母體高效價(jià)IgG類抗-D抗體致新生兒溶血病相關(guān)免疫指標(biāo)檢測(cè)及其臨床意義

張業(yè)翠，武 文，吳 鵬，張志波

母體高效價(jià)IgG類抗-D抗體致新生兒溶血病相關(guān)免疫指標(biāo)檢測(cè)及其臨床意義

張業(yè)翠，武 文，吳 鵬，張志波＊

目的 通過確定懷有畸形兒的孕婦血清中存在的不規(guī)則抗體的性質(zhì)及效價(jià)，以評(píng)估其引起新生兒溶血病的風(fēng)險(xiǎn)。方法利用微柱凝膠檢測(cè)法及試管法鑒定孕婦ABO及RH血型，使用試管法和抗人球法對(duì)患者血清中的不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查鑒定，并測(cè)定抗體效價(jià)。結(jié)果患者血型為“B”dccee，血清中存在IgG抗-D，效價(jià)為2048。結(jié)論高效價(jià)的抗-D免疫球蛋白可致Rh系統(tǒng)新生兒溶血病。

Rh血型；抗-D免疫球蛋白；新生兒溶血病

母嬰血型不合引起的新生兒溶血病（hemolytic disease of the newborn，HDN）是因?yàn)槟阁wIgG類血型抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，與相應(yīng)紅細(xì)胞結(jié)合，導(dǎo)致胎兒或者新生兒紅細(xì)胞破壞，發(fā)生溶血反應(yīng)。最容易引起溶血反應(yīng)的兩個(gè)血型系統(tǒng)為ABO血型和Rh血型系統(tǒng)，而RhD血型不合導(dǎo)致的HDN尤為嚴(yán)重。新生兒的主要表現(xiàn)有溶血性貧血、心力衰竭、黃疸和水腫等［1］。如果在孕期不能及早做出診斷，易導(dǎo)致胎兒畸形、胎死宮內(nèi)、新生兒黃疸或死亡。所以，對(duì)圍產(chǎn)期孕婦進(jìn)行血清抗體效價(jià)檢測(cè)（尤其是有妊娠史的RhD陰性的孕婦），并采取積極的預(yù)防及治療措施，能有效地避免新生兒溶血病的發(fā)生或減輕臨床癥狀。筆者在血清學(xué)檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)1例孕婦因存在高效價(jià) IgG類抗-D抗體，引起胎兒發(fā)生Rh新生兒溶血病。為探討其發(fā)生原因，進(jìn)行了相關(guān)試驗(yàn)研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 病例資料 患者，女，26歲。妊娠37+4周，因“胎兒畸形”于2014-11-03入院。超聲檢查顯示：羊水指數(shù)10.1，胎兒胸腔、心包內(nèi)探及少量液性暗區(qū)，腹腔探及大量液性暗區(qū)，前后徑約102 mm，并可見膜樣回聲漂浮。入院診斷：妊娠37+4周，胎兒畸形。孕婦生產(chǎn)史：2007年藥物流產(chǎn)1次，2008年人工流產(chǎn)1次，2009年再次懷孕，2010年于當(dāng)?shù)劓?zhèn)衛(wèi)生院剖宮產(chǎn)一女嬰現(xiàn)健康存活。無輸血史。孕婦前三次懷孕均未進(jìn)行血型鑒定。

1.2 試劑與儀器 單克隆抗-A、抗-B（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20140716）；抗D（IgM）試劑 （上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20140926）；ABO血型正/反定型和RhD血型微柱凝膠檢測(cè)卡（Diamed公司，批號(hào)：50093.60.04）；抗-C、抗-c、抗-E、抗-e（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20140716）；試劑ABO細(xì)胞為本室自制。Rh陰性確認(rèn)試劑：（1）抗D（IgG/IgM）試劑（Sanquin公司，批號(hào) 8000194872）；（2）抗 D（IgM/IgG）試劑（Millipore公司，批號(hào)：BMH1305D）；（3）抗D（IgG）試劑 （上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20130930）。抗體篩選細(xì)胞 （Sanquin公司，批號(hào)8000210308）。低離子抗人球蛋白卡（Diamed公司，批號(hào)：50531.85.07）?？贵w鑒定譜細(xì)胞 （Sanquin公司，批號(hào)8000209217）。KUBOTA KA-2200細(xì)胞洗滌離心機(jī)（日本久保田公司），水浴箱HH.W21.420（天津泰斯特公司），全自動(dòng)血型配血分析儀IH-1000（BIO-RAD公司），DiaMed孵育器和離心機(jī)（Diamed公司）。

1.3 血型鑒定 使用微柱凝膠檢測(cè)法對(duì)患者血型進(jìn)行鑒定，取EDTA抗凝血2 ml，3000轉(zhuǎn)離心3 min，使用全自動(dòng)血型配血分析儀IH-1000進(jìn)行血型鑒定。因微柱凝膠檢測(cè)法結(jié)果顯示ABO正反定型不符，為排除假陽性凝集，即用試管法復(fù)查ABO血型。Rh（D）血型使用微柱凝膠檢測(cè)法檢測(cè)結(jié)果顯示為陰性，即用試管法進(jìn)行Rh血型分型鑒定。Rh陰性確認(rèn)試驗(yàn)：取低離子抗人球蛋白卡1張，每個(gè)微柱孔加入被檢者0.8%的紅細(xì)胞生理鹽水懸液各5 μl，再分別加入3種不同廠家的Rh陰性確認(rèn)試劑各25 μl，放入DiaMed專用孵育器孵育15 min，后放入DiaMed專用離心機(jī)，3000轉(zhuǎn)離心10 min，判讀結(jié)果。

1.4 不規(guī)則抗體篩選 應(yīng)用篩選細(xì)胞進(jìn)行抗體篩選，明確或排除不規(guī)則抗體的存在。（1）試管法。取小試管3只標(biāo)明1、2、3，分別加入5%的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)篩選細(xì)胞1滴及患者血清各2滴，放入KUBOTA KA-2200細(xì)胞洗滌離心機(jī)，3500轉(zhuǎn)離心15S，判讀結(jié)果。（2）抗人球法。取低離子抗人球蛋白卡1張，標(biāo)明1、2、3，分別加入0.8%的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)篩選細(xì)胞50 μl，患者血清各25 μL，放入DiaMed專用孵育器孵育15 min，后放入DiaMed專用離心機(jī)離心10 min，判讀結(jié)果。

1.5 抗體鑒定 用譜細(xì)胞進(jìn)行抗體鑒定，確定不規(guī)則抗體的特異性。操作步驟同不規(guī)則抗體篩選。

1.6 抗體效價(jià)測(cè)定 取小試管12只分別標(biāo)注號(hào)碼，各管均加入生理鹽水200 μl，吸取患者血清200 μl加入第1管中，混勻，從第1管吸取200 μl加入第2管中，倍比稀釋至第12管，從第12管吸取200 μl棄掉，從第1管血清的稀釋倍數(shù)分別為：1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，1∶256，1∶512，1∶1024，1∶2048，1∶4096。取低離子抗人球蛋白卡2張，每個(gè)微柱孔從1到12分別標(biāo)注號(hào)碼，并加入0.8%“O”型Dccee譜細(xì)胞各50 μl，分別加入對(duì)應(yīng)號(hào)碼試管中的稀釋血清25 μl，放入DiaMed專用孵育器孵育15 min，后放入DiaMed專用離心機(jī)離心10 min，判讀結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 血型鑒定結(jié)果 微柱凝集實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ABO正反定型不符，正定型血型為B型，反定型A、B細(xì)胞均凝集。鹽水法鑒定ABO血型為B型，Rh血型為dccee（表1）。Rh（D）陰性確認(rèn)試驗(yàn)為陰性。其配偶ABO血型為“B”型，Rh血型為dccee。

表1 患者血型鑒定反應(yīng)結(jié)果

2.2 不規(guī)則抗體篩選結(jié)果 患者血清與抗篩Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號(hào)細(xì)胞鹽水法均為陰性，抗人球蛋白卡結(jié)果為陽性（表2）。

表2 患者血清與抗體篩選細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果

2.3 抗體鑒定結(jié)果 患者血清與譜細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果顯示患者血清中存在不規(guī)則抗體為IgG抗-D（表3）。

2.4 抗體效價(jià)測(cè)定結(jié)果 孕婦血清與“O”dccee譜細(xì)胞做抗體效價(jià)測(cè)定，IgG抗-D效價(jià)為2048。

3 討論

Rh血型系統(tǒng)是人類血型系統(tǒng)中較為復(fù)雜的一種，其中D抗原具有很強(qiáng)的免疫原性，在胎兒紅細(xì)胞上發(fā)育完善，故IgG類抗-D抗體是引起新生兒Rh血型不合溶血病的重要原因之一。一般認(rèn)為，異型輸血和妊娠免疫是血型為Rh（D）陰性孕婦產(chǎn)生抗-D抗體的重要原因，若Rh（D）陰性孕婦初次孕育的胎兒血型為Rh（D）陽性，胎兒紅細(xì)胞經(jīng)胎盤進(jìn)入母體，刺激母體發(fā)生免疫致敏反應(yīng)，當(dāng)再次懷孕時(shí)抗D抗體不同程度的通過胎盤屏障進(jìn)入胎兒循環(huán)導(dǎo)致流產(chǎn)、胎兒水腫、黃疸、貧血、胎兒死亡等很多新生兒溶血相關(guān)疾病的發(fā)生［2］。隨懷孕次數(shù)增加，母體產(chǎn)生IgG抗-D抗體滴度升高，胎兒患新生兒溶血病概率增高，病情加重。該病例中患者在多次流產(chǎn)、妊娠過程中均未進(jìn)行輸血相容性檢測(cè)，直至本次入院才發(fā)現(xiàn)因夫婦、母嬰Rh血型不相合而刺激孕婦產(chǎn)生IgG抗-D抗體，抗體效價(jià)高達(dá)2048?；颊呓K止妊娠，娩出死胎，胎兒嚴(yán)重畸形。通過試驗(yàn)可確診為新生兒Rh血型溶血病。

表3 患者血清與譜細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果

Rh血型系統(tǒng)新生兒溶血病的發(fā)病率雖然不及ABO血型系統(tǒng)的發(fā)病率高，但病情嚴(yán)重。為了預(yù)防和減輕Rh新生兒溶血病的發(fā)生應(yīng)采取以下預(yù)防措施：對(duì)初次妊娠的婦女產(chǎn)前檢查時(shí)應(yīng)常規(guī)檢測(cè)Rh血型，對(duì)于Rh血型鑒定為Rh（D）陰性的妊娠期婦女，需同時(shí)鑒定其配偶的Rh血型，以便于判斷Rh新生兒溶血病的發(fā)病概率。對(duì)有過妊娠史或流產(chǎn)史的Rh（D）陰性孕婦需做不規(guī)則抗體篩選及抗體鑒定。我國(guó)最新發(fā)布的《特殊情況緊急搶救輸血推薦方案》推薦，無抗-D的Rh（D）陰性患者，特別是育齡期婦女和女童，輸注Rh（D）陽性供者細(xì)胞成分后，有條件者應(yīng)盡快注射抗-D免疫球蛋白以預(yù)防抗體產(chǎn)生［3］。已知血型為Rh（D）陰性的育齡婦女，還應(yīng)避免多次流產(chǎn)或妊娠以減少免疫機(jī)會(huì)［4］。懷孕期間在可能致敏事件發(fā)生72 h內(nèi)盡早注射抗-D免疫球蛋白，如果因故錯(cuò)過該時(shí)限，10 d內(nèi)注射可能仍具有一定保護(hù)作用［5］。而本病例中患者在本次妊娠前的多次流產(chǎn)和妊娠中均未預(yù)防性注射抗-D免疫球蛋白，這也是胎兒發(fā)生新生兒溶血病的主要原因之一。對(duì)夫婦血型不相配合的Rh（D）陰性孕婦，應(yīng)在孕18~20周做一次抗體效價(jià)測(cè)定作為基礎(chǔ)水平，以后每隔4周重復(fù)測(cè)定一次，檢測(cè)抗體上升速度。當(dāng)抗D的效價(jià)達(dá)到16時(shí)，預(yù)示胎兒發(fā)生Rh新生兒溶血病的概率增加，如果抗體水平持續(xù)升高，表示病情可能嚴(yán)重，則需要在妊娠中期開始給予積極的治療。目前臨床多采用中西結(jié)合的方法治療新生兒溶血病［6，7］。如果本患者在產(chǎn)前檢查過程中能及時(shí)地進(jìn)行抗體效價(jià)測(cè)定并對(duì)產(chǎn)生的抗體進(jìn)行積極的治療，可以有效預(yù)防或減輕Rh新生兒溶血病的發(fā)生。

該研究提示，對(duì)孕齡婦女做好孕檢教育及孕前ABO血型和Rh血型檢測(cè)，同時(shí)，對(duì)有過妊娠史或流產(chǎn)史的Rh（D）陰性孕婦定期做不規(guī)則抗體篩選及抗體鑒定，適時(shí)監(jiān)測(cè)抗體效價(jià)并積極進(jìn)行干預(yù)治療，可以有效預(yù)防或減輕Rh新生兒溶血病的發(fā)生，對(duì)降低圍產(chǎn)期死亡率，保證新生兒生命健康有著重要的臨床意義。

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［2］周 紅，王 青，劉道偉．妊娠婦女產(chǎn)前不規(guī)則抗體檢測(cè)分析［J］．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（12）：1504-1505．

［3］中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)輸血科醫(yī)師分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)臨床輸血學(xué)分會(huì)．特殊情況緊急搶救輸血推薦方案［J］．中國(guó)輸血雜志，2014，27（1）：1-3．

［4］王立萍，閻東河，趙月凱．多次輸血、妊娠產(chǎn)生Rh血型抗體16例［J］．中國(guó)輸血雜志，2005，18（3）：249-250．

［5］任少敏，劉獻(xiàn)成，王同顯．英國(guó)預(yù)防新生兒溶血病抗-D免疫球蛋白應(yīng)用指南解讀［J］．中國(guó)輸血雜志，2014，27（6）：673-678．

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［2016－03－12收稿，2016－04－10修回］ ［本文編輯：吳 蓉］

Detection of relevant immuno-indexes and their clinical significance of the newborn babie's hemolytic disease caused by the mother's high titer IgG anti-D antibody

ZHANG Ye-cui，WU Wen，WU Peng，et al.Department of Blood Transfusion，the General Hospital of Jinan Military Region，Jinan，Shandong 250031，China

ObjectiveThrough determining the titre of the irregular antibodies in serum of pregnant women with the malformation to assess risk of the newborn's hemolytic disease caused by the antibody.MethodsThe ABO and Rh blood typing with microcolumn gel test and test tube methord were taken，and the titter of the irregular antibodies were detected with anti-human globulin test.ResultsThe blood group of the pregnant women was"B"dccee，and the titer of anti-D IgG was 2048.ConclusionOf newborn babie's hemolytic disease of caused by the pregnant women's high titer anti-D IgG.

Rh blood group；Anti-D IgG；Hemolytic disease of the newborn

R457.1+1

A

10.14172/j.issn1671-4008.2016.09.006

250031山東濟(jì)南，濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院輸血科（張業(yè)翠，武文，吳鵬，張志波）

張志波，Email：zzb9063@sina.com