGFR gene mutation detection

肺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率、死亡率最高的惡性腫瘤。目前非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的分子靶向治療成為了研究熱點(diǎn)，以易瑞沙(Iressa)為代表的表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑(epidermal growth factor receptor-tyrosinase inhibitor，EGFR-TKI)在NSCLC的治療中取得了很好的療效[1]。研究發(fā)現(xiàn)，EGFR基因突變率在肺腺癌患者明顯高于其他病理類型肺癌患者，并且EGFR基因第18～21外顯子突變情況與EGFR-TKIs藥物的療效有關(guān)[2]。因此，2012 年的NCCN指南中明確提出NSCLC個(gè)體化治療的重要性，指南提出首先必須明確NSCLC的病理學(xué)類型，然后再進(jìn)行EGFR基因檢測(cè)，并對(duì)EGFR基因突變的晚期肺癌患者首選酪氨酸激酶抑制劑治療；對(duì)于無突變患者，則行常規(guī)治療。因此，準(zhǔn)確檢測(cè)患者EGFR基因的突變狀態(tài)，有助于篩選出適合EGFR-TKIs治療的人群，指導(dǎo)臨床個(gè)體化治療以及降低患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前，EGFR基因突變檢測(cè)仍以石蠟組織學(xué)標(biāo)本檢查為主，但是70%以上的肺癌患者在確診時(shí)已成為III～I(xiàn)V期，大部分已失去手術(shù)機(jī)會(huì)，腫瘤組織難以獲取。胸水、心包積液、頸部及鎖骨上淋巴結(jié)細(xì)針穿刺活檢、支氣管刷片以及CT下肺穿刺涂片等細(xì)胞學(xué)檢查方法是肺癌晚期無法手術(shù)患者的主要診斷途徑。本研究旨在探討利用胸水、心包積液、細(xì)針穿刺活檢、纖維支氣管鏡刷片等微創(chuàng)的方法獲得的新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記和突變擴(kuò)增阻滯系統(tǒng)(amplification refractory mutation system，ARMS)分子病理技術(shù)對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌作出明確診斷后再進(jìn)行EGFR基因檢測(cè)，為EGFR-TKIs個(gè)體化治療提供可靠依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

收集河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院2013年12月—2015年1月新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本352例，其中男性184例，女性168例，年齡28～85歲，平均年齡56.5歲。送檢標(biāo)本中，胸腔積液168例，心包積液2例，頸部及鎖骨上淋巴結(jié)細(xì)針穿刺115例，支氣管鏡刷片1例，CT引導(dǎo)下肺穿刺活檢標(biāo)本66例。

1.2 細(xì)胞涂片的制備

1.2.1 體液標(biāo)本 送檢體液標(biāo)本用膜式細(xì)胞采集器(濾膜孔徑8～12 μm)過濾50～100 mL，打開細(xì)胞采集器，用無菌鑷子取出過濾膜，將膜片上截留的細(xì)胞均勻的涂在載玻片上，2張涂片用于常規(guī)HE染色，預(yù)留8張免疫細(xì)胞化學(xué)涂片，剩余標(biāo)本放入20 mL離心管內(nèi)，2 000 r/min離心5 min，以沉淀物多少?zèng)Q定是否將剩余液體全部離心。最后一次離心完畢留取約5 mL上清液，將離心管內(nèi)的細(xì)胞沉淀吹打混勻成細(xì)胞懸液，-20 ℃ 冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 頸部及鎖骨上淋巴結(jié)細(xì)針穿刺及CT引導(dǎo)下肺穿刺活檢標(biāo)本 常規(guī)HE涂片及預(yù)留免疫細(xì)胞化學(xué)涂片后，將穿刺針內(nèi)剩余標(biāo)本放入1.5 mL無菌EP管內(nèi)，-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 支氣管鏡刷片標(biāo)本 任意選取兩張刷片標(biāo)本行常規(guī)HE染色，其余標(biāo)本-20 ℃ 冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

以上標(biāo)本涂片均經(jīng)95%酒精固定5 min后行常規(guī)HE染色，對(duì)涂片中找到癌細(xì)胞的病例再進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)分型及后續(xù)的分子病理檢測(cè)。

1.3 免疫細(xì)胞化學(xué)

采用SP法進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色。根據(jù)病人的臨床資料及顯微鏡下HE染色細(xì)胞學(xué)形態(tài)選擇相應(yīng)抗體，常規(guī)選擇TTF-1、NapsinA、CK7、CEA、CD56、Syn、P63、CK5/6、WT-1、E-cadherin等抗體對(duì)來源不明的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記。所用抗體均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。常規(guī)設(shè)置陽性及陰性對(duì)照。免疫細(xì)胞化學(xué)染色步驟：首先將預(yù)留的細(xì)胞涂片于95%酒精固定15 min，風(fēng)干，蒸餾水水洗；再置于3%過氧化氫溶液中15 min，蒸餾水水洗；高壓抗原修復(fù)1.5 min后PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min；然后滴加動(dòng)物非免疫血清封閉非特異性抗原，室溫孵育20 min；棄去多余血清后滴加一抗，放置濕盒內(nèi)4 ℃過夜；PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min；棄去多余水分，滴加二抗，室溫孵育20 min后PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min；最后DAB顯色3 min，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核。

1.4 EGFR基因突變檢測(cè)

1.4.1 新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本DNA的提取 釆用QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen GmbH，德國(guó))試劑盒提取新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本DNA，具體操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。將收集好的DNA在紫外分光光度計(jì)下進(jìn)行DNA濃度及純度的檢測(cè)，確保DNA的濃度在5～1 500 ng/μL，DNA D(260)/D(280)值在1.8～2.0之間，4 ℃或-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 EGFR基因突變檢測(cè) 對(duì)經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)及臨床資料證實(shí)為NSCLC的病例，采用上海源奇公司研發(fā)的人類EGFR基因突變檢測(cè)試劑盒(ARMS法)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測(cè)EGFR基因18～21號(hào)外顯子的突變。具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，反應(yīng)體系為25 μL，40個(gè)循環(huán)，在ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行，每次上機(jī)檢測(cè)均設(shè)置一個(gè)陽性對(duì)照和一個(gè)陰性對(duì)照。根據(jù)試劑盒說明書上結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)PCR反應(yīng)擴(kuò)增曲線及CT值 進(jìn)行分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用四格列聯(lián)表χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，當(dāng)理論頻數(shù)小于5或總觀測(cè)頻數(shù)小于30時(shí)，用Fisher的概率檢驗(yàn)法。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)胞涂片質(zhì)量控制

在選取的352例患者中經(jīng)兩位有經(jīng)驗(yàn)的細(xì)胞學(xué)病理醫(yī)師診斷，判讀結(jié)果345例為找到癌細(xì)胞的病例，并且細(xì)胞涂片中癌細(xì)胞的數(shù)量占整個(gè)涂片細(xì)胞數(shù)量的25%以上(每張涂片上癌細(xì)胞的數(shù)量≥200個(gè))。

2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)分型

345例經(jīng)判讀為找到癌細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本均行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果提示及臨床其他輔助檢查證實(shí)，肺腺癌303例，肺鱗狀細(xì)胞癌32例，肺小細(xì)胞癌2例，乳腺癌1例；7例起源不明，免疫細(xì)胞化學(xué)無特異性表達(dá)(圖1)。

A：膜式細(xì)胞采集器胸水細(xì)胞涂片(肺腺癌，腺癌細(xì)胞保留完整微小乳頭狀結(jié)構(gòu)，HE染色)；B：肺腺癌細(xì)胞CEA呈強(qiáng)陽性，細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色(SP 法)；C：肺腺癌細(xì)胞CK7呈強(qiáng)陽性，細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色(SP法)；D：肺腺癌細(xì)胞E-cadherin呈強(qiáng)陽性，細(xì)胞膜呈棕黃色(SP法)；E：肺腺癌細(xì)胞NapsinA呈強(qiáng)陽性，細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色顆粒狀(SP法)；F：肺腺癌細(xì)胞TTF-1呈強(qiáng)陽性，細(xì)胞核呈棕黃色(SP法).圖1 免疫細(xì)胞化學(xué)染色(×200)

2.3 標(biāo)本DNA提取及質(zhì)量控制

將篩選出的335例NSCLC的病例進(jìn)行新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本DNA提取，其中有302例標(biāo)本DNA提取成功，占90.15%。將提取的DNA在紫外分光光度計(jì)下進(jìn)行DNA濃度及純度的檢測(cè)，結(jié)果本研究中所提取DNA的濃度及純度均在質(zhì)控范圍內(nèi)。

2.4 EGFR基因突變情況

2.4.1 EGFR基因突變率及突變類型 302例新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本EGFR基因檢測(cè)結(jié)果顯示，EGFR共突變123例，總突變率為40.73%(123/302)。其中，第18外顯子突變率為0.99%(3/302)；第19外顯子突變率為19.21% (58/302)；第20外顯子T790M突變率為0.66%(2/302)；第21外顯子突變率為19.87%(60/302)；EGFR 18、19、21外顯子突變占EGFR突變總數(shù)的98.37%(121/123)，顯著高于EGFR 20外顯子突變(P<0.05)。

2.4.2 EGFR基因突變與臨床病理特征的關(guān)系 302例患者中，女性患者EGFR突變率為54.35%(75/138)，明顯高于男性患者29.27%(48/164)(P<0.05)。在病人是否吸煙的因素中分析發(fā)現(xiàn)，非吸煙患者EGFR的突變率為51.49%(104/202)，顯著高于吸煙患者19%(19/100) (P<0.05)。隨訪截至到2015年1月，所有標(biāo)本經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)及臨床其他輔助檢查證實(shí)，其中腺癌276例，EGFR基因突變率44.20%(122/276)；非腺癌23例，EGFR基因突變率4.34%(1/23)。EGFR基因突變與臨床病理特征的關(guān)系見表1。

表1 EGFR基因突變與臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

在NSCLC的治療上，以易瑞沙為代表的EGFRTKI因其療效顯著和作用明顯而引起廣泛重視[1]。大量研究結(jié)果顯示，EGFR基因突變是決定EGFR-TKIs療效的最重要預(yù)測(cè)因子，而EGFR突變的優(yōu)勢(shì)人群是亞裔、女性、無吸煙史的腺癌患者[2]。通過這種優(yōu)勢(shì)人群的篩選可使EGFR-TKIs藥物的療效提高到70%以上。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC的人群選擇性與表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶區(qū)域的基因突變有關(guān)[3]。不同位點(diǎn)突變的生物學(xué)功能有所不同，例如，EGFR 18、 19、21外顯子突變的NSCLC對(duì) EGFR-TKIs具有良好的療效，而20外顯子中T790M突變時(shí)是形成EGFRTKIs繼發(fā)性耐藥的重要機(jī)制之一[4]。近期，易瑞沙已進(jìn)入NSCLC的一線治療，在采用易瑞沙治療前應(yīng)先檢測(cè)EGFR基因的突變狀況[5]。因此，如何快速準(zhǔn)確地檢測(cè)出EGFR基因的突變狀況，成為病理學(xué)工作者協(xié)助臨床醫(yī)生進(jìn)行治療的一項(xiàng)重要任務(wù)。

大多數(shù)NSCLC患者在初次就診時(shí)即為晚期，無法通過手術(shù)方式獲取組織學(xué)標(biāo)本。本研究中我們選取胸腔積液、心包積液、頸部及鎖骨上淺表淋巴結(jié)細(xì)針穿刺、CT引導(dǎo)下肺穿刺小活檢標(biāo)本及纖維支氣管鏡刷片幾種常見的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本作為研究對(duì)象。而獲取這些標(biāo)本具有操作風(fēng)險(xiǎn)小，細(xì)胞病理學(xué)診斷準(zhǔn)確率高、可重復(fù)性強(qiáng)等特點(diǎn)。我們提取302例新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本的DNA，成功率為90.15% (302/335)，DNA濃度均在5～1 500 ng/μL，D(260)/D(280)值均在1.8～2.0之間。比石蠟包埋組織提取的DNA滿意率高。原因可能是從石蠟包埋的組織塊中提取DNA，腫瘤細(xì)胞經(jīng)過福爾馬林固定、無水乙醇脫水、包埋等多種理化因素刺激后，使腫瘤細(xì)胞的DNA片段化嚴(yán)重進(jìn)而影響到基因檢測(cè)結(jié)果。而新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，DNA結(jié)構(gòu)能夠保存完好，所以使EGFR基因檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確、可靠。

ARMS法具有較高的敏感度，同時(shí)操作簡(jiǎn)單，質(zhì)量控制體系完善，具有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究采用ARMS法商品化試劑盒檢測(cè)302例NSCLC患者新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中EGFR基因突變狀態(tài)，檢測(cè)結(jié)果顯示，EGFR總突變率為40.73%(123/302)。其中，第18外顯子突變率為0.99%(3/302)；第19外顯子缺失突變率為19.21% (58/302)；第20外顯子T790M突變率為0.66% (2/302)；第21外顯子突變率為19.87%(60/302)；EGFR 18、19、21外顯子突變占EGFR突變總數(shù)的98.37% (121/123)顯著高于EGFR 20外顯子突變(P<0.05)。與已經(jīng)報(bào)道的亞洲大型臨床研究Lee等[6]的研究結(jié)果相近。本研究302例患者中，女性患者EGFR突變率為54.35% (75/138)，明顯高于男性患者29.27% (48/164)(P<0.05)。在病人是否吸煙的因素中分析發(fā)現(xiàn)，非吸煙者EGFR的突變率為51.49%(104/202)，顯著高于吸煙者19% (19/100)(P<0.05)。隨訪截至到2015年1月，所有標(biāo)本經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)及臨床其他輔助檢查證實(shí)，其中腺癌276例，EGFR基因突變率44.20% (122/276)；非腺癌23例，EGFR基因突變率4.34% (1/23)；肉瘤樣癌2例，癌肉瘤1例均未發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變。胸腔積液標(biāo)本EGFR基因的突變率為49.32%， 明顯高于其他標(biāo)本類型；Ⅲ～Ⅳ期病人EGFR基因的突變率為43.18%，明顯高于I～I(xiàn)I病人。與文獻(xiàn)報(bào)道女性、不吸煙和腺癌患者EGFR基因突變率高于男性、吸煙和非腺癌患者的結(jié)果相一致[7]。

應(yīng)用分子靶向藥物前應(yīng)首先進(jìn)行EGFR基因突變檢測(cè)，使用小活檢切除標(biāo)本或者手術(shù)后石蠟包埋切片標(biāo)本的EGFR檢測(cè)結(jié)果已經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道[8-10]。胸腔積液石蠟包埋細(xì)胞塊標(biāo)本，以及粗針穿刺獲取標(biāo)本制成石蠟包埋塊檢測(cè)EGFR的基因突變?cè)趪?guó)內(nèi)也有報(bào)道[11-13]。當(dāng)今臨床提倡腫瘤患者診斷和治療應(yīng)該采取損傷小，患者痛苦少的方法。尤其對(duì)于一些就診時(shí)已經(jīng)是晚期，出現(xiàn)胸腔積液或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，我們應(yīng)用新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本做出診斷后，剩余的細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行DNA提取，進(jìn)而行EGFR基因檢測(cè)，國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道。對(duì)于晚期肺癌患者，細(xì)胞學(xué)標(biāo)本取材容易，創(chuàng)傷小，是其重要的標(biāo)本來源。本研究應(yīng)用新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記明確診斷為NSCLC后采用ARMS法進(jìn)行EGFR基因檢測(cè)，陽性率與手術(shù)切除組織標(biāo)本相似。本實(shí)驗(yàn)室的方法首先可以明確細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中是否有癌細(xì)胞，其次可以了解癌細(xì)胞量是否滿足要求，因此結(jié)果更為準(zhǔn)確、可靠。應(yīng)用新鮮細(xì)胞學(xué)標(biāo)本進(jìn)行EGFR基因檢測(cè)將有助于篩選出應(yīng)用靶向藥物治療受益的NSCLC人群，為更加精確、合理的為EGFRTKIs個(gè)體化治療提供理論依據(jù)。

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基金項(xiàng)目：河北省科技廳項(xiàng)目(14277782D)

收稿日期：2015-06-01；

修訂日期：2015-10-28

中圖分類號(hào)：R734.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1004-616X(2016)01-0027-05

doi:1 0.3969/j.issn.1004-616x.2016.01.006